齊浩銘，仝慧慧，范維佳，王 辰，莫麗冬，徐立霞，么秀華，黃慧玲

（1.天津醫(yī)科大學(xué)研究生院，天津300070；2.南開大學(xué)附屬環(huán)湖醫(yī)院，天津市神經(jīng)外科研究所，天津市腦血管與神經(jīng)變性重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，天津300350）

?；撬幔═aurine，Tau），又稱2-氨基乙烷磺酸，是體內(nèi)豐富存在的β-氨基酸，占人體總質(zhì)量的約0.1%，在體內(nèi)以自由狀態(tài)存在，是一種調(diào)節(jié)機(jī)體正常生理活動(dòng)的非蛋白氨基酸，具有維持細(xì)胞滲透壓[1]、調(diào)節(jié)細(xì)胞內(nèi)Ca2+濃度[2]、增強(qiáng)細(xì)胞膜抗氧化能力、調(diào)節(jié)脂類消化與吸收、維持機(jī)體正常發(fā)育[3]等廣泛的生物學(xué)作用。Tau 在大腦、骨骼肌、心臟、肝臟和視網(wǎng)膜有非常高的含量，通常高達(dá)20～43 mmol/L[4]。人體所需的?；撬嵊袃蓷l主要來源，一是在體內(nèi)由肝臟中的甲硫氨酸和半胱氨酸生物合成，二是由體外食物攝取，食物攝取為補(bǔ)充牛磺酸的主要方式，要維持細(xì)胞內(nèi)的高濃度Tau，主要是通過?；撬徂D(zhuǎn)運(yùn)體的轉(zhuǎn)運(yùn)得以實(shí)現(xiàn)。

?；撬徂D(zhuǎn)運(yùn)體（Taurine transporter，TauT）是由SlC6A6基因編碼的一種Na+、CI-依賴性膜轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白，具有12 個(gè)疏水跨膜結(jié)構(gòu)域[5]。TauT 在神經(jīng)系統(tǒng)中廣泛分布，具有保障細(xì)胞的正常體積，維持細(xì)胞穩(wěn)態(tài)[6]；促進(jìn)大腦生長(zhǎng)發(fā)育等作用。有研究顯示[7]，TauT 在小鼠胚胎的神經(jīng)前體細(xì)胞中表達(dá)活躍，其活性的上調(diào)增強(qiáng)了?；撬酦a+/CI-依賴的轉(zhuǎn)運(yùn)途徑，使?；撬峥梢杂行У卦诩?xì)胞內(nèi)大量積累，促進(jìn)神經(jīng)前體細(xì)胞的增殖。

哺乳動(dòng)物體內(nèi)的TauT 具有高度同源性[8]。為了更好地研究TauT 和Tau 在某一疾病中的作用機(jī)制，以往的研究方法主要是通過實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的體外給與Tau 或阻斷TauT 活性的給藥方式，穩(wěn)定性較差。本研究采用神經(jīng)系統(tǒng)特異性啟動(dòng)子PDGF 啟動(dòng)子，利用轉(zhuǎn)基因技術(shù)構(gòu)建了在中樞神經(jīng)系統(tǒng)特異性表達(dá)TauT 的轉(zhuǎn)基因SD 大鼠（TauT+/-大鼠）并進(jìn)行鑒定和繁殖，為后續(xù)研究Tau 及TauT 在神經(jīng)系統(tǒng)疾病中的作用和機(jī)制提供理想的模型。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 TauT+/-大鼠委托中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院北京實(shí)驗(yàn)動(dòng)物研究所進(jìn)行構(gòu)建 [SCXK 京2013-0002]，轉(zhuǎn)基因大鼠及野生型大鼠飼養(yǎng)和繁殖于中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院放射醫(yī)學(xué)研究所屏障環(huán)境[SYXK 津2014-0002]，所有大鼠于溫度（22～27 ℃）和濕度（50%～60%）的環(huán)境中飼養(yǎng)，12 h 的光/暗循環(huán)并給予足量飼料及水源。所有程序操作均符合實(shí)驗(yàn)動(dòng)物倫理學(xué)要求，動(dòng)物實(shí)驗(yàn)倫理審查證明編號(hào)：DWLL-20180916、DWLL-20180917。

1.2 實(shí)驗(yàn)材料 EasyPure Genomic DNA kit（北京全式金生物技術(shù)有限公司，EE101-12），Genstar2×Taq PCR StarMix with Loading Dye（深圳輝諾生物科技有限公司，A112-10），RNA simple Total RNA kit、反轉(zhuǎn)錄試劑盒、SYBR 法熒光定量PCR 試劑盒（北京天根生物科技有限公司，DP419、KR118、FP205）、高效RIPA 裂解液（索萊寶，R0010）、pmsf 蛋白酶抑制劑（美國Thermo，36978）、TauT 一抗（美國Santa Cruz，sc-166640）、β-actin 一 抗（博 奧 森 生 物，bs-10966R）、辣根酶標(biāo)記山羊抗鼠二抗、辣根酶標(biāo)記山羊抗兔二抗（中杉金橋，ZB-2305、ZB-2301）；Fusion x7 凝膠成像系統(tǒng)（Syngene，美國）、高速冷凍離心機(jī)（Beckman，美國）、實(shí)時(shí)熒光定量PCR 儀（Roche LightCycler 480，美國）。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 TauT+/-大鼠的構(gòu)建 于NCBI 網(wǎng)站找到TauT基因（Slc6a6solute carrier family 6，Gene ID:29464），將其CDs 擴(kuò)增后插入至pPDGF4（+）質(zhì)粒的NheI 和XbaI 之間，構(gòu)建含有神經(jīng)特異性啟動(dòng)子PDGF-B 驅(qū)動(dòng)大鼠Slc6a6基因表達(dá)的真核表達(dá)載體pDGF4(+)-Slc6a6。轉(zhuǎn)基因載體用PvuI 酶切線性化后（線性化位點(diǎn)CGAT/CG 1:5129）調(diào)整濃度至5 ng/μL，用顯微注射法將上述線性化片段注射入SD 大鼠受精卵內(nèi)，經(jīng)短暫體外培養(yǎng)后篩檢存活胚胎移植入假孕受體大鼠輸卵管,待其自然產(chǎn)下新生大鼠F0 代。

1.3.2 PCR 鑒定TauT+/-大鼠基因型 轉(zhuǎn)基因大鼠出生10~12 d 用剪趾法編號(hào)，收集剪下的腳趾組織，使用全式金（Transgen）公司基因組DNA 提取試劑盒提取大鼠基因組DNA，經(jīng)Genstar 試劑盒PCR 擴(kuò)增后，用1.5%的瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)轉(zhuǎn)基因大鼠基因型。PCR 反應(yīng)體系20 μL，反應(yīng)條件：95 ℃預(yù)變性15 min，95 ℃變性30 s，61 ℃退火30 s，72 ℃延伸1 min，30 個(gè)循環(huán)。引物由上海英濰捷基生物技術(shù)有限公司合成：上游引物5′-GGTGCATTCCTCATACCGTATTTTA-3′；下游引物5′-GGCGGCTGATGTTAGGGTAC-3′。陽性雜合子（TauT+/-大鼠）的PCR擴(kuò)增產(chǎn)物為625bp 的DNA 片段；陰性大鼠（TauT-/-大鼠）無此帶。

1.3.3 TauT+/-大鼠的繁育 將F0 代TauT+/-大鼠與野生型大鼠1：1 合籠交配，繁殖得到F1 代大鼠，DNA 鑒定篩選TauT+/-大鼠，幼鼠三周離乳后雌雄分籠飼養(yǎng)。待F1 代大鼠長(zhǎng)至2 月齡左右，將同一父本母本的F1 代大鼠TauT+/-大鼠雄性與雌性1：1 合籠，以期產(chǎn)生更多陽性F2 代大鼠。

1.3.4 一般情況的觀察 每周更換2 次墊料，觀察大鼠精神狀態(tài)、毛色、運(yùn)動(dòng)、進(jìn)食等多個(gè)方面情況并拍照。記錄大鼠2～8 月齡時(shí)的體質(zhì)量并繪制成生長(zhǎng)曲線。記錄大鼠合籠后的死亡率及陽性率。

1.3.5 TauT+/-大鼠臟器質(zhì)量和臟器系數(shù)的測(cè)定 取5 月齡TauT+/-大鼠和TauT-/-大鼠，禁食12 h，麻醉大鼠后斷頸處死，取大鼠大腦、小腦、心、肺、肝、腎、脾、胰腺、骨骼肌等器官，剔除表面殘余脂肪與筋膜，生理鹽水充分洗凈并吸干水分后進(jìn)行稱重，按照公式計(jì)算臟器系數(shù)（臟器系數(shù)=臟器質(zhì)量/體質(zhì)量×100%）和臟腦系數(shù)（臟腦系數(shù)=臟器質(zhì)量/腦質(zhì)量×100%）。

1.3.6 TauT+/-大鼠大腦組織Slc6a6基因的RT-PCR檢測(cè) 取F1 代5 月齡TauT+/-大鼠和TauT-/-大鼠大腦組織，勻漿后取100 mg，使用RNA simple Total RNA kit 試劑盒提取大腦組織的總RNA，反轉(zhuǎn)錄成cDNA，SYBR 法熒光定量PCR 檢測(cè)Slc6a6基因的mRNA 表達(dá)水平。PCR 反應(yīng)條件：95 ℃預(yù)變性5 min，94 ℃變性15 s，60 ℃退火15 s，72 ℃延伸15 s，40 個(gè)循環(huán)，最后72 ℃延伸5 min。樣本目的基因的相對(duì)表達(dá)量計(jì)算公式為：相對(duì)表達(dá)量=2-△△Ct（△Ct=

Ct1-Ct2；Ct1：樣品目的基因的臨界循環(huán)數(shù)；Ct2：樣品管家基因的臨界循環(huán)數(shù)?！鳌鰿t=實(shí)驗(yàn)組△Ct-對(duì)照組△Ct 的平均值）。引物由上海英濰捷基生物技術(shù)有限公司合成，上游引物5′-GAGGTCATCATAGGCCAGTAC -3′ ； 下 游 引 物 5′ - GTACACAT TCAGGAGGGACAC-3′，擴(kuò)增產(chǎn)物長(zhǎng)度為120 bp，GAPDH 為內(nèi)參，上游引物5′-AACTCCCATTCTTCCACC-3′；下游引物5′-ACCACCCTGTTGCTGTAG-3′，擴(kuò)增產(chǎn)物長(zhǎng)度為100 bp。

1.3.7 Western blot 檢測(cè)TauT+/-大鼠大腦、心臟、肝臟組織的TauT 蛋白表達(dá) 取5 月齡TauT+/-大鼠及TauT-/-大鼠的大腦、心臟、肝臟組織，勻漿后分別取100 mg，加入含5%PMSF 的RIPA 蛋白裂解液并進(jìn)行蛋白定量后，取100 μg 蛋白于10%SDS-PAGE 凝膠進(jìn)行電泳分離蛋白，將蛋白轉(zhuǎn)移到0.45 μm 的PVDF 膜上，置于5%脫脂奶粉中封閉2 h 后加入一抗4 ℃孵育過夜，TauT 蛋白一抗（稀釋濃度1：200），內(nèi)參β-actin 一抗（稀釋濃度1：10 000）。次日加入二抗（TauT 與β-actin 二抗的稀釋濃度均為1：10 000）孵育后，使用凝膠成像儀對(duì)PVDF 印跡膜進(jìn)行顯影掃描蛋白條帶的灰度值，并對(duì)結(jié)果圖像進(jìn)行定量分析，TauT 蛋白的表達(dá)水平為TauT 與β-actin的比值（TauT/Actin），各組樣本的TauT 蛋白數(shù)據(jù)歸一化后進(jìn)行比較分析。

1.3.8 免疫組化檢測(cè)TauT+/-大鼠大腦組織TauT 蛋白的表達(dá) 取5 月齡TauT+/-大鼠及TauT-/-大鼠，左心室灌注后,取腦組織放入10%中性福爾馬林溶液，固定，脫水，包埋制成4 μm 厚石蠟切片，將石蠟切片脫蠟后經(jīng)蘇木精-伊紅染色后制成HE 染色樹脂片；或脫蠟后加入TauT 蛋白一抗（稀釋濃度1：200）后37 ℃孵育2 h，PBS 沖洗后加入二抗（辣根酶標(biāo)記山羊抗鼠，稀釋濃度1：10 000），最后經(jīng)DAB 顯色，蘇木精復(fù)染，脫水，制成免疫組化染色樹脂片，利用Leica BOND-Ⅲ全自動(dòng)免疫組化儀進(jìn)行常規(guī)染色，光學(xué)顯微鏡下觀察并進(jìn)行結(jié)果分析。每張切片隨機(jī)選取3 個(gè)200 倍視野，使用Image pro plus（IPP）圖像分析軟件進(jìn)行半定量分析并計(jì)算目的蛋白平均光密度（IOD/Area）。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 利用SPSS17.0 軟件和GraphPad Prism 6 對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行處理，數(shù)據(jù)結(jié)果采用x±s 表示，組間數(shù)據(jù)采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)進(jìn)行分析，當(dāng)P＜0.05時(shí)有顯著性差異。

2 結(jié)果

2.1 TauT+/-大鼠的構(gòu)建 將Slc6a6cDNA 重組到PDGF4（+）的NheI 和XbaI 之間構(gòu)建PDGF-Slc6a6表達(dá)質(zhì)粒（圖1），用PvuI 酶切線性化載體。用顯微注射法將上述線性化片段注射入SD 大鼠受精卵內(nèi)，制備轉(zhuǎn)基因大鼠，共獲得3 只TauT+/-大鼠首建鼠（F0 代：4#、9#、11#）。

圖1 PDGF-Slc6a6 重組質(zhì)粒構(gòu)建Fig 1 Establish of the transgene expression vector of PDGF-Slc6a6

2.2 PCR 鑒定TauT+/-大鼠結(jié)果 電泳結(jié)果見圖2，F(xiàn)0 及F1 代TauT+/-大鼠擴(kuò)增產(chǎn)物為625 bp 的DNA片段，與預(yù)期片段位置相符，轉(zhuǎn)基因大鼠DNA 遺傳穩(wěn)定，TauT-/-大鼠和WT 大鼠沒有條帶。

圖2 TauT+/-大鼠DNA PCR 鑒定Fig 2 Results of genetype identification TauT+/-rat by PCR

2.3 TauT+/-大鼠繁殖情況 繁殖情況見表1，F(xiàn)0 代（4#、9#、11#）共繁育6 次：4#未生育，9#繁育2 次，后代均為陰性；11#繁育4 次，F(xiàn)1 代的陽性率為44.07%，基本符合孟德爾遺傳定律，故選擇11#F0 代及其后代進(jìn)行繁育。F0 代和F1 代共繁育出174 只大鼠，死亡22 只，其中TauT+/-大鼠63 只，TauT-/-大鼠111 只，陽性率36.21%，死亡率3.7%。

2.4 TauT+/-大鼠一般情況的觀察 如圖3、4 所示，TauT+/-大鼠與TauT-/-大鼠毛色光滑，精神健康，并未出現(xiàn)飲食上的異常，無脫毛萎靡情況，在體型上無明顯差別，體質(zhì)量也無明顯差異。

2.5 TauT+/-大鼠臟器質(zhì)量和臟器系數(shù)的測(cè)定 臟器質(zhì)量和臟器系數(shù)的測(cè)定結(jié)果見表2，與TauT-/-大鼠比較，TauT+/-大鼠的肝體、腎體系數(shù)顯著下降（P＜0.05），但臟腦系數(shù)均無顯著性差異，總趨勢(shì)是：與TauT-/-大鼠比較，TauT+/-大鼠各項(xiàng)臟器指標(biāo)均無顯著性差異。

2.6 TauT+/-大鼠大腦組織Slc6a6基因的RT-PCR檢測(cè) 如圖5～7，RT-PCR 結(jié)果表明TauT+/-大鼠在大腦組織中的Slc6a6基因mRNA 表達(dá)水平較TauT-/-大鼠顯著升高（P＜0.05），融解曲線顯示只有內(nèi)參基因GAPDH 和Slc6a6基因的融解峰，擴(kuò)增產(chǎn)物分別在81 ℃和85 ℃時(shí)出現(xiàn)單一峰，擴(kuò)增特異性較好。

表1 TauT+/-大鼠繁育結(jié)果Tab 1 Reproduction of F0-F1 generation of the TauT+/-and TauT-/-rats

圖3 TauT+/-大鼠外觀一般觀察Fig 3 The general status of TauT+/-rats

表2 TauT+/-大鼠和TauT-/-大鼠臟器質(zhì)量、臟器系數(shù)、臟腦系數(shù)的比較Tab 2 Results of organ weight,organ coefficient and organ/brain ratio of the TauT+/-and TauT-/-rat

圖5 TauT+/-大鼠大腦組織Slc6a6 mRNA 表達(dá)水平情況Fig 5 Expression of Slc6a6 mRNA in the brain of the TauT+/- and TauT-/-rat

圖6 RT-PCR 擴(kuò)增曲線Fig 6 Amplification curve of RT-PCR

圖7 RT-PCR 融解曲線Fig 7 Melting curve of RT-PCR

圖8 免疫印跡檢測(cè)TauT+/-大鼠大腦、心臟、肝臟TauT 蛋白表達(dá)水平Fig 8 The protein expression level assay of TauT protein in the brain,heart and liver of the TauT+/-and TauT-/-rat by Western blot

圖9 TauT+/-大鼠大腦、心臟、肝臟TauT 蛋白表達(dá)水平柱狀圖分析Fig 9 The protein expression level assay of TauT protein in the brain, heart and liver of the TauT +/- and TauT -/- rat by histogram analysis

2.7 Western blot 檢測(cè)TauT+/-大鼠大腦、心、肝組織TauT 蛋白的表達(dá) 結(jié)果如圖8～9 所示，與TauT-/-大鼠比較，TauT+/-大鼠在大腦、心、肝中TauT 蛋白表達(dá)均無顯著性差異（P＞0.05）。

2.8 TauT+/-大鼠大腦組織海馬與皮層HE 染色和免疫組化結(jié)果 HE 染色免疫組化結(jié)果如圖10、11 所示，TauT+/-大鼠與TauT-/-大鼠海馬區(qū)與皮層處的細(xì)胞排列緊密且規(guī)則，細(xì)胞形態(tài)正常，未見腫脹。IPP軟件光密度分析及t檢驗(yàn)顯示TauT+/-大鼠與TauT-/-大鼠在大腦皮層和海馬區(qū)TauT 的表達(dá)情況無顯著差異（P＞0.05）。

圖10 TauT+/-與TauT-/-大鼠大腦皮層和海馬區(qū)免疫組化和HE 染色結(jié)果比較（200x）Fig 10 Comparison of immunohistochemical and HE staining results between brain cortex and hippocampus in TauT+/-and TauT-/-rat(200x)

圖11 TauT+/-與TauT-/-大鼠大腦皮層和海馬區(qū)免疫組化光密度對(duì)比分析Fig 11 Comparison between optical density of brain cortex and hippocampus in TauT+/-and TauT-/-rat

3 討論

大鼠作為常用的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，除了體型較大可易于手術(shù)操作、形態(tài)觀察之外，在生理、代謝等方面也更為接近人類[9]，尤其在研究神經(jīng)系統(tǒng)相關(guān)疾病[10-11]和抑郁焦慮樣行為[12]中具有較大優(yōu)勢(shì)。筆者團(tuán)隊(duì)制作的TauT+/-大鼠是通過顯微注射技術(shù)將PDGFSlc6a6基因隨機(jī)整合到基因組中的，該技術(shù)的優(yōu)點(diǎn)是實(shí)驗(yàn)周期較短，整合效率較為穩(wěn)定，且導(dǎo)入的外源基因片段大小不受限制[13]，但基因整合的拷貝數(shù)及位點(diǎn)未知，通常是多拷貝，且由于不同首建鼠插入的位點(diǎn)及拷貝數(shù)不同，而導(dǎo)致不同F(xiàn)0 代大鼠之間目的基因表達(dá)有差異，因此需要篩選出高表達(dá)且穩(wěn)定遺傳的大鼠進(jìn)行傳代。本實(shí)驗(yàn)中4#轉(zhuǎn)基因首建鼠不育，9#轉(zhuǎn)基因首建鼠繁育2 窩均為陰性，11#轉(zhuǎn)基因首建鼠繁育4 窩，陽性率為44.07%，基本符合孟德爾遺傳定律，故選擇11#首建鼠及其后代進(jìn)行繁育。

大鼠的體質(zhì)量和生存情況是衡量大鼠表型變化的重要參數(shù)，馮穎等[14]報(bào)道向Wistar 大鼠喂食含有?；撬岬娘暳衔从绊懫潴w質(zhì)量，但喂食?；撬徂D(zhuǎn)運(yùn)體抑制劑β-丙氨酸可以顯著降低大鼠體質(zhì)量。筆者在繁殖TauT 轉(zhuǎn)基因大鼠的過程中，發(fā)現(xiàn)TauT+/-大鼠與TauT-/-大鼠在體質(zhì)量、毛發(fā)、進(jìn)食、活動(dòng)等方面均無明顯差異，表明插入TauT 基因未對(duì)大鼠造成外在表型的影響，這與其報(bào)道結(jié)果相似。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物臟器質(zhì)量、臟器系數(shù)和臟腦系數(shù)的變化可反映出毒物或插入基因?qū)?shí)驗(yàn)樣本及其臟器的綜合效用[15]，本研究發(fā)現(xiàn)：相比于TauT-/-大鼠，TauT+/-大鼠的肝體、腎體系數(shù)顯著降低（P＜0.05），提示插入TauT 基因可能會(huì)對(duì)SD 大鼠的肝臟和腎臟有影響，但因其它臟器系數(shù)無顯著性差異，而且各臟器的臟器質(zhì)量、臟腦系數(shù)均沒有顯著性差異，綜合來看，TauT+/-大鼠的臟器水平與TauT-/-大鼠無顯著性差異。有研究顯示[16]，長(zhǎng)期補(bǔ)充?；撬釙?huì)導(dǎo)致腎臟質(zhì)量的增加并伴隨著腎臟重吸收作用及腎小球?yàn)V過作用紊亂的情況，具體機(jī)制不明確。筆者也將會(huì)增加TauT+/-大鼠的數(shù)量以密切關(guān)注其肝臟和腎臟的變化情況。

神經(jīng)特異性啟動(dòng)子是一類在神經(jīng)系統(tǒng)中特異性表達(dá)的啟動(dòng)子，在轉(zhuǎn)基因技術(shù)中它經(jīng)常與目的基因連接后導(dǎo)入受精卵，用于研究神經(jīng)系統(tǒng)疾病的相關(guān)機(jī)制[17]，神經(jīng)特異性啟動(dòng)子的優(yōu)勢(shì)在于確保在所需神經(jīng)細(xì)胞中發(fā)揮高表達(dá)效果的同時(shí)，避免其它細(xì)胞中相關(guān)基因表達(dá)所引起的副作用[18-19]。血小板源性生長(zhǎng)因子（Platelet-derived growth factor，PDGF）的啟動(dòng)子PDGF 可以在整個(gè)腦和脊髓的神經(jīng)元中高表達(dá)，但在神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞中沒有活性，是一種應(yīng)用廣泛的神經(jīng)特異性啟動(dòng)子[20-21]。本實(shí)驗(yàn)中結(jié)果顯示，與TauT-/-大鼠相比，TauT+/-大鼠大腦組織中Slc6a6mRNA 表達(dá)水平顯著升高，其它臟器（心、肝）比較無差異性（實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)未列出），而大腦、心、肝等臟器的TauT 蛋白表達(dá)穩(wěn)定，無顯著差異性，免疫組化和HE 染色也顯示TauT+/-大鼠在海馬與皮層區(qū)TauT蛋白的表達(dá)均沒有顯著差異，說明轉(zhuǎn)入PDGFSlc6a6基因片段可以提高大鼠TauT mRNA 表達(dá)水平，而未能改變大鼠大腦組織TauT 蛋白的表達(dá)水平，從某種角度上說，即利用腦特異性啟動(dòng)子PDGF與Slc6a6基因連接后轉(zhuǎn)入大鼠體內(nèi)，只能在基因水平上對(duì)大鼠大腦組織有所改變，未能提高大腦組織中TauT 蛋白表達(dá)能力，出現(xiàn)這種基因和蛋白表達(dá)不一致的情況，推測(cè)是轉(zhuǎn)入的PDGF-Slc6a6基因片段對(duì)后期的基因翻譯水平調(diào)節(jié)未能達(dá)到其蛋白表達(dá)的檢測(cè)程度，具體機(jī)制尚不明確，有待后續(xù)實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步研究。

綜上所述，本研究通過顯微注射技術(shù)將PDGFSlc6a6基因序列整合到SD 大鼠體內(nèi)構(gòu)建TauT+/-大鼠，為各種神經(jīng)疾病的研究提供了較好的TauT 轉(zhuǎn)基因動(dòng)物模型，也為研究基因敲除TauT 大鼠在神經(jīng)系統(tǒng)疾病中的機(jī)制提供了對(duì)照模型。