黃文達，王晟，劉維亞

（1.惠陽三和醫(yī)院檢驗科，廣東 惠州 516000；2.葛洲壩集團中心醫(yī)院檢驗科，湖北 宜昌 443002）

肌酸激酶（CK）和肌酸激酶MB同工酶（CKMB）在臨床上是心肌受損的常用酶學指標[1]，CKMB是CK的亞型之一，因此從理論上來說CK-MB的活性肯定是小于CK的。在實驗室經常會遇到CK與CK-MB結果不相符合的情況，CK結果在正常范圍，而CK-MB的檢測結果卻明顯偏高。這是由于CM-MB方法學局限所導致的[2,3]，但CK-MB遠大于CK的情況較少[4]，筆者遇到一例，現(xiàn)報告如下。

1 資料與方法

1.1 資料 2016年12月18日將送檢的生化樣本3500r/min離心10min，然后立即上機檢測。CK-MB項目在貝克曼庫爾特AU680生化分析儀使用廣州科方免疫抑制法試劑進行檢測，嚴格按照試劑說明書執(zhí)行，采用因子校正，使用朗道質控品,當日質控在控，血清標本狀態(tài)正常，無脂濁、無溶血，可忽略溶血對結果的影響[5]。臨床診斷疑心肌梗塞。檢測結果為 CK：845U/L，CK-MB：5736U/L，直接復查結果相近（當日其它結果無異常）。兩項結果嚴重不匹配，CK-MB結果極度異常！檢查此例反應曲線，見圖1。發(fā)現(xiàn)檢測點21~27之間反應產生吸光度變化 （OD）僅為0.0202，而儀器顯示OD竟為0.6862。仔細觀察過后發(fā)現(xiàn)圖1中從監(jiān)測點11點到14點吸光度急速上升，14點后趨于平緩。懷疑將讀數(shù)點前移，以11~14點作為反應監(jiān)測點。

生化分析儀參數(shù)設置里 “Lag time check”，即“延遲時間檢查”，實際上就是讀數(shù)點的前移功能。在底物耗盡時反應的前后不呈線性,讀點前移功能可以規(guī)避這個缺陷,那么儀器會把讀數(shù)點前面呈線性的部分作為計算讀點,經過換算得出結果[6,7]。AU系列原配系統(tǒng)應用參數(shù)補充說明，此功能僅限與Rate法項目,是指所有反應組分加入以后至第一個讀數(shù)點之前的一段時間。也包括第一個讀數(shù)點在內，至少有3個點才能進行線性判斷。這是儀器觸發(fā)“延遲時間檢查”功能的前提條件，必須滿足這個判斷規(guī)則,該功能才能啟動，也就是讀數(shù)點前移，拓展了線性范圍，減少了復查率。主要應用在檢測發(fā)生底物耗盡，反應提前結束的Rate法項目，這個時候該項功能發(fā)揮到較好的作用[8]。

在設備參數(shù)設置里Linearity Limit即線性區(qū)間，試劑說明書上有指出10%~30%不等，一般情況下原裝試劑15%，非原裝試劑25%。Rate法即連續(xù)監(jiān)測法,在反應開始到反應結束都會有吸光度的變化，在整個過程中檢測的OD值就是監(jiān)測點，每點間隔18s。速率法在測試的過程中都必須建立在線性范圍內[9]。點與點之間OD值的變化不能超過設定的范圍(線性范圍)，否則儀器就會有報警信息提示。同時讀點間的OD區(qū)間是來判斷選取的讀點間的反應是否在線性范圍內，如果不在范圍內，結果不可信，必須稀釋復查。同樣如果啟用該功能，那么啟用后所選取的讀點間的OD區(qū)間也必須在設定的線性范圍內,否則因讀點前移所得結果也是不可信。因此OD區(qū)間不是作為“延遲時間檢查”啟用的條件,而是作為判斷讀點是否在要求線性范圍內。

那么導致這么高的結果是否是因為啟用 “延遲時間檢查”功能呢？關閉此功能就能知道。

1.2 方法 對當日所有含有CK-MB檢測項目的標本分別在開啟和關閉“延遲時間檢查”功能的情況進行復查，將所選取的標本按順序編號分為兩批，手工編輯在AU680上機檢測,再將其結果進行對比。

2 結果與分析

2.1 結果 在開啟和關閉“延遲時間檢查”復查，上述結果極端異常樣本結果分別為：開啟時5736U/L、關閉時169U/L，其他含有CK-MB檢測項目的樣本結果一致。

2.2 原因分析 為何這例CK-MB在開啟和關閉“延遲時間檢查”功能情況下兩次檢測結果相差巨大呢？我們仔細對比分析了一下在開啟和關閉“延遲時間檢查”功能情況下兩次檢測反應曲線圖。注：兩次都為同一標本。

圖1 使用“延遲時間檢查”反應曲線

圖2 未使用“延遲時間檢查”反應曲線

從圖1中可以看到監(jiān)測點11點到14點處吸光度急速上升，14點后趨于平緩。從OD值來看，11-14點變化在整個反應曲線中最大的，再來看看它是否符合線性判斷，21點是第一個讀數(shù)點，21點之前到11點有4個讀數(shù)點 （11～14且此段斜率明顯大于21～27點）滿足線性判斷（15～20點因與21～27點斜率相同故儀器自動否定），讀點前移符合條件啟動。從反應原理來看,讀數(shù)點應該在21～27之間。見圖2，關閉了“延遲時間檢查”功能從曲線和吸光度的變化來看21～27點幅度較小，最后計算的反應OD和濃度都比較低，它計算的范圍也正是參數(shù)設置的OD區(qū)間(-2.0至2.0)。因此圖2所示檢測結果才是真實結果。

分別將11～14點和21～27點之間吸光度變化均換算到單位時間內,均與儀器顯示OD值相符。經過多次測試后，測試的結果也相符，不是一次的偶然誤差導致。確定此例CK-MB出現(xiàn)異常高值正是因為在開啟“延遲時間檢查”功能帶來的讀數(shù)點前移，導致計算OD值發(fā)生變化。11～14點是懷疑血清中存在的顯色反應的中間產物而導致的吸光度變化，不僅僅是CK-MB酶催反應帶來的變化。

3 討論

“延遲時間檢查”功能僅適用于連續(xù)監(jiān)測法，但并不是適用Rate法的所有項目。在使用自建系統(tǒng)，應用參數(shù)設置不夠嚴謹，此時進行CK-MB項目檢測，一旦開啟“延遲時間檢查”功能，儀器計算出來的結果很有可能不是真實結果,極有可能因為干擾物反應OD變化過大帶來極大的誤差，因此部分樣本的 CK-MB檢測不適合開啟 “延遲時間檢查”功能，故建議在該項目上關閉此功能。同時建議使用化學發(fā)光的方法測定CK-MB,能得出準確的結果[10]。通過比較發(fā)現(xiàn)，此功能不適合在CK-MB檢測中使用，其他項目有待大家探討。任何方法學的確認都必須建立在認證的基礎上,方法學認證需要在正確度，精密度，線性范圍，靈敏度等各方面的性能驗證。而部分非配套試劑CK-MB說明書的參數(shù)設置里明確標出“YES”在這個功能上。經查證原廠原裝試劑在這個項目上并沒有開啟這項功能。