苗雨莉,楊維霞,付 欣,石叢艷

(1.通用環(huán)球西航醫(yī)院 病理科,陜西 西安,710021;2.空軍軍醫(yī)大學(xué)西京醫(yī)院 病理科,陜西 西安,710032;3.西北工業(yè)大學(xué)醫(yī)院 病理科,陜西 西安,710072)

目前，卵巢癌患者多采用放療、化療進(jìn)行治療，以盡可能多地消滅腫瘤細(xì)胞，但晚期卵巢癌中僅有20%患者可以存活超過5年[1]。甲殼質(zhì)酶蛋白-40(YKL-40)[2]是一種外殼質(zhì)酶家族的分泌型糖蛋白，又稱軟骨糖蛋白-39(HCgp-39),這種蛋白是由人骨肉瘤細(xì)胞株MG63分泌，其編碼基因位于染色體1q31～1q32區(qū)域，其DNA長度為8 kb[3]。研究[4]表明，血清中YKL-40表達(dá)增高是惡性腫瘤預(yù)后不良的標(biāo)志。李莉莉等[5]研究表明，YKL-40蛋白表達(dá)可能來自卵巢癌、子宮內(nèi)膜癌、乳腺癌等。研究[6]顯示，子宮內(nèi)膜癌中上皮性卵巢癌(EOC)患者血清YKL-40水平升高，提示其可能成為EOC新的腫瘤標(biāo)志物。研究[7]提示，YKL-40的表達(dá)水平與腫瘤惡性程度呈正相關(guān)。人附睪蛋白4(HE4)是附睪遠(yuǎn)端上皮細(xì)胞中克隆到HE4基因的cDNA序列，這種蛋白是抑蛋白酶家族成員之一[8]。研究[9]表明,HE4在卵巢上皮性惡性腫瘤中表達(dá)程度可以作為卵巢上皮性癌篩查、診斷、預(yù)后及療效評(píng)估的指標(biāo)。HE4在鑒別卵巢良、惡性病變中的特異度較糖類抗原125(CA125)高。所以,HE4作為腫瘤標(biāo)記物用于卵巢癌的檢測(cè)有很好的應(yīng)用前景[10]。本研究探討卵巢癌患者血清HE4、CA125及YKL- 40水平與其病理特征的相關(guān)性，現(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料

收集2010年12月—2012年1月空軍軍醫(yī)大學(xué)西京醫(yī)院確診的上皮性卵巢癌患者血清標(biāo)本80例，良性卵巢腫瘤患者血清標(biāo)本40例;年齡36～91歲，平均(54.58±5.24)歲;臨床分期根據(jù)2017年國際抗癌協(xié)會(huì)聯(lián)盟(UICC)制定的肺癌TNM分期標(biāo)準(zhǔn)，包括Ⅰ期10例，Ⅱ期15例，Ⅲ期32例，Ⅳ期23例;病理結(jié)果包括漿液性癌60例，黏液性癌20例;病理分級(jí)按照2012年世界衛(wèi)生組織(WHO)制定的分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)，分為G1、G2級(jí)50例,G3級(jí)30例。

納入標(biāo)準(zhǔn):所有患者均為初診病例，術(shù)前未接受放療、化療或免疫治療，患者均無影響腫瘤標(biāo)志物的合并癥。排除標(biāo)準(zhǔn):排除合并其他內(nèi)分泌疾病、器官腫瘤疾病患者。另選取40例同期在空軍軍醫(yī)大學(xué)西京醫(yī)院體檢中心體檢的正常健康婦女作為對(duì)照組，年齡35～85歲，平均(50.21±8.21)歲。納入標(biāo)準(zhǔn):健康女性，無相關(guān)腫瘤疾病，未接受過放療或激素治療。排除有腫瘤患病史者。3組患者年齡、吸煙史等一般資料比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

1.2 研究方法

YKL-40試劑盒購自上海滬震實(shí)業(yè)有限公司;HE4、CA125試劑盒購自瑞典康乃格公司。采用ELISA雙抗體夾心法測(cè)量血清HE4、YKL-40水平。血清樣本取自患者入院后第2天空腹時(shí)靜脈全血5 mL,置于未加抗凝試劑試管中，標(biāo)本采集后在室溫下靜置 1 h,3 000 轉(zhuǎn)/min離心后去上清，置于EP管中，保存于-80 ℃冰箱內(nèi)待檢。按照HE4和YKL-40試劑盒操作方法將待測(cè)血清與抗體反應(yīng)。采用酶標(biāo)儀(購自Molecular Devices公司)在450 nm波長下測(cè)定吸光度值(OD值)，通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中YKL-40濃度。參照文獻(xiàn)[11],采用電化學(xué)發(fā)光免疫法測(cè)定CA125含量。

1.3 生存分析

隨訪方式為電話隨訪，隨訪時(shí)間2012年1月—2018年1月，卵巢癌患者隨訪時(shí)間為首次手術(shù)至死亡時(shí)間或隨訪截止時(shí)間，卵巢癌患者隨訪時(shí)間12～72個(gè)月，中位隨訪時(shí)間45.20個(gè)月，其中成功隨訪 65例。成功隨訪的 65 例卵巢癌患者制作生存曲線。將YKL-40>100.00 ng/mL判斷為陽性，將CA125>35.00 U/mL判斷為陽性，將HE4>150.00 pmol/L判斷為陽性。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS18.0軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行處理和分析，方差分析使用ANOVA,當(dāng)組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義時(shí)，進(jìn)一步采用SNK方法進(jìn)行兩兩比較;對(duì)于無序分布的等級(jí)資料，采用非參數(shù)Mann-WhitneyU檢驗(yàn)。進(jìn)行ROC分析。本研究所有檢驗(yàn)均為雙側(cè)檢驗(yàn),P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 3組血清YKL-40、HE4、CA125含量比較

與對(duì)照組比較，良性卵巢腫瘤細(xì)胞組、上皮性卵巢腫瘤細(xì)胞組YKL-40、HE4、CA125含量顯著升高(P<0.01);與良性卵巢癌細(xì)胞組比較，上皮性卵巢癌細(xì)胞組YKL-40、HE4、CA125含量顯著升高(P<0.01)。見表1。

表1 3組血清YKL-40、HE4、CA125含量比較

YKL-40:甲殼質(zhì)酶蛋白-40;HE4:人附睪蛋白4;糖類抗原125:CA125。

與對(duì)照組比較,**P<0.01;與良性卵巢腫瘤細(xì)胞組比較,##P<0.01。

2.2 上皮性卵巢癌患者血清YKL-40、HE4、CA125與病理特征的關(guān)系

上皮性卵巢癌患者血清YKL-40含量與病理類型(漿液性、黏液性)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、病理分級(jí)密切相關(guān)(P<0.05),與臨床分期無顯著關(guān)聯(lián)(P=0.08)。上皮性卵巢癌患者血清HE4、CA125含量與病理類型(漿液性、黏液性)、臨床分期、病理分級(jí)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)(P<0.05)。見表2。

表2 上皮性卵巢癌患者血清YKL-40、HE4、CA125與病理特征的關(guān)系

YKL-40:甲殼質(zhì)酶蛋白-40;HE4:人附睪蛋白4;糖類抗原125:CA125。與同一指標(biāo)另一亞項(xiàng)比較,*P<0.05。

2.3 生存結(jié)果分析

YKL-40以100.00 ng/mL為界限值，當(dāng)YKL-40>100.00 ng/mL判斷為陽性。結(jié)果顯示，陽性組卵巢癌患者在第5個(gè)月開始出現(xiàn)死亡，陰性組患者在第10個(gè)月出現(xiàn)死亡;陽性組在58個(gè)月時(shí)全部死亡，陰性組則有60.00%以上存活，陰性組中位生存時(shí)間為30.50個(gè)月，說明陽性卵巢癌患者生存率顯著低于陰性卵巢癌患者(P<0.05)。見圖1。

CA125以35.00 U/mL為界限值，當(dāng)CA125>35.00 U/mL判斷為陽性。結(jié)果顯示，陽性組卵巢癌患者第3個(gè)月開始出現(xiàn)死亡，在58個(gè)月時(shí)全部死亡;陰性組則有75.00%以上存活，中位生存時(shí)間為26.50個(gè)月，說明陽性卵巢癌患者生存率顯著低于陰性卵巢癌患者(P<0.05)。見圖2。

HE4以150.00 pmol/L為界限值，當(dāng)HE4>150.00 pmol/L判斷為陽性。結(jié)果顯示，陽性組卵巢癌患者在第10個(gè)月開始出現(xiàn)死亡，陰性患者在第15個(gè)月出現(xiàn)死亡;陽性組在57個(gè)月時(shí)全部死亡，陰性組則有60.00%以上存活，陰性組中位生存時(shí)間為30.50個(gè)月，說明陽性卵巢癌患者生存率顯著低于陰性卵巢癌患者(P<0.05)。見圖3。

由HE4、CA125、YKL-40的ROC曲線可以看出,CA125的曲線下面積大于HE4、YKL-40的面積,HE4、CA125、YKL-40的最佳臨界值分別為101.200 pmol/L、95.200 U/mL、53.600 ng/mL,Youden指數(shù)分別為0.852、0.547、0.749。見圖4、表3。HE4、CA125、YKL-40單獨(dú)診斷卵巢癌的靈敏度分別為91.5%、87.0%、72.0%,3者聯(lián)合診斷的靈敏度為96.5%,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);HE4、CA125、YKL-40單獨(dú)診斷卵巢癌的特異度分別為92.0%、93.0%、95.0%，3者聯(lián)合診斷的特異度為85.0%,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

3 討 論

YKL-40又稱甲殼質(zhì)酶蛋白-40,其相對(duì)分子質(zhì)量約為40 k[12]。劉強(qiáng)等[13]研究發(fā)現(xiàn),YKL-40與多種細(xì)胞的增殖、分化、凋亡及血管形成、細(xì)胞外組織重塑關(guān)系密切，并且在惡性腫瘤組織中有特異性表達(dá)。劉玉嵚等[14]研究表明，卵巢癌患者血清YKL-40明顯高于正常人，且YKL-40與疾病分級(jí)明顯相關(guān)，血清YKL-40≥80.00μg/L者預(yù)后差。本研究發(fā)現(xiàn)，卵巢癌患者血清中YKL-40含量顯著高于正常同齡婦女，且YKL-40與患者病理類型、病理分級(jí)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移顯著相關(guān)，其中漿液性卵巢癌患者YKL-40含量顯著高于黏液性患者，同時(shí)YKL-40的含量與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移呈正相關(guān)。本研究還發(fā)現(xiàn),YKL-40陽性組卵巢癌患者生存率顯著低于陰性組卵巢癌患者，表明YKL-40與卵巢癌分化及預(yù)后有一定相關(guān)性。

表3 HE4、CA125、YKL-40的ROC曲線相關(guān)值

HE4:人附睪蛋白4;糖類抗原125:CA125;YKL-40:甲殼質(zhì)酶蛋白-40。

HE4又稱核心表位蛋白(WFDC2)[15]。HE4屬于抑蛋白酶家族成員，這種蛋白基因最早是由 Kirchhoff 等[16]在人附睪上皮細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)。崔彭華等[17]研究表明,HE4是附睪特異性、生殖相關(guān)的蛋白。研究[18]表明，正常卵巢組織中不表達(dá)HE4蛋白，卵巢癌組織中 HE4 蛋白呈高表達(dá)，與本研究結(jié)論一致。本研究發(fā)現(xiàn)在不同臨床分期和病理分級(jí)患者血清中HE4含量存在顯著差異,Ⅰ、Ⅱ期卵巢癌患者血清HE4含量顯著高于Ⅲ、Ⅳ期卵巢癌患者,G3級(jí)患者血清HE4含量顯著高于G1、G2級(jí),HE4陽性組卵巢癌患者生存率顯著低于HE4陰性卵巢癌患者。

CA125是1981年由Bast等[19]從上皮性卵巢癌抗原檢測(cè)出可被單克隆抗體結(jié)合的一種糖蛋白，這種蛋白來源于胚胎發(fā)育期體腔上皮。朱攀等[20]研究表明，上皮性卵巢腫瘤(漿液性腫瘤)患者的血清中CA125含量顯著高于正常和良性腫瘤患者血清CA125含量，與本研究結(jié)論一致。研究[21]表明，約80%晚期卵巢癌患者血清CA125顯著升高，而早期卵巢癌患者中僅有50%～60%患者血清CA125升高。本研究結(jié)果表明,CA125與患者病理類型、病理分級(jí)顯著相關(guān)，其中漿液性卵巢癌患者CA125含量顯著高于黏液性患者,G3級(jí)患者CA125含量顯著高于G1、G2級(jí)患者。本研究還發(fā)現(xiàn),CA125陽性組卵巢癌患者生存率顯著低于陰性組卵巢癌患者，表明CA125與卵巢癌分化及預(yù)后有一定相關(guān)性。

綜上所述，卵巢癌患者血清HE4、CA125及YKL-40含量與其病理特征相關(guān),HE4、CA125和YKL-40含量可以作為評(píng)價(jià)卵巢癌患者預(yù)后的相關(guān)標(biāo)志物。