林香花 王思勤 張秋興 劉 丹

(河南省人民醫(yī)院變態(tài)反應(yīng)科,鄭州大學(xué)人民醫(yī)院,鄭州 450000)

哮喘是一種過敏性疾病，其特征是慢性氣道發(fā)炎、氣流受限和氣道高反應(yīng)性。哮喘的確切病因尚不清楚。多年來研究表明，Th1、Th2、Treg和Th17細(xì)胞功能障礙在過敏性哮喘中起關(guān)鍵作用，Th1細(xì)胞和Th17細(xì)胞主要分泌促炎細(xì)胞因子IFN-γ和IL-17，而Th2細(xì)胞和Treg細(xì)胞主要分泌抑炎細(xì)胞因子IL-4和TGF-β。當(dāng)T細(xì)胞亞群從Th1向Th2漂移或Th17細(xì)胞減少而Treg細(xì)胞增加時，炎癥反應(yīng)被抑制，反之則加劇炎癥反應(yīng)。OX40L/OX40的相互作用有助于Th1、Th2、Treg和Th17細(xì)胞的分化并維持哮喘的免疫功能平衡[1]。OX40L(CD252，TNFSF4)最初被稱為糖蛋白34 kD(GP34)，屬于TNF超家族，主要在抗原呈遞細(xì)胞(APC)的表面表達(dá)，包括活化的樹突狀細(xì)胞(DCs)、B細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、T細(xì)胞以及內(nèi)皮細(xì)胞[2-4]。OX40(ACT35，CD134，TNFRSF4)在活化的CD4+T細(xì)胞的表面表達(dá)[5,6]。它可以與OX40L特異性結(jié)合并引發(fā)一系列反應(yīng)，這些反應(yīng)有助于促進(jìn)CD4+T細(xì)胞的增殖和存活以及細(xì)胞因子的分泌[7]。

輔助性T細(xì)胞亞群(Th1/Th2)失調(diào)是哮喘的關(guān)鍵發(fā)病機(jī)制。在正常情況下，Th1和Th2細(xì)胞之間的相互抑制有利于體內(nèi)免疫應(yīng)答的平衡[8-10]。Th2型免疫應(yīng)答是由包括IL-4在內(nèi)的細(xì)胞因子介導(dǎo)的，從而促進(jìn)過敏原致敏和超敏反應(yīng)的發(fā)生[11]。Th2細(xì)胞可以分泌IL-4，并拮抗Th1細(xì)胞的產(chǎn)生及IFN-γ 的分泌，從而進(jìn)一步促進(jìn)哮喘的發(fā)展[12]。也有一些研究認(rèn)識到Th1/Th2失衡不能完全解釋哮喘的病因，其他CD4+T細(xì)胞亞群可能與哮喘有關(guān)，包括Th17細(xì)胞和Treg細(xì)胞[12]。Th17和Treg之間的不平衡可能在過敏性氣道炎癥中也起著關(guān)鍵作用，通常會促發(fā)嗜中性粒細(xì)胞炎癥[13]。另一方面，Treg細(xì)胞通過抑制炎癥反應(yīng)來調(diào)節(jié)對過敏原的免疫應(yīng)答并維持免疫穩(wěn)態(tài)。因此，OX40/OX40L在調(diào)節(jié)哮喘中Th1/Th2和Th17/Treg的平衡中起著至關(guān)重要的作用[14]。

此外，最近的研究表明，哮喘的病因與某些分子和轉(zhuǎn)錄因子有關(guān)。研究表明，PI3K/AKT信號通路可能在調(diào)節(jié)哮喘氣道平滑肌細(xì)胞的增殖中起著至關(guān)重要的作用[15]。LY294002是一種特殊的PI3K抑制劑，能夠在鼠哮喘模型中顯著下調(diào)Akt磷酸化并抑制炎性細(xì)胞浸潤、黏液產(chǎn)生和氣道高反應(yīng)性。氣管內(nèi)給予LY294002能夠減少哮喘小鼠的氣道炎癥[16]。

此外，最近的研究表明，OX40/OX40L的相互作用可能通過調(diào)節(jié)Th1和Th2細(xì)胞相關(guān)的信號通路促進(jìn)免疫應(yīng)答[17]。本研究旨在探討OX40L對哮喘細(xì)胞免疫過程中輔助性T細(xì)胞分化的影響，并考察OX40L是否可以通過PI3K/AKT信號通路誘導(dǎo)輔助性T細(xì)胞分化。

1 材料與方法

1.1材料

1.1.1實(shí)驗(yàn)材料 Percoll 細(xì)胞分離液購自北京索萊寶科技有限公司；卵清蛋白(OVA)、OX40L、IL-4、IFN-γ和IL-17以及TGF-β ELISA試劑盒購自美國Sigma-Aldrich公司；抗p-AKT、AKT、p-p38、p38和GAPDH的一抗購自美國Cell Signaling公司；自動磁選和抗CD4微珠分離試劑盒購自德國Miltenyi Biotec公司；流式細(xì)胞儀、PE抗Foxp3、OX40L-Ig融合蛋白、同型對照IgG、抗小鼠-OX40L單克隆抗體(mAb)購自美國Biolegend公司；ECL試劑蘇木精和伊紅(HE)染色試劑盒購自上海碧云天生物科技有限公司；LSC-LB7低本底液體閃爍計(jì)數(shù)系統(tǒng)購自日立Aloka公司。

1.1.2研究對象 2019年3月至8月期間，分別收集我院收治的20例急性期哮喘患兒和20例穩(wěn)定期哮喘患兒，男女各半。急性期哮喘患兒年齡為5～13歲，平均(8.35±2.56)歲。穩(wěn)定期哮喘患兒年齡為6～13歲，平均(8.41±2.17)歲。另外選擇20例同期體檢的健康兒童作為對照組，男女各半，年齡為6～12歲，平均(8.52±1.53)歲。三組的人口統(tǒng)計(jì)學(xué)資料無顯著差異(P>0.05)。

1.2方法

1.2.1血清樣本檢測 使用酶聯(lián)免疫吸附(ELISA)方法測量血清中的OX40L、Th1(IFN-γ)、Th2(IL-4)、Th17(IL-17)以及Treg(TGF-β)細(xì)胞因子水平。

1.2.2致敏細(xì)胞中OX40L表達(dá)的檢測 參考文獻(xiàn)[18]分離外周血單個核細(xì)胞(PBMC)。通過Percoll 細(xì)胞分離液從昆明小鼠的外周血樣本中分離出外周單個核細(xì)胞。采集EDTA抗凝外周血，采用Percoll 細(xì)胞分離液通過密度梯度離心法分離外周單個核細(xì)胞。將外周血離心后在距白細(xì)胞層5 mm左右停止血漿提取,使用無菌吸管向剩余標(biāo)本中加入等體積RPIM1640培養(yǎng)基稀釋混勻，將稀釋后血液加入裝有細(xì)胞分離液的離心管中，4 000 r/min 室溫離心15 min，棄上清液，將細(xì)胞與RPMI1640培養(yǎng)基及終濃度為1 mg/ml的OVA加入到24孔培養(yǎng)板中，調(diào)整細(xì)胞濃度為 1×106個/孔，每孔總體積 2 ml。然后刺激48 h，磷酸鹽緩沖液(PBS)作為對照。使用ELISA方法測量上清液中的IL-4、IFN-γ和IL-17以及TGF-β水平。并通過ELISA試劑盒檢測OX40L在細(xì)胞表面上的表達(dá)。

1.2.3蛋白磷酸化測定 在裂解緩沖液中制備OVA處理細(xì)胞的蛋白質(zhì)提取物，然后進(jìn)行十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)并轉(zhuǎn)移到硝酸纖維素膜上。封閉膜2 h后與抗p-AKT、AKT、p-p38、p38和GAPDH的一抗一起孵育，然后與HRP標(biāo)記的二抗一起孵育。使用ECL試劑進(jìn)行顯影，GAPDH作為內(nèi)部對照。

1.2.4OX40L對輔助性T細(xì)胞分化的影響 通過自動磁選和抗CD4微珠分離試劑盒分離和純化CD4+T細(xì)胞。所有分選的細(xì)胞群的純度大于95%。將OVA誘導(dǎo)的CD4+T細(xì)胞與OX40L-Ig融合蛋白或?qū)φ誌gG分別孵育48 h。為了估計(jì)T細(xì)胞的增殖，在48 h 培養(yǎng)的最后12 h內(nèi)添加3H-TdR。收獲細(xì)胞并計(jì)數(shù)。通過ELISA測量上清液中的IL-4、IFN-γ、IL-17和TGF-β水平。使用FITC抗CD4、PE抗IFN-γ、PE抗IL-4、PE抗IL-17對Th1、Th2和Th17進(jìn)行流式細(xì)胞分析。Treg細(xì)胞用FITC抗CD4和PE抗CD25染色標(biāo)記，然后與PE抗Foxp3一起孵育。

1.2.5OX40L調(diào)節(jié)輔助性T細(xì)胞分化的信號通路 分別用OX40L-Ig融合蛋白或?qū)φ誌gG誘導(dǎo)OVA誘導(dǎo)的CD4+T細(xì)胞48 h。 Western blot檢測AKT和p38的表達(dá)和磷酸化。此外，將OVA誘導(dǎo)的CD4+T細(xì)胞與OX40L-Ig融合蛋白或?qū)φ誌gG孵育48 h后，加入PI3K/Akt抑制劑LY294002(終濃度50 μmol/L)或p38MAPK抑制劑SB203580(終濃度50 μmol/L)。然后，在48 h培養(yǎng)的最后12 h內(nèi)添3H-TdR(終濃度1 mCi/ml)。收集細(xì)胞并用液體閃爍計(jì)數(shù)系統(tǒng)進(jìn)行計(jì)數(shù)。上清液中的IL-4、IL-17、加IFN-γ和TGF-β水平通過ELISA進(jìn)行測量。通過流式細(xì)胞術(shù)測量Th1、Th2、Th17和Treg的細(xì)胞計(jì)數(shù)。

1.2.6小鼠哮喘實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ偷恼T導(dǎo) 昆明小鼠購自南京醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動物中心，將小鼠飼養(yǎng)在25℃、55%相對濕度、12 h光暗循環(huán)照明的無菌飼養(yǎng)室內(nèi)，給予標(biāo)準(zhǔn)小鼠飼料及純凈水，不限制飲食。為了誘導(dǎo)昆明小鼠哮喘實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ停瑢?00 mg/ml OVA用200 mg/ml氫氧化鋁-生理鹽水溶液乳化，在第0、7和14天通過腹腔內(nèi)注射0.1 ml 0.5%的OVA溶液對小鼠進(jìn)行OVA致敏，然后在第22、24、26和28天進(jìn)行0.5% OVA霧化吸入30 min。將生理鹽水代替OVA處理小鼠作為對照。

1.2.7OX40L-Ig融合蛋白給藥 為了評價OX40L的作用，在OVA致敏的第0、3、7、10和14天，對小鼠模型腹腔注射OX40L-Ig融合蛋白、同型對照IgG或抗小鼠-OX40L單克隆抗體(mAb)。最后一次激發(fā)24 h后,以10%水合氯醛(300 mg/kg)行腹腔注射，然后脫頸椎處死小鼠，并收集肺組織和支氣管肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid,BALF)。

1.2.8細(xì)胞因子的檢測及HE染色 ELISA法檢測BALF中IL-4、IL-17、IFN-γ和TGF-β水平。通過FCM分析小鼠外周血Th細(xì)胞的數(shù)目；將小鼠肺組織用10%多聚甲醛固定并進(jìn)行HE染色評價病理改變。

2 結(jié)果

2.1OX40L在患者血清中的表達(dá) 如表1所示，與穩(wěn)定期哮喘或健康對照受試者相比，急性期哮喘患者的OX40L、IL-4和IL-17水平明顯增加，而IFN-γ 和TGF-β明顯降低。該結(jié)果提示OX40L在哮喘中起著至關(guān)重要的作用。

2.2OX40L在OVA誘導(dǎo)的小鼠單個核細(xì)胞中的表達(dá) 本研究檢測了OVA誘導(dǎo)的小鼠單個核細(xì)胞中OX40L的表達(dá)，結(jié)果表明OVA組的OX40L的表達(dá)明顯高于PBS對照組(表2)。同樣，OVA組的IL-4和IL-17的表達(dá)也比PBS對照組高，然而，OVA組的IFN-γ和TGF-β則明顯降低。此外，OVA組Akt磷酸化水平也明顯升高(圖1)。

2.3OX40L通過PI3K/AKT信號誘導(dǎo)輔助性T細(xì)胞分化 如表3所示，與對照相比，OVA組中CD4+T細(xì)胞的增殖明顯增加，當(dāng)用OX40L-Ig融合蛋白處理時，CD4+T細(xì)胞的增殖進(jìn)一步增加。在OVA組和OVA+OX40L-Ig組中， IL-4和IL-17的水平升高， 而IFN-γ和TGF-β的水平降低。同樣，OVA組和OVA+OX40L-Ig組中Th2和Th17的數(shù)量增加，而Th1和Treg的數(shù)量減少。此外，如圖2所示，OVA誘導(dǎo)的CD4+T細(xì)胞中Akt的磷酸化水平升高，而OX40L-Ig融合蛋白處理的OVA誘導(dǎo)的CD4+T細(xì)胞中Akt的磷酸化水平進(jìn)一步升高。以上結(jié)果表明PI3K/Akt信號通路可能與OX40L誘導(dǎo)的輔助T細(xì)胞分化有關(guān)。

IndexControlAcute asthmaStable asthmaOX40L(ng/L)4.50±0.357.30±0.561)4.47±0.342)IL-4(ng/L)1.17±0.094.64±0.361)2.64±0.201)2)IL-17(ng/L)11.30±0.8722.67±1.741)15.70±1.211)2)IFN-γ(ng/L)15.70±1.219.54±0.731)13.11±1.012)TGF-β(ng/L)62.56±4.8141.46±3.191)52.80±4.061)2)

Note:Compared with control group，1)P<0.05;compared with acute asthma group，2)P<0.05.

IndexPBSOVAOX40L(ng/L)2.32±0.185.46±0.421)IL-4(ng/L)54.36±4.18114.63±8.821)IL-17(ng/L)1.43±0.113.62±0.281)IFN-γ(ng/L)1.64±0.130.95±0.071)TGF-β(ng/L)6.36±0.494.63±0.361)

Note:Compared with PBS group，1)P<0.05.

圖1 Western blot檢測p-Akt和total-Akt蛋白表達(dá)Fig.1 Western blot analysis of p-Akt and total-Akt protein expressionNote:Compared with PBS groups,*.P<0.05.

IndexControlOVAOVA+OX40L-Ig3H-TdR uptake (cpm×103)2.44±0.186.36±0.471)10.64±0.781)2)IL-4(ng/L)64.35±4.7198.56±7.221)135.64±9.941)2)IL-17(ng/L)1.32±0.102.54±0.191)4.18±0.311)2)IFN-γ(ng/L)1.64±0.121.13±0.081)0.65±0.051)2)TGF-β(ng/L)6.47±0.473.17±0.231)1.59±0.121)2)Th1(%)11.64±0.855.75±0.421)2.09±0.151)2)Th2(%)5.74±0.4211.58±0.851)16.34±1.21)2)Th17(%)2.53±0.194.57±0.331)6.74±0.491)2)Treg(%)7.75±0.574.67±0.341)2.35±0.171)2)

Note:Compared with control group，1)P<0.05;compared with OVA group，2)P<0.05.

2.4PI3K/AKT信號抑制劑誘導(dǎo)輔助性T細(xì)胞分化 本研究應(yīng)用PI3K/Akt抑制劑LY294002處理OVA誘導(dǎo)的CD4+T細(xì)胞。如表4所示，LY294002處理后，OVA誘導(dǎo)的CD4+T細(xì)胞中IL-4、IL-17以及Th2和Th17細(xì)胞的數(shù)量明顯減少。說明LY294002可以抑制OVA誘導(dǎo)的Th2和Th17細(xì)胞增殖。相反，LY294002顯著升高了IFN-γ和TGF-β的表達(dá)以及Th1細(xì)胞和Treg細(xì)胞的數(shù)量。說明LY294002可以促進(jìn)OVA誘導(dǎo)的Th1和Treg細(xì)胞的增殖。

2.5OX40L誘導(dǎo)哮喘小鼠模型輔助性T細(xì)胞分化實(shí)驗(yàn) 為了確定OX40L在輔助性T細(xì)胞分化中的作用，本研究建立了哮喘小鼠模型。如表5所示，當(dāng)對照組和OVA組相比時，用OX40L-Ig融合蛋白處理的OVA誘導(dǎo)的小鼠哮喘模型BALF中的IL-4和IL-17水平以及小鼠外周血Th2和Th17細(xì)胞的數(shù)目顯著增加，而IFN-γ和TGF-β水平以及Th1和Treg細(xì)胞的數(shù)目顯著減少。相反，當(dāng)用抗小鼠OX40L單抗處理時，與OVA+OX40L 組相比，IL-4和IL-17水平以及Th2和Th17細(xì)胞的數(shù)量顯著減少，而IFN-γ和TGF-β水平以及Th1和Treg細(xì)胞的數(shù)量明顯增加。這些結(jié)果表明，OX40L的缺失可以抑制Th2和Th17細(xì)胞的分化。

圖2 Western blot檢測OX40L-Ig融合蛋白對Akt磷酸化的影響Fig.2 Western blot analysis of effect of OX40L-Ig fusion protein on Akt phosphorylationNote:Compared with control group，*.P<0.05;compared with OVA group，#.P<0.05.

IndexControlPI3K inhibitor3H-TdR uptake (cpm×103)8.45±0.624.36±0.321)IL-4(ng/L)157.75±11.5662.85±4.601)IL-17(ng/L)3.67±0.271.16±0.081)IFN-γ(ng/L)0.75±0.051.67±0.121)TGF-β(ng/L)2.53±0.195.28±0.391)Th1(%)2.64±0.196.42±0.471)Th2(%)13.86±1.025.84±0.431)Th17(%)6.38±0.472.74±0.201)Treg(%)2.53±0.197.22±0.531)

Note:Compared with control group,1)P<0.05.

IndexControlOVAOVA+IgGOVA+OX40LOVA+Anti-OX40LIL-4(ng/L)6.35±0.4715.56±1.141)14.86±1.091) 22.64±1.661)2)3) 7.89±0.581)2)3)4)IL-17(ng/L)71.67±5.25108.46±7.951)105.75±7.751) 147.85±10.831)2)3)76.90±5.632)3)4)TGF-β(ng/L)423.86±31.05312.86±22.921)308.64±22.611)207.75±15.221)2)3)388.76±28.481)2)3)4)IFN-γ(ng/L)154.64±11.3389.67±6.571)87.56±6.411) 46.85±3.431)2)3)112.96±8.281)2)3)4)Th1(%)8.46±0.626.46±0.471)6.54±0.481) 3.26±0.241)2)3)7.04±0.521)2)3)4)Th2(%)4.24±0.315.34±0.391)5.13±0.381) 7.45±0.551)2)3)4.47±0.332)3)4)Th17(%)2.16±0.164.24±0.311)4.57±0.331) 5.76±0.421)2)3)3.04±0.221)2)3)4)Treg(%)8.15±0.606.36±0.471)6.42±0.471) 4.32±0.321)2)3)7.93±0.582)3)4)

Note:Compared with control group，1)P<0.05;compared with OVA group，2)P<0.05；compared with OVA+IgG group，3)P<0.05；compared with OVA+OX40L group，4)P<0.05.

圖3 HE染色檢測OX40L-Ig融合蛋白和抗小鼠OX40L單抗對哮喘小鼠肺組織病變的影響(×200)Fig.3 Effect of OX40L-Ig fusion protein and anti-mouse OX40L monoclonal antibody on lung tissue lesions in asthmatic mice by HE staining (×200)

為了確定OX40L-Ig融合蛋白和抗小鼠OX40L單抗對哮喘小鼠肺組織病變的影響，采用HE染色評價肺組織病變，如圖3所示，OVA模型組和OVA+IgG組可見炎癥細(xì)胞浸潤明顯增加，尤其是血管周圍和支氣管周圍的淋巴細(xì)胞和嗜酸性粒細(xì)胞浸潤，上皮下基底層增厚。此外，在用OX40L-Ig融合蛋白處理組中，炎癥細(xì)胞浸潤進(jìn)一步加劇。相反，在用抗小鼠OX40L單抗處理后，肺組織中嗜酸性粒細(xì)胞的浸潤明顯減少，并且基底層上皮增厚情況顯著減輕。

3 討論

支氣管哮喘是一種由多種炎癥細(xì)胞和介質(zhì)引起的氣道過敏性炎癥。炎癥細(xì)胞和釋放的介質(zhì)在復(fù)雜的哮喘病原學(xué)中起著重要的作用。本研究探討了OX40L在哮喘中的作用機(jī)理。研究發(fā)現(xiàn)OX40L在哮喘患者中的表達(dá)顯著升高，這表明OX40L與哮喘相關(guān)。其他研究發(fā)現(xiàn)，哮喘兒童在急性發(fā)作期的OX40L水平顯著高于中度和輕度哮喘急性發(fā)作的兒童[19]。此外，與健康對照組相比，輕度哮喘患者中OX40、OX40L和IL-4水平也顯著增加[20]。

Th1/Th2細(xì)胞和Th17/Treg細(xì)胞的平衡與哮喘的發(fā)病過程密切相關(guān)。Th1細(xì)胞和Th17細(xì)胞主要分泌細(xì)胞因子IFN-γ和IL-17，而Th2細(xì)胞和Treg細(xì)胞主要分泌細(xì)胞因子IL-4和TGF-β。本研究發(fā)現(xiàn)急性期哮喘患者的IL-4和IL-17水平明顯增加，而IFN-γ和TGF-β明顯降低。并且OVA誘導(dǎo)的單個核細(xì)胞中的IL-4和IL-17的表達(dá)也顯著升高，而IFN-γ和TGF-β則明顯降低。表明OVA誘導(dǎo)了Th1/Th2細(xì)胞和Th17/Treg細(xì)胞的失平衡。

本研究還發(fā)現(xiàn)OVA誘導(dǎo)的單個核細(xì)胞中OX40L水平升高，這表明OX40L在輔助性T細(xì)胞誘導(dǎo)的哮喘反應(yīng)中起重要作用。具體而言，OX40/OX40L相互作用在T細(xì)胞分化中起潛在作用，并影響Th1/Th2的平衡[21]。OX40L可以激活T細(xì)胞表達(dá)IL-4，并抑制IFN-γ的表達(dá)，從而參與免疫細(xì)胞介導(dǎo)的Th2型免疫應(yīng)答[22]。另外，OX40L還可以誘導(dǎo)Th17細(xì)胞表達(dá)IL-17從而促進(jìn)Th17型免疫應(yīng)答，以及阻止Treg的分化并阻斷其功能[23]。

多項(xiàng)研究顯示，與哮喘有關(guān)的信號傳導(dǎo)途徑，例如酪氨酸激酶信號傳導(dǎo)級聯(lián)在過敏性氣道炎癥中起著至關(guān)重要的作用，而GM-CSF STAT5途徑的激活延遲了哮喘患者肺粒細(xì)胞的凋亡[24-26]。此外，據(jù)報道，TGF-β信號在哮喘氣道中高表達(dá)，并且TGF-β信號的激活可以促進(jìn)哮喘氣道重塑[27]。而PI3K/AKT信號也可促進(jìn)哮喘的進(jìn)展。各種研究表明，抑制PI3K/Akt信號傳導(dǎo)可減輕過敏性哮喘的嚴(yán)重程度[28]。本研究發(fā)現(xiàn)OX40L可顯著激活OVA誘導(dǎo)的單個核細(xì)胞以及CD4+T細(xì)胞中的Akt磷酸化，此外，本研究應(yīng)用PI3K/Akt抑制劑LY294002處理OVA誘導(dǎo)的CD4+T細(xì)胞，發(fā)現(xiàn)抑制PI3K/Akt信號可明顯降低OVA誘導(dǎo)的IL-4和IL-17水平以及Th2和Th17細(xì)胞的數(shù)量，但可升高IFN-γ和TGF-β的表達(dá)以及Th1和Treg細(xì)胞的數(shù)量。表明PI3K/Akt信號通路介導(dǎo)OX40L誘導(dǎo)的輔助性T細(xì)胞的分化。

本研究建立了哮喘小鼠模型，并分別用OX40L-Ig融合蛋白和抗小鼠OX40L單抗處理小鼠，發(fā)現(xiàn)OX40L-Ig融合蛋白處理可加劇哮喘小鼠肺組織中炎癥細(xì)胞浸潤，而用抗小鼠OX40L單抗處理則可抑制肺組織病變。進(jìn)一步證實(shí)OX40L在哮喘發(fā)生中的促進(jìn)作用。OX40/OX40L信號參與調(diào)控Th1、Th2、Treg和Th17細(xì)胞的增殖和分化，并且介導(dǎo)哮喘發(fā)病過程中的重要促炎或抗炎細(xì)胞因子的表達(dá)，研究OX40/OX40L信號作為Th細(xì)胞第二信號的具體生物學(xué)功能有利于進(jìn)一步揭示哮喘的發(fā)病機(jī)制。

總之，本研究表明，OX40L通過PI3K/Akt信號通路誘導(dǎo)了Th2和Th17細(xì)胞的分化，用抗小鼠OX40L單抗阻斷OX40L可以誘導(dǎo)哮喘中的Th1和Treg細(xì)胞分化。