劉振麗 馬 賽 張 璇 安 峰 劉 博

黏液表皮樣癌（mucoepidermoid carcinoma，MEC）是唾液腺腫瘤中常見的惡性腫瘤之一，不同程度的分化，腫瘤的生物學(xué)行為和預(yù)后有很大差異[1]。MEC 的生物學(xué)行為多樣，在臨床中高- 中分化MEC 較多見，其臨床表現(xiàn)有時與多形性腺瘤相似，呈無痛性腫塊，發(fā)病隱匿，初期無明顯癥狀，生長緩慢，通常病史較長，若手術(shù)切除不徹底，術(shù)后可復(fù)發(fā)，但很少發(fā)生頸淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移；相反，低分化者常伴局部疼痛，生長較快，侵襲和轉(zhuǎn)移能力遠(yuǎn)遠(yuǎn)比高-中分化者強(qiáng)，術(shù)后易復(fù)發(fā)，預(yù)后相對較差。

研究發(fā)現(xiàn)，在很多腫瘤中能夠檢測到癌胚抗原家族的過度表達(dá)，其中癌胚抗原相關(guān)細(xì)胞黏附分子5（CEACAM5）和 6（CEACAM6）研究較多見，它們是癌胚抗原亞型，屬于免疫球蛋白基因超家族，是癌胚抗原家族的重要成員之一，其與細(xì)胞的黏附有關(guān)[2]。本研究采用免疫組織化學(xué)方法檢測CEACAM5 和CEACAM6 蛋白在MEC 和鄰近正常唾液腺組織中的表達(dá)，分析兩者在MEC 發(fā)展過程中的臨床病理意義，為MEC 的早期診斷和臨床治療提供科學(xué)依據(jù)。

資料和方法

1.研究對象：收集河北北方學(xué)院附屬第一醫(yī)院口腔科2010 年6 月至2018 年6 月接受腫瘤手術(shù)切除且術(shù)后病理診斷為MEC 的60 例石蠟包埋組織標(biāo)本作為研究對象，所有標(biāo)本均有完整的臨床和病理資料，且術(shù)前未接受放療、化療和其他干預(yù)治療。以上病例的病理標(biāo)本均由資深病理科醫(yī)師按照WHO（2005 年）制定的涎腺腫瘤組織病理學(xué)分類標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行診斷和分型。同時選擇30 例手術(shù)切除的癌旁正常的涎腺組織標(biāo)本作為對照組。60 例MEC 患者中，男性 21 例，女性 39 例；患者年齡分布：21～79 歲，中位年齡55 歲，其中年齡≥55 歲31 例，＜55 歲29例；按照腫瘤分化程度，分為高-中分化47 例，低分化13 例；以腫瘤臨床分期進(jìn)行分類，Ⅰ～Ⅱ期40例患者，Ⅲ～Ⅳ期20 例患者；按照有無頸部淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移分類，其中伴有頸部淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移14 例，無頸部淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移46 例。

2.試劑：鼠抗人 CEACAM5 和 CEACAM6 單克隆抗體購自英國abcam 公司；SP 即用型顯色試劑盒購于北京中杉生物技術(shù)有限公司。

3.實(shí)驗(yàn)方法：將實(shí)驗(yàn)組和對照組蠟塊按4μm 厚度作連續(xù)切片，脫蠟至水，枸椽酸熱修復(fù)，分別滴加一抗 CEACAM5（1：75）和 CEACAM6（1：75）單克隆抗體。以后按SP 試劑盒說明書操作，蘇木素復(fù)染，常規(guī)脫水，中性樹脂封片。

4.結(jié)果判定：細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞膜出現(xiàn)棕黃色為陽性CEACAM5 和CEACAM6 細(xì)胞。隨機(jī)選擇10 個典型的高倍視野區(qū)域（×200），并根據(jù)每個視野中細(xì)胞染色程度和陽性細(xì)胞數(shù)占所觀察細(xì)胞總數(shù)的百分比對標(biāo)本進(jìn)行評分。染色程度：基本不著色為0 分，淺黃色為1 分，棕黃色為2 分，棕褐色為3 分。陽性細(xì)胞計數(shù)：無陽性細(xì)胞記為0 分，＜25%為1 分，25%～50%為2 分，＞50%為3 分。取其平均值，將每張切片的染色程度得分與陽性細(xì)胞計數(shù)得分各自相乘，為其最后得分，得分：0～1 分為陰性（-），2～3分為（+），4～6 分為（++），6 分以上為（+++）。

5.統(tǒng)計學(xué)方法：采用SPSS 21.0 對數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析。計數(shù)資料的組間數(shù)據(jù)比較采用χ2檢驗(yàn)，兩指標(biāo)之間的相關(guān)性分析采用Spearman 秩相關(guān)檢驗(yàn)，P＜0.05 認(rèn)為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

結(jié) 果

CEACAM 5 和CEACAM6 蛋白主要表達(dá)于腫瘤細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞膜，在胞質(zhì)或胞膜出現(xiàn)棕黃色 顆 粒 （圖1～2）。 MEC 組 中 CEACAM5 和CEACAM6 蛋白的陽性表達(dá)率分別為68.3%（41/60）和65%（39/60），明顯高于正常唾液腺組織中的40%（12/30）和 36.7%（11/30），差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），見表1。

圖1 CEACAM5 在 MEC 的表達(dá)（SP ×200）

圖2 CEACAM6 在 MEC 的表達(dá)（SP ×200）

CEACAM5 和 CEACAM6 在 MEC 組中的陽性表達(dá)與患者性別及年齡無關(guān)（P＞0.05）；兩種蛋白在低分化MEC 中的陽性表達(dá)率分別為92.3%（12/13）和92.3%（12/13），明顯高于高-中分化組中的61.7%（29/47）和 57.4%（27/47）（P＜0.05），臨床分期Ⅲ～Ⅳ期陽性表達(dá)率分別為 90%（18/20） 和90%（18/20）高于Ⅰ～Ⅱ期的57.5%（23/40）和52.5%（21/40）（P＜0.05），頸淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組中的陽性表達(dá)分別為 100%（14/14）和 92.9%（13/14，）高于無頸淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組的 58.7%（27/46） 和 56.5%（26/46）（P＜0.05），見表1。

60 例 MEC 中，31 例 CEACAM5 和 CEACAM6均為陽性表達(dá)，11 例均為陰性表達(dá)；CEACAM5 表達(dá)陽性，CEACAM6 表達(dá)陰性者10 例；其余8 例則為CEACAM5 表達(dá)陰性，CEACAM6 表達(dá)陽性。經(jīng)Spearman 秩相關(guān)檢驗(yàn)分析，二者在MEC 中的表達(dá)呈正相關(guān)關(guān)系（r＝0.327，P＝0.011），見表2。

表1 CEACAM5 和 CEACAM6 在 MEC 及鄰近正常唾液腺組織中的表達(dá)與臨床病理之間的關(guān)系

表2 CEACAM5 和CEACAM6 在MEC 組織中表達(dá)的相關(guān)性

討 論

黏液表皮樣癌（MEC）好發(fā)于腮腺，腭腺、下頜下腺、舌下腺次之，而其它小唾液腺如磨牙后腺及唇頰等腺體較少見，罕見發(fā)生于頜骨。根據(jù)其發(fā)生部位、惡性程度、分化程度以及有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等，MEC的治療方法及預(yù)后也有很大差異[3，4]。

CEACAM 分子屬于免疫球蛋白基因超家族粘附分子，位于19 號染色體q13.2 區(qū)，所有CEACAM分子均通過不同結(jié)構(gòu)連接于細(xì)胞膜[5]，大多數(shù)人體上皮性惡性腫瘤中過表達(dá)，與腫瘤的生長和侵襲密切相關(guān)[6～8]。研究表明，癌胚抗原（CEA）基因家族中的 CEACAM1、CEACAM5、CEACAM6 及 CEACAM7等四種糖蛋白在腫瘤發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮重要作用，常被作為臨床研究的腫瘤標(biāo)志物。

CEACAM5 在1965 年被首次報道為胃腸道癌胚抗原，研究表明它在腫瘤及健康組織中表達(dá)，但在許多腫瘤組織中卻過表達(dá)。CEACAM5 可作為黏附分子在正常組織細(xì)胞表面表達(dá)，并參與介導(dǎo)細(xì)胞間的黏附。其表達(dá)上調(diào)，能夠改變細(xì)胞極性和正常組織結(jié)構(gòu)，減緩多種細(xì)胞的分化和成熟，導(dǎo)致腫瘤形成。此外，它還具有抑制腫瘤細(xì)胞失巢凋亡的功能[9]。而且已有研究表明CEACAM5 在胃腸道、呼吸道、乳腺、婦科、泌尿系等上皮性腫瘤的良惡性鑒別及預(yù)后評估中起到重要作用。但由于其較高的假陰性和假陽性率，不能作為腫瘤病理診斷和評估腫瘤惡性程度的獨(dú)立指標(biāo)，應(yīng)與其他腫瘤標(biāo)志物聯(lián)合檢測，以增加測定的靈敏度。

CEACAM6 能夠促進(jìn)腫瘤及周邊血管的生成，增加腫瘤的生長速度，促進(jìn)腫瘤的轉(zhuǎn)移。有學(xué)者認(rèn)為CEACAM6 在細(xì)胞黏附、增加腫瘤的抗藥性及抑制腫瘤細(xì)胞失巢凋亡，侵襲，轉(zhuǎn)移等癌的發(fā)生發(fā)展中起重要作用[10]。同時CEACAM6 是唯一能夠影響腫瘤淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的獨(dú)立因素，研究表明胰腺癌患者中，CEACAM6 陰性表達(dá)者，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。因此推測CEACAM6 可能是胰腺癌防治及侵襲轉(zhuǎn)移的有效靶點(diǎn)之一[11]。

本研究結(jié)果推測CEACAM5 和CEACAM6 在MEC 中可能發(fā)揮致癌作用。同時研究結(jié)果還顯示兩種蛋白的過表達(dá)，與MEC 分化程度和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，低分化MEC 中的CEACAM5 和CEACAM6陽性表達(dá)率高于高-中分化組，即腫瘤惡性度越高，二種蛋白表達(dá)率越高，存在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者CEACAM5 和CEACAM6 陽性表達(dá)高于未發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者；而且兩種蛋白在臨床Ⅲ～Ⅳ期的陽性表達(dá)率明顯高于Ⅰ～Ⅱ期，這也提示CEACAM5 和CEACAM6 在MEC 中發(fā)揮致癌作用。進(jìn)一步分析顯示 CEACAM5 和 CEACAM6 在 MEC 中呈正相關(guān)，表明CEACAM5 和CEACAM6 表達(dá)水平的提高，有助于黏液表皮樣癌的診斷。