李辰，茍菲，張?zhí)熹h

（南陽醫(yī)學(xué)高等專科學(xué)校第一附屬醫(yī)院普通外科，河南 南陽 473053）

流行病學(xué)研究證實(shí)，我國(guó)部分地區(qū)2010-2017年胰腺癌的平均發(fā)病率可達(dá)284~593/10萬人左右[1]。臨床上胰腺癌的無瘤生存時(shí)間不足18個(gè)月，綜合性治療措施治療后的3年生存率不足35%，臨床整體預(yù)后較差[2]。

在揭示胰腺癌的發(fā)病病因的過程中,可以發(fā)現(xiàn)腫瘤相關(guān)調(diào)控蛋白或者分子的改變,能夠通過影響到胰腺上皮細(xì)胞的多種病理機(jī)理的激活,從而促進(jìn)了胰腺癌的發(fā)生。鈣囊素（S100A11）的表達(dá)上升，能夠通過結(jié)合細(xì)胞膜內(nèi)的鈣離子,進(jìn)而激活癌細(xì)胞內(nèi)的腫瘤信號(hào)通路，提高了癌細(xì)胞核DNA的轉(zhuǎn)錄速度[3]；低氧誘導(dǎo)因子-1α（HIF-1α）能夠通過誘導(dǎo)缺氧性環(huán)境，促進(jìn)癌細(xì)胞氧化應(yīng)激性損傷，增加了癌細(xì)胞的持續(xù)性異常分裂和擴(kuò)增的風(fēng)險(xiǎn)[4]。部分研究者探討了HIF-1α的表達(dá)在卵巢癌患者中的表達(dá)情況，認(rèn)為HIF-1α的表達(dá)上升能夠顯著促進(jìn)卵巢癌患者臨床預(yù)后的惡化,加劇卵巢癌患者臨床分期的進(jìn)展[5]，但在胰腺癌患者中的研究較少。為了揭示S100A11、HIF-1α的表達(dá)與胰腺癌的關(guān)系,從而為臨床上胰腺癌患者的綜合性診療提供理論基礎(chǔ),本次研究選取我院病理科2015年3月-2016年12月收治的80例胰腺癌組織,探討了S100A1 1、HIF-1α的表達(dá)及其與胰腺癌患者臨床病理特征的關(guān)系，報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取我院病理科2015年3月-2016年12月收治的80例胰腺癌組織(胰腺癌)、胰腺癌術(shù)后切緣經(jīng)病理學(xué)檢查證實(shí)為正常胰腺組織40例（癌旁組組織）。

胰腺癌組，年齡42~77歲，平均59.4±10.6歲，男44例、女36例；TNM分期：Ⅰ期18例、Ⅱ期34例、Ⅲ期28例；胰腺癌分化程度：高分化22例、中分化31例、低分化27例；發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移39例；胰腺頭部72例、胰腺體尾部8例。癌旁組織，年齡42~75歲，平均58.7±9.8歲，男21例、女19例。兩組患者的年齡、性別比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。

納入標(biāo)準(zhǔn)：⑴胰腺癌的診斷標(biāo)準(zhǔn)參考《胰腺癌綜合診治專家共識(shí)2016年版》中的標(biāo)準(zhǔn)；⑵經(jīng)病理學(xué)證實(shí)為胰腺癌，病理學(xué)類型均為導(dǎo)管腺癌；⑶手術(shù)前患者未接受放化療；⑷患者年齡19～79歲；⑸本研究獲得醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)的批準(zhǔn)、患者知情同意，各項(xiàng)資料完整。

排除標(biāo)準(zhǔn)：⑴合并其他部位的惡性腫瘤；⑵手術(shù)前已經(jīng)接受了放化療；⑶資料缺失，無法進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。

1.2 S100A11蛋白、HIF-1α蛋白檢測(cè)方法 采用石蠟進(jìn)行連續(xù)性切片，脫蠟至水后采用H2O2室溫下孵育10min,磷酸鹽緩沖液沖洗3次,每次3~5min,8%的蛋白粉封閉液(商品名：BSA購自南京博奧生物科技公司)，封閉2h，倒去封閉液后加入一抗（兔來源 濃度1：1000~1500）,4℃冰箱過夜，磷酸鹽緩沖液沖洗3次,每次3~5min,加入二抗（鼠來源1：400~500），室溫孵育 20~30min，磷酸鹽緩沖液沖洗3次，每次3~5min，加入辣根酶或堿性磷酸酶的標(biāo)記物，室溫孵育10min，磷酸鹽緩沖液沖洗3次，每次3~5min，滴加顯色劑（DAB購自南京博奧生物科技公司），復(fù)染，脫水，封片。

1.3 免疫組化結(jié)果判斷 免疫組化結(jié)果判定：S100A11蛋白的陽性著色表達(dá)于細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核、HIF-1α蛋白的陽性著色表達(dá)于細(xì)胞質(zhì),呈黃色、棕黃色、褐色表達(dá),⑴根據(jù)著色強(qiáng)度：0分為無色、1分為淡黃色、2分為棕黃色、3分為褐色、黑色；⑵根據(jù)陽性細(xì)胞比例：陽性細(xì)胞數(shù)目所占比例≤10%為1分、陽性細(xì)胞所占比例11%～50%為2分、陽性細(xì)胞數(shù)51%～75%為3分、陽性細(xì)胞數(shù)所占比例>75%為4分，兩種積分相乘總分<3分為陰性、≧3分為陽性。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 符合正態(tài)分布的計(jì)量數(shù)據(jù)表述采用（x±s）表示，正態(tài)分布檢測(cè)方法采用pp圖或者qq圖，兩組間比較采用兩組獨(dú)立樣本的t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)；相關(guān)性分析采用Spearman秩相關(guān)分析法；P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，統(tǒng)計(jì)軟件采用SPSS16.0版本。

2 結(jié)果

2.1 兩組標(biāo)本中的S100A11、HIF-1α蛋白情況比較 胰腺癌組織中的S100A11蛋白、HIF-1α蛋白陽性表達(dá)率分別為77.50%、70.00%,癌旁組織的S100A11蛋白、HIF-1α蛋白陽性表達(dá)率分別為17.50%、10.00%,兩組比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；見表 1，圖 1、圖 2。

2.2 胰腺癌組織的S100A11蛋白、HIF-1α蛋白表達(dá)相關(guān)性 胰腺癌組織中的S100A11蛋白與HIF-1α蛋白表達(dá)無顯著的相關(guān)性（Spearman秩相關(guān)系數(shù)=0.170，P=0.132>0.05）；見表 2。

表1 兩組標(biāo)本中的S100A11蛋白、HIF-1α蛋白情況比較[n（%）]

圖1 S100A11蛋白免疫組化檢測(cè)結(jié)果（×200）

圖2 HIF-1α蛋白免疫組化檢測(cè)結(jié)果（×200）

表2 胰腺癌組織的S100A11蛋白、HIF-1α蛋白表達(dá)相關(guān)性

2.3 胰腺癌組織的S100A11蛋白在不同病理參數(shù)組織中的表達(dá)差異 在Ⅲ期胰腺癌組織中的S100A11蛋白陽性表達(dá)率顯著的高于Ⅰ期和Ⅱ期，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；在不同病灶直徑、分化程度、是否發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的胰腺癌組織中的S100A11蛋白陽性表達(dá)率差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）；見表 3。

2.4 胰腺癌組織的HIF-1α蛋白在不同病理參數(shù)組織中的表達(dá)差異 在Ⅲ期胰腺癌組織中、發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的胰腺癌組織中、病灶直徑＞3cm胰腺癌組織中的HIF-1α蛋白陽性表達(dá)率顯著的高于Ⅰ期和Ⅱ期、未發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、病灶直徑≤3cm的胰腺癌組織，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；在不同分化程度的胰腺癌組織中的HIF-1α蛋白陽性表達(dá)率差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）；見表4。

表3 胰腺癌組織的S100A11蛋白在不同病理參數(shù)組織中的表達(dá)差異

表4 胰腺癌組織的HIF-1α蛋白在不同病理參數(shù)組織中的表達(dá)差異

3 討論

胰腺導(dǎo)管上皮細(xì)胞的持續(xù)性病變,能夠顯著促進(jìn)胰腺癌的發(fā)生,特別是在合并有膽道系統(tǒng)疾病的患者中，胰腺癌的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)可進(jìn)一步的上升[6]。臨床上長(zhǎng)期的觀察發(fā)現(xiàn),胰腺癌患者的五年生存率或者中位生存時(shí)間等預(yù)后指標(biāo)不佳,其治療后的總體生存時(shí)間往往不足32個(gè)月[7]。免疫靶向性治療能夠在消化系統(tǒng)惡性腫瘤的輔助治療過程中發(fā)揮作用,其能夠抑制癌細(xì)胞的DNA的擴(kuò)增速度，降低癌細(xì)胞的復(fù)發(fā)風(fēng)險(xiǎn)。而本次研究對(duì)于胰腺癌患者體內(nèi)S100A11、HIF-1α的表達(dá)分析研究，不僅能夠揭示胰腺癌的發(fā)病機(jī)制,同時(shí)還能夠?yàn)榕R床上胰腺癌患者的免疫靶向性治療提供治療研究靶點(diǎn)。

S100A11是S100蛋白家族成員,其主要表達(dá)于血管內(nèi)皮細(xì)胞或者平滑肌細(xì)胞中,在鈣離子濃度的調(diào)控下,S100A11的表達(dá)濃度可顯著上升。S100 A11的上升能夠通過結(jié)合上皮細(xì)胞膜上的糖蛋白配體結(jié)構(gòu)，誘導(dǎo)癌細(xì)胞內(nèi)的第二信使的激活，增加了癌細(xì)胞內(nèi)MAPK或者AKT信號(hào)通路的激活程度,導(dǎo)致胰腺導(dǎo)管上皮細(xì)胞的畸變的發(fā)生[8]；HIF-1α是缺氧誘導(dǎo)因子家族成員,其羧基結(jié)構(gòu)上包含了數(shù)個(gè)磷酸化結(jié)構(gòu),能夠參與到炎癥反應(yīng)或者惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展過程中。HIF-1α誘導(dǎo)的局部腫瘤微環(huán)境的改變,能夠?qū)е掳┗蛲蛔冿L(fēng)險(xiǎn)的顯著上升，導(dǎo)致癌基因錯(cuò)配修復(fù)能力的下降[9]。基礎(chǔ)方面的研究還認(rèn)為，HIF-1α的上升能夠抑制癌細(xì)胞的凋亡，導(dǎo)致癌細(xì)胞G0/S期比例的下降[10]。部分研究者探討了HIF-1α的表達(dá)與胰腺癌的關(guān)系，認(rèn)為HIF-1α的表達(dá)與胰腺癌的發(fā)生密切相關(guān)，但對(duì)于S100A11的探討分析較少。

通過對(duì)于胰腺癌和癌旁組織的免疫組化分析可見,在胰腺癌組織中，S100A11、HIF-1α的表達(dá)濃度均明顯的上升,高于癌旁組織，差異較為明顯，提示了S100A11、HIF-1α的高表達(dá)均能夠促進(jìn)胰腺癌的發(fā)生發(fā)展。通過匯集不同的相關(guān)文獻(xiàn)，筆者認(rèn)為這主要由于S100A11、HIF-1α的下列幾個(gè)方面的作用機(jī)理有關(guān)[11-13]：⑴S100A11的上升能夠?qū)е掳┘?xì)胞的鈣離子濃度的調(diào)控異常,增加了鈣離子誘導(dǎo)的癌細(xì)胞內(nèi)轉(zhuǎn)錄激活因子的上調(diào),提高了癌細(xì)胞DNA的轉(zhuǎn)錄和增殖活性；⑵HIF-1α能夠通過誘導(dǎo)低氧微環(huán)境，促進(jìn)癌細(xì)胞的畸變，導(dǎo)致癌細(xì)胞浸潤(rùn)能力和侵襲能力的增強(qiáng)。Zhang Q等[14]研究者也認(rèn)為,在胰腺癌患者中，HIF-1α的表達(dá)濃度可平均上升30%以上,特別是在短期內(nèi)腫瘤病灶組織擴(kuò)散較為顯著的患者中，HIF-1α的表達(dá)上升更為顯著。但本文并未發(fā)現(xiàn)S100A11、HIF-1α的表達(dá)具有相關(guān)關(guān)系,推測(cè)二者在影響到胰腺癌的發(fā)生過程中，并無顯著的協(xié)同作用效果。在臨床分期較晚的胰腺癌患者中，S100A11蛋白的表達(dá)陽性率顯著上升,提示了S100A11與胰腺癌患者的臨床病理特征密切相關(guān),這主要由于S100A11的表達(dá)上升，能夠促進(jìn)胰腺導(dǎo)管上皮細(xì)胞浸潤(rùn)能力的提升,導(dǎo)致癌細(xì)胞對(duì)于腹腔內(nèi)其他臟器組織的累及風(fēng)險(xiǎn)的上升，增加了臨床分期水平。但部分研究者認(rèn)為，在胰腺癌患者中，S100A11的表達(dá)還與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)[3]，本文并未得出相關(guān)結(jié)論，存在不同結(jié)論,考慮可能與S100A11蛋白的檢測(cè)靈敏程度的差別有關(guān)。同樣，在臨床分期較晚、發(fā)生了淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移或者腫瘤病灶組織大于3cm的患者中，HIF-1α的表達(dá)濃度同樣明顯的上升,提示HIF-1α與胰腺癌的發(fā)生同樣具有密切的關(guān)系,這主要由于HIF-1α的上升，能夠?qū)е掳┘?xì)胞粘附淋巴結(jié)組織能力的增強(qiáng)，提高了癌細(xì)胞的擴(kuò)散和浸潤(rùn)過程，進(jìn)而增加了腫瘤病灶組織大小[15]。

綜上所述，在胰腺癌患者中，S100A11、HIF-1α的表達(dá)均明顯上升,同時(shí)S100A 11、HIF-1α的表達(dá)與胰腺癌患者的臨床病理特征密切相關(guān)。