葉 靜，孫海柏，杜鐘珍，梅早仙 (天津市海河醫(yī)院，天津 300000)

WHO顯示調(diào)查數(shù)據(jù)：在中國每年死于結(jié)核病的患者數(shù)多達(dá)13萬[1]，且耐多藥較多[2]。這一情況嚴(yán)重威脅了患者的生命健康，成為我國嚴(yán)重的公共衛(wèi)生問題。耐多藥結(jié)核(Multi drug resistant tuberculosis MDR-TB)是指人體感染的結(jié)核菌經(jīng)檢測證實至少對利福平、異煙肼同時耐受的一種結(jié)核類型，中國MDR-TB病患者數(shù)占全世界MDR-TB病患者數(shù)的13%[3]。可分為初始耐藥及獲得性耐藥，總體治愈率較低，初治耐藥患者的治愈率往往顯著高于復(fù)治患者。MDR-TB病情容易反復(fù)，診治時間長、臨床治療難度大、治療費昂貴、治愈率低、死亡率高。由于治療周期長，故在治療過程中能進(jìn)行及時而準(zhǔn)確的評估就顯得尤為重要?？菇Y(jié)核治療后若能對患者病情好轉(zhuǎn)或惡化進(jìn)行及時評估，則可及時決定是否需要調(diào)整治療方案，從而更加精準(zhǔn)的進(jìn)行治療。目前臨床上對于病情好轉(zhuǎn)或惡化常用的評價指標(biāo)有臨床表現(xiàn)、營養(yǎng)狀態(tài)評估、痰抗酸染色、痰結(jié)核菌培養(yǎng)、胸部X線片CT等，但都有其局限性，臨床表現(xiàn)及營養(yǎng)狀態(tài)評估往往不能體現(xiàn)結(jié)核菌清除狀況，痰抗酸染色陽性率低，痰結(jié)核菌培養(yǎng)所需時間長，胸部X線片或CT所示病變均吸收緩慢，以上都可以造成結(jié)論滯后。結(jié)核分枝桿菌侵入人體后，活化的CD4+T細(xì)胞(Th)產(chǎn)生特異性細(xì)胞免疫應(yīng)答能有效抵抗結(jié)核菌感染，T細(xì)胞可分化為T helper (Th)1細(xì)胞、Th2細(xì)胞及調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(regulatory T cell Treg)亞群，細(xì)胞亞群Th17主要通過白介素17激活相關(guān)炎性反應(yīng)和其他效應(yīng)性T細(xì)胞結(jié)合發(fā)揮作用。根據(jù)體內(nèi)結(jié)核菌含量的多少從而觀察CD4+T細(xì)胞變化的規(guī)律，通過規(guī)律性的觀察可以了解治療效果與體內(nèi)輔助性T細(xì)胞以及相關(guān)細(xì)胞因子之間的變化規(guī)律。本研究通過分析T細(xì)胞的變化以及其相關(guān)細(xì)胞因子的表達(dá)情況，分組分析變化趨勢，從而推斷診療的成功與否，對療效評估、轉(zhuǎn)歸給出快速的判斷和依據(jù)，同時也為將來進(jìn)行耐多藥結(jié)核患者的基因多態(tài)性的研究以及該病種進(jìn)行基因免疫制劑治療開拓了新的思路和方向。

1 對象與方法

1.1研究對象：耐多藥結(jié)核組選自從2016年3月～2017年3月我院就診依據(jù)《結(jié)核診斷和治療指南》標(biāo)準(zhǔn)診斷的73例耐多藥結(jié)核患者符合以下要求：臨床癥狀：發(fā)熱、咳嗽、咯痰、咯血、胸痛/悶、盜汗、乏力、納差等。部分患者可無臨床癥狀、輕者可無體征。影像學(xué)檢查：提示結(jié)核病影像學(xué)變化特征。痰液檢查：結(jié)核菌液體培養(yǎng)結(jié)果陽性，耐藥菌檢測結(jié)果至少對利福平、異煙肼同時耐藥，年齡在16～78歲之間，男55例，女18例。將耐多藥結(jié)核組分成：①初治組43例，復(fù)治組30例。②培養(yǎng)未轉(zhuǎn)陰組15例，確診耐多藥結(jié)核治療過程中第6個月末或療程結(jié)束后，痰結(jié)核菌培養(yǎng)檢查結(jié)果仍然為陽性以及痰培養(yǎng)未轉(zhuǎn)陰組；培養(yǎng)轉(zhuǎn)陰組58例，療程內(nèi)經(jīng)過周期性的痰檢，連續(xù)兩次痰培養(yǎng)轉(zhuǎn)陰的患者。健康對照組為體檢中心篩查除外結(jié)核病史且體健的人員共計56人，男34人，女22人，年齡25～55歲。

1.2治療方案：按照診療規(guī)范中提出的標(biāo)準(zhǔn)治療方案進(jìn)行治療：包括吡嗪酰胺(Z)、左氧氟沙星(Lfx)、卡那霉素(Km)、對氨基水楊酸(PAS)、丙硫異煙胺(Pto)五種統(tǒng)一采購的進(jìn)口的抗結(jié)核藥物。

1.3儀器：FACSCantoⅡ型流式細(xì)胞儀(FCM)

1.4試劑：①BD公司診斷試劑：標(biāo)記個:MultiTEST CD3-異硫氰酸熒光素(fluorescein Isothiocyanate) FITC/CD8-藻紅蛋白(phycoerythrin，PE) /CD45-多甲藻素葉綠素蛋白(peridinin-chlorophyll-protein PerCP)/CD4-別藻藍(lán)蛋白(allophycocyanin，APC)，F(xiàn)ACS溶血劑，BD FACS七色校準(zhǔn)微球，以及相關(guān)配套質(zhì)控物，標(biāo)準(zhǔn)品。②BD CBA法人Thl、Th2、Th17試劑盒(BD CBA Human Thl、Th2、Thl7 Cytokinc Kit，BD Bioscicnccs，USA)。試劑盒主要包含IL-2、IL-4、IL-6、IL-10、TNF-α、IFN-γ、IL-17A 捕獲微球各0.8 ml，人Thl、Th2、Th17藻紅蛋白檢測試劑1 ml，人Thl、Th2、Th17細(xì)胞因子標(biāo)準(zhǔn)品(凍干粉)0.2 ml，熒光素的質(zhì)控液包括：異硫氰酸陽性質(zhì)控品0.5 ml，藻紅蛋白的質(zhì)控品4 ml，專用洗液130 ml，試驗稀釋液30 ml的CBA Flex Set檢測試劑盒，均為美國BD(Becton Dickinson)公司產(chǎn)品。

1.5方法：本研究對耐多藥結(jié)核患者淋巴細(xì)胞相關(guān)細(xì)胞及細(xì)胞因子的檢測采用常規(guī)的流式細(xì)胞儀法流式細(xì)胞術(shù)(FCM)檢測細(xì)胞亞群的相對計數(shù)，采用流式微球分析法(Cytometric Bead Array CBA)對血清中細(xì)胞因子含量進(jìn)行測定，本質(zhì)是通過將不同亮度的微球作為載體，將熒光素標(biāo)記的針對同一待測抗原的抗體作為探針通過物理吸附等方法與抗體相結(jié)合特異性識別待測抗原，形成免疫復(fù)合物，最后通過流式細(xì)胞儀的激光對其進(jìn)行分類檢測，以獲得被固定的待測抗原的種類和數(shù)量信息[4]，是液相多重蛋白定量檢測方法，集微球、熒光、激光、流體學(xué)、數(shù)據(jù)分析一體，通過微球表面的熒光信號進(jìn)行定量分析。其技術(shù)原理為：CBA可以同時檢測多種蛋白組合，不同的微球?qū)ΨN抗體進(jìn)行化學(xué)編碼，將微球混合在同一系統(tǒng)內(nèi)再進(jìn)行多重復(fù)合測定。CBA法、酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA) 、 Western印跡、實時熒光定量PCR ( RT-PCR) 、Luminex液相懸浮芯片技術(shù)都能夠?qū)?xì)胞因子進(jìn)行定量檢測，但與其他檢測技術(shù)相比較分析，此類方法具有其獨有的特點[5]，占據(jù)絕對優(yōu)勢，所用標(biāo)本量較少，且具有較高的靈敏度、較好的密封性，對于高度傳染性的患者標(biāo)本能有效降低交叉感染的幾率[6]，有很寬的檢測范圍和更好的重復(fù)性，檢測的過程可以做到6～7種細(xì)胞因子的同時段測量。

1.5.1標(biāo)本準(zhǔn)備：選取實驗組用藥前以及正常對照組枸櫞酸鈉充分抗凝抽取的4 ml空腹靜脈血；根據(jù)藥敏試驗和指南接受正規(guī)化療，通過制定表格形式統(tǒng)計總結(jié)其治療過程及轉(zhuǎn)歸情況，所有耐多藥結(jié)核患者組都分別在治療前及治療后2個月、 6個月取血檢測各組人群血清中上述細(xì)胞因子水平。樣品制備：各組均采集的空腹靜脈血4 ml，進(jìn)行離心(4 000 r/min)后，提取血清進(jìn)行分裝，置-80 ℃冰箱進(jìn)行備用，待標(biāo)本收集完成統(tǒng)一實驗。

1.5.2檢測步驟

1.5.2.1流式細(xì)胞儀相對計數(shù)T細(xì)胞亞群：①提取100 μl全血加入到流式專用管；②各管移入10 μl熒光抗體試劑，避光30 min；③加入溶血劑1 ml，避光10 min；④上機(jī)檢測，為使其分辨率達(dá)到儀器的最佳實驗狀態(tài)使用熒光微球7-colour進(jìn)行儀器光路的校準(zhǔn)；⑤采用Canto軟件獲取與分析數(shù)據(jù)；⑥調(diào)整儀器狀態(tài)，細(xì)胞在圖中合適的位置上；⑦在FSC/SSC上圈出淋巴細(xì)胞群為(RI)；⑧SSC/CD3上圈出CD3+T細(xì)胞群(R2)；⑨形成CD4/CD3，CD8/CD3散點圖并設(shè)置為顯示G3=Rl*R2的細(xì)胞；⑩一共需要獲取10 000個細(xì)胞，分析Th(CD3+CD4+)和Ts(CD3+CD8+)細(xì)胞的相對計數(shù)情況。

1.5.2.2CBA法檢測血清細(xì)胞因子：①準(zhǔn)備檢測試劑：將試劑盒及緩沖液取出后，置于室溫平衡1 h；②制備標(biāo)準(zhǔn)品：使用專用稀釋液把7種標(biāo)準(zhǔn)品按1∶2、1∶4、1∶8……梯度依次稀釋到1∶256后，充分混勻；③陰性對照為專用稀釋液；④將微球制成混懸液；⑤用微球稀釋液稀釋混合捕獲微球達(dá)50I/測試的標(biāo)準(zhǔn)，室溫15 min；⑥制備PE標(biāo)記的信號試劑；⑦實驗組血清、7種標(biāo)準(zhǔn)品、捕獲微球各50 μl置于流氏管中，室溫避光1 h；⑧各加入50 μl的PE信號抗體，室溫避光2 h；⑨1 ml洗液置于試管內(nèi)，離心5 min，離心力為200 g，反復(fù)清洗2次，倒去上清液后，加入300ml專用洗液，4個小時內(nèi)進(jìn)行完成檢測。

1.6統(tǒng)計學(xué)方法：利用SPSS 17.0統(tǒng)計分析軟件；Excel 2007建立所需數(shù)據(jù)庫；采用率(%)表示計數(shù)資料，用χ2檢驗。

2 結(jié)果

2.1T細(xì)胞亞群的檢測結(jié)果：耐多藥結(jié)核患者用藥前T細(xì)胞亞群與正常對照組進(jìn)行比較分析，總T細(xì)胞及CD4+T細(xì)胞檢測兩組差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，CD8+T細(xì)胞較對照組有所增高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，CD4+/CD8+發(fā)生變化，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。見圖1。

2.2Cell Quest軟件獲取點圖：血清中7種細(xì)胞因子(cytokine，CK)的 CBA法檢測用 Cell Quest軟件獲取每個樣本的點圖，依次為IL-2、IL-4、IL-6、IL-10、TNF-α、IFN-γ、IL-17群微球陰性結(jié)果與IL-2、IL-6、IL-10、IFN-γ、IL-17陽性結(jié)果的散點圖進(jìn)行比較。見圖2。

圖1 兩組T細(xì)胞亞群檢測結(jié)果比較分析

圖2 CBA檢測法顯示微球獲取的散點圖圖譜

2.3耐多藥結(jié)核組與對照組中細(xì)胞因子含量對比分析：耐多藥結(jié)核患者在用藥前檢測的結(jié)果與健康對照組檢測結(jié)果比較IL-17、IL-6、IFN-γ、TNF-α的含量存在顯著性差異均較正常對照組有所升高，IL-2結(jié)果間差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，較正常對照組低。見表1。

細(xì)胞因子耐多藥(n=73)健康對照(n=56)χ2值P值IL-17344.7±89.00121.00±65.0018.33<0.001IL-6231.2±58.00200.00±54.003.11<0.01IL-2110.00±29.00120.00±23.402.106<0.05IL-102.08±0.681.98±0.730.8010.424IFN-γ2.40±0.670.56±0.673.394<0.001TNF-α7.06±2.015.02±2.0332.36<0.001IL-47.02±0.357.01±2.560.1650.869

2.4耐多藥患者中初治組、復(fù)治組用藥前細(xì)胞因子的變化規(guī)律：IL-17、IFN-γ初治組較復(fù)治組含量高具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，IL-2、IL-4、IL-6復(fù)治組較初治組含量高具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。見圖3。

圖3 初治組、復(fù)治組細(xì)胞因子表達(dá)：*代表P<0.05,**P<0.01,***P<0.001

2.5耐多藥患者中培養(yǎng)轉(zhuǎn)陰組用藥前、后細(xì)胞因子的變化規(guī)律：對于58例培養(yǎng)轉(zhuǎn)陰組IL-6、TNF-α、IL-17、IL-10、IFN-γ用藥周期內(nèi)呈現(xiàn)逐漸下降的趨勢；IL-2呈現(xiàn)逐漸升高的趨勢且均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，逐漸恢復(fù)到正常水平，IL-4用藥前后無顯著統(tǒng)計學(xué)差異(P<0.05)。見圖4。

圖4 培養(yǎng)轉(zhuǎn)陰組中細(xì)胞因子周期性表達(dá)：*代表P<0.05,**P<0.01,***P<0.001

2.6耐多藥患者中培養(yǎng)未轉(zhuǎn)陰組用藥前、后細(xì)胞因子的變化規(guī)律：15例培養(yǎng)未轉(zhuǎn)陰組中IL-17、IL-6、TNF-α、IL-4五種細(xì)胞因子在初治患者治療前后隨著療程的進(jìn)展呈現(xiàn)顯著性差異(P<0.05)，IL-2、IL-10、IFN-γ周期性治療過程中無顯著性差異(P>0.05)。見圖5。

圖5 培養(yǎng)未轉(zhuǎn)陰組細(xì)胞因子周期性表達(dá)：*代表P<0.05,**P<0.01,***P<0.001

3 討論

結(jié)核病的發(fā)病機(jī)制相當(dāng)復(fù)雜，在免疫功能缺陷或低下人群中發(fā)病率相對較高[7]，耐多藥結(jié)核患者用藥前T細(xì)胞亞群與健康對照組進(jìn)行比較分析，總T細(xì)胞、CD4+T細(xì)胞、CD4+/CD8+檢測兩組無統(tǒng)計學(xué)差異，CD8+T細(xì)胞較對照組有所增高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)，說明患者體內(nèi)免疫系統(tǒng)發(fā)生了變化。結(jié)核分枝桿菌感染人體后，體內(nèi)的免疫系統(tǒng)功能紊亂[8]，CD8+T細(xì)胞數(shù)量升高，可能是因為結(jié)核菌引起機(jī)體內(nèi)限制性粘附細(xì)胞及抑制性T細(xì)胞出現(xiàn)的緣故，結(jié)核菌細(xì)胞壁內(nèi)物質(zhì)可以導(dǎo)致攜帶抗原的巨噬細(xì)胞與抗原特異性淋巴細(xì)胞相互作用，同時產(chǎn)生活性物質(zhì)使免疫調(diào)節(jié)機(jī)制中的抑制作用增強(qiáng)，對機(jī)體內(nèi)的免疫活性細(xì)胞產(chǎn)生直接抑制，從而使患者體內(nèi)的免疫細(xì)胞數(shù)量減少，因此總的T細(xì)胞較正常對照變化不大。在耐多藥結(jié)核患者發(fā)病后機(jī)體內(nèi)的免疫系統(tǒng)釋放大量的免疫細(xì)胞發(fā)揮免疫活性作用。免疫狀態(tài)發(fā)生變化，致使一部分T細(xì)胞激活同時釋放出細(xì)胞因子，刺激NK細(xì)胞的固有免疫體系形成，消除感染因子，未消除的部分進(jìn)入體內(nèi)引導(dǎo)產(chǎn)生特異性T細(xì)胞免疫應(yīng)答。體內(nèi)的細(xì)胞免疫及細(xì)胞因子的參與對耐多藥結(jié)核患者的病情變化及治療效果發(fā)揮著主要作用。

本文研究七種細(xì)胞因子在耐多藥結(jié)核患者體內(nèi)發(fā)生變化：耐多藥結(jié)核患者在用藥前檢測的結(jié)果與健康對照組檢測結(jié)果比較IL-17、IL-6、IFN-γ、TNF-α的含量差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，均較正常對照組有所升高，IL-2結(jié)果間差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，較正常對照組低。顯示機(jī)體感染耐多藥結(jié)核后啟動了人體的免疫系統(tǒng)包括細(xì)胞和體液免疫兩種，造成免疫系統(tǒng)的功能紊亂釋放出大量的細(xì)胞因子參與到免疫調(diào)節(jié)，從而殺死結(jié)核菌。43例初治組與30例復(fù)治組治療前細(xì)胞因子的比較IL-17、IFN-γ，初治組較復(fù)治組含量高，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，IL-2、IL-4、IL-6復(fù)治組較初治組含量高，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。初治患者的主要發(fā)病原因是因為呼吸道在人群中的傳播，進(jìn)而感染，機(jī)體接觸到結(jié)核菌后激活效應(yīng)細(xì)胞啟動免疫機(jī)制，釋放出大量的細(xì)胞因子，IL-17也隨著體內(nèi)致炎作用的逐漸減少，含量也隨之減少。IFN-γ增強(qiáng)輔助T的作用，對于機(jī)體殺滅病原菌具有一定的作用，對于初治患者來講，用藥前機(jī)體會釋放大量的IFN-γ，隨著診療活動的開展體內(nèi)的細(xì)菌含量逐漸減少，IFN-γ也逐漸減少。由于大部分患者身體抵抗力較弱所以發(fā)生的免疫反應(yīng)存在個體差異。對于30例耐多藥結(jié)核復(fù)治組，由于既往感染過結(jié)核菌，體內(nèi)記憶型T細(xì)胞迅速被激活釋放出大量與記憶性T細(xì)胞相關(guān)的細(xì)胞因子包括IL-2、IL-4等所以在用藥前較初治組呈現(xiàn)升高趨勢，可能與機(jī)體內(nèi)的免疫防御機(jī)制也有一定關(guān)系。

耐藥性結(jié)核病的診治與人體所含細(xì)菌量的多少，機(jī)體免疫狀態(tài)等因素導(dǎo)致的免疫反應(yīng)強(qiáng)弱，體內(nèi)的免疫保護(hù)功能是否得到發(fā)揮有密切的關(guān)系。本文將實驗組分成培養(yǎng)轉(zhuǎn)陰組和培養(yǎng)未轉(zhuǎn)陰組，58例培養(yǎng)轉(zhuǎn)陰組IL-6、TNF-α、IL-17、IL-10、IFN-γ用藥周期內(nèi)呈現(xiàn)逐漸下降的趨勢；IL-2呈現(xiàn)逐漸升高的趨勢且差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，各項菌逐漸恢復(fù)到正常水平，IL-4用藥前后差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。提示在進(jìn)行有效的治療后患者體內(nèi)的免疫細(xì)胞以及細(xì)胞因子免疫功能的恢復(fù)，IFN-γ變化隨結(jié)核菌量復(fù)制成正比，進(jìn)而起到免疫保護(hù)作用[9]。IL-17的逐漸減少說明體內(nèi)的免疫監(jiān)視以及免疫調(diào)控作用已經(jīng)初步形成，配合藥物治療將體內(nèi)的結(jié)核菌消滅，最終治療成功。在培養(yǎng)轉(zhuǎn)陰組以及培養(yǎng)未轉(zhuǎn)陰組中，細(xì)胞釋放的細(xì)胞因子表現(xiàn)各不相同，在培養(yǎng)未轉(zhuǎn)陰組IFN-γ周期性變化存在差異，免疫保護(hù)功能沒有完全建立，故含量隨治療周期的變化逐漸減少。TNF-α直接參與巨噬細(xì)胞抵抗結(jié)核分枝桿菌，隨機(jī)體內(nèi)痰液中結(jié)核桿菌的檢出量增加而升高，發(fā)揮免疫保護(hù)作用，但過度升高會加重肺結(jié)核，形成免疫損害，TNF-α在培養(yǎng)轉(zhuǎn)陰組中用藥前水平較高，用藥后2個月時略有下降，用藥6個月與用藥前下降幅度較大，可能與耐多藥結(jié)核發(fā)病機(jī)制以及耐多藥患者的用藥機(jī)理有關(guān)。IL-4、IL-6、IL-10主要介導(dǎo)的是體液免疫，協(xié)助B細(xì)胞激活生成抗體，具有清除寄生蟲感染的作用[10]。15例培養(yǎng)未轉(zhuǎn)陰組中IL-17、IL-6、TNF-α、IL-4在治療前后差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，TNF-α用藥后開始升高，IL-17、IL-6、IL-4用藥前較高2個月后降低，6個月后呈現(xiàn)升高趨勢；IL-2、IL-10、IFN-γ周期性治療過程中無顯著性差異，用藥后2～6個月細(xì)胞因子的變化較用藥前是相反趨勢的現(xiàn)象，提示有可能出現(xiàn)治療失敗，與機(jī)體內(nèi)菌量是否得到控制，機(jī)體免疫功能是否恢復(fù)具有相關(guān)性。從細(xì)胞因子的基本功能的角度理解，更加提醒人們細(xì)胞因子在抗結(jié)核免疫過程中的復(fù)雜性，體液免疫以及細(xì)胞免疫都有參與結(jié)核病發(fā)生發(fā)展過程[11]。結(jié)核分枝桿菌可以引起人體細(xì)胞免疫產(chǎn)生IL-17[12-17]促炎因子的作用[18]，大量免疫細(xì)胞因血清中存在大量的IL-17而延遲凋亡，會對人體造成非常大的危害，因為其最終引發(fā)機(jī)體發(fā)生免疫病理反應(yīng)，炎性反應(yīng)部位召集了大量的效應(yīng)細(xì)胞，進(jìn)而迅速聚集到一起，集中消滅結(jié)核分枝桿菌，但正常情況下是否能殺死體內(nèi)的結(jié)核分枝桿菌可能還取決于機(jī)體免疫系統(tǒng)的狀態(tài)以及菌量的多少，上述情況均存在個體差異[19-21]。IL-17在耐多藥結(jié)核培養(yǎng)轉(zhuǎn)陰組與初治組發(fā)展趨勢較為一致，用藥前以及用藥后2個月、6個月數(shù)值持續(xù)下降恢復(fù)正常，治療有效，結(jié)核菌被消滅后逐漸減少。

耐多藥結(jié)核患者機(jī)體免疫細(xì)胞較紊亂，抑制性T細(xì)胞增加，且T細(xì)胞釋放出大量的細(xì)胞因子參與免疫調(diào)節(jié)及免疫病理反應(yīng)中。初治患者：患者臨床癥狀較重，免疫反應(yīng)性較強(qiáng)，所以隨病情變化的IL-17及IFN-γ含量較高；復(fù)治組：記憶型T細(xì)胞釋放大量細(xì)胞因子，以IL-2、IL-4變化為主含量較高；培養(yǎng)轉(zhuǎn)陰組：IL-6、TNF-α、IL-17、IL-10、IFN-γ、IL-2各階段呈現(xiàn)規(guī)律性變化，且逐漸恢復(fù)到正常水平，視為治療有效，可持續(xù)原治療方案，說明免疫系統(tǒng)逐漸恢復(fù)；培養(yǎng)未轉(zhuǎn)陰組：用藥前、用藥后2個月、6個月7種細(xì)胞因子均無出現(xiàn)規(guī)律性變化，用藥2個月、6個月較用藥前呈現(xiàn)相反的變化趨勢提示可能治療未成功，機(jī)體內(nèi)的結(jié)核菌仍未減少，免疫功能仍未徹底恢復(fù)。耐多藥結(jié)核患者用藥前與用藥后的免疫保護(hù)功能、免疫抑制功能、免疫記憶功能發(fā)生了很大的變化，依據(jù)變化的指標(biāo)對耐多藥患者的治療效果給予建議性評估。

綜上所述，結(jié)果提示對于耐多藥結(jié)核患者體內(nèi)的輔助性T細(xì)胞以及抑制性T細(xì)胞較正常對照組有所增高并且存在統(tǒng)計學(xué)意義，實驗又對研究數(shù)據(jù)進(jìn)行了重新分組，依據(jù)T細(xì)胞相對值的變化規(guī)律了解患者體內(nèi)的免疫功能狀況，通過細(xì)胞因子在不同分組不同周期變化的情況可以初步推斷出患者經(jīng)過用藥是否有效，而及時做出治療方案的調(diào)整，同時使用免疫抑制劑治療耐多藥結(jié)核病提供指導(dǎo)意見。

確診耐多藥結(jié)核病后進(jìn)行抗結(jié)核治療過程中體內(nèi)發(fā)生的細(xì)胞免疫以及體液免疫依據(jù)T細(xì)胞變化規(guī)律初步推測患者免疫功能狀態(tài)，及時做出治療方案的調(diào)整。依據(jù)機(jī)體內(nèi)細(xì)胞因子變化的規(guī)律了解初治、復(fù)治、培養(yǎng)轉(zhuǎn)陰患者、培養(yǎng)未轉(zhuǎn)陰患者體內(nèi)免疫反應(yīng)的狀況、免疫保護(hù)功能恢復(fù)情況、細(xì)胞因子周期性表達(dá)進(jìn)行評估，從而協(xié)助臨床醫(yī)生對臨床用藥是否有效性的預(yù)判及治療效果的評估參考依據(jù)，以及該病種進(jìn)行基因免疫制劑治療開拓了新的思路和方向。