金嫻 樊春卉 朱平安 唐紅 吳意 譚萍 陳芳 黃曉彤

【摘要】 目的：探討免疫層析法、實時熒光定量PCR法對妊娠期婦女B族鏈球菌的檢測效能比，并分析陽性患者相關(guān)影響因素。方法：選擇2018年4月-2019年7月于本院產(chǎn)檢的妊娠晚期孕婦643例為研究對象，采集其陰道-直腸分泌物作為樣本，分別用免疫層析法、實時熒光定量PCR法進(jìn)行檢測，檢測前均對樣本進(jìn)行選擇性肉湯培養(yǎng)基增菌。統(tǒng)計免疫層析法及PCR法的檢測結(jié)果，并以細(xì)菌培養(yǎng)法為金標(biāo)準(zhǔn)，對各檢驗方法的靈敏度、特異度、準(zhǔn)確性進(jìn)行比較。對陽性患者及陰性患者的相關(guān)資料進(jìn)行單因素及多因素Logistic回歸分析。結(jié)果：免疫層析法GBS檢測陽性率為11.8%，PCR法陽性檢測率為11.4%，雖均高于增菌細(xì)菌培養(yǎng)法的9.5%，但差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。免疫層析法檢測GBS的靈敏度63.9%，特異度93.6%，準(zhǔn)確性90.8%。PCR法檢測GBS的靈敏度73.8%，特異度95.2%，準(zhǔn)確性93.2%。免疫層析法與PCR法陽性檢出率、靈敏度、特異度、準(zhǔn)確性比較，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。單因素分析結(jié)果顯示，陽性患者與陰性患者的年齡>32歲、體重指數(shù)>24 kg/m2、妊娠合并糖尿病、妊娠期陰道炎、甲狀腺功能減退、經(jīng)產(chǎn)、流產(chǎn)史比較，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。Logistic回歸分析顯示，年齡>32歲、妊娠合并陰道炎、妊娠合并糖尿病、甲狀腺功能減退、經(jīng)產(chǎn)、流產(chǎn)史均為B族鏈球菌感染的獨(dú)立危險因素（P<0.05）。結(jié)論：增菌后免疫層析法與PCR法對妊娠期婦女B族鏈球菌的陽性檢出率、靈敏度、特異度、準(zhǔn)確性基本一致，免疫層析法操作簡單，用時短，PCR法可批量操作，適應(yīng)性也廣，臨床可根據(jù)受檢者具體情況選擇合理的檢測方式。臨床對高齡、合并陰道炎、合并糖尿病、甲狀腺功能減退、經(jīng)產(chǎn)、流產(chǎn)史的孕婦應(yīng)加強(qiáng)B族鏈球菌的檢測。

【關(guān)鍵詞】 免疫層析 PCR 妊娠 B族鏈球菌

Analysis of the Detection Efficiency Ratio of Immunochromatography and PCR for Group B Streptococcus in Pregnant Women and the Influencing Factors of Positive Cases/JIN Xian， FAN Chunhui， ZHU Pingan， TANG Hong， WU Yi， TAN Ping， CHEN Fang， HUANG Xiaotong. //Medical Innovation of China， 2020， 17（11）： 044-048

[Abstract] Objective： To investigate the detection efficiency ratio of group B streptococcus in pregnant women by immunochromatography and real-time quantitative PCR， and to analyze the influencing factors of positive patients. Method： A total of 643 pregnant women in the third trimester who underwent prenatal examination in our hospital from April 2018 to July 2019 were selected as the study subjects. The vaginal-rectal secretions were collected as samples. Immunochromatographic method and real-time fluorescence quantitative PCR method were used for detection. The samples were selectively enriched by broth medium before detection. The results of immunochromatography and PCR were analyzed， and using bacterial culture as the gold standard， the sensitivity， specificity and accuracy of each method were compared. Univariate and multivariate Logistic regression analysis was performed on the data of positive and negative patients. Result： The positive rate of GBS by immunochromatography was 11.8%， and the positive rate of PCR was 11.4%， both of which were higher than 9.5% of the cultured bacteria， but the differences were not statistically significant （P>0.05）. The sensitivity， specificity and accuracy of GBS were 63.9%， 93.6% and 90.8% by immunochromatography. The sensitivity， specificity and accuracy of GBS were 73.8%， 95.2% and 93.2% by PCR. Comparing the positive detection rate， sensitivity， specificity and accuracy of the immunochromatographic method and the PCR method， the differences were not statistically significant （P>0.05）. The results of single factor analysis showed that the age of positive patients and negative patients were over 32 years old， body mass index > 24 kg/m2， gestational diabetes mellitus， gestational vaginitis， hypothyroidism， menstrual and abortion history， the differences were statistically significant （P<0.05）. Logistic regression analysis showed that age over 32 years old， pregnancy with vaginitis， pregnancy with diabetes mellitus， hypothyroidism， labor and abortion history were all independent risk factors for group B streptococcal infection （P<0.05）. Conclusion： The positive detection rate， sensitivity， specificity and accuracy of group B streptococcus in pregnant women were basically the same as that of PCR. The immunochromatographic method was simple to operate， and the time was short. Clinical can choose the reasonable detection method according to the patients specific situation. In clinic， the detection of group B streptococcus should be strengthened in pregnant women with advanced age， vaginitis， diabetes mellitus， hypothyroidism， labor and abortion history.

[Key words] Immunochromatography Polymerase chain reaction Pregnancy Group B streptococcus

First-authors address： Shenzhen Yantian District Peoples Hospital， Shenzhen 518081， China

doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2020.11.011

B族鏈球菌（group B streptococcus， GBS）是孕婦圍產(chǎn)期常見的感染病原菌，也稱無乳鏈球菌。目前各地區(qū)報道的GBS的檢出率有所差異，檢出率為5%～30%，可能與地區(qū)、種族及檢測方法等因素有關(guān)[1-3]。部分成年女性本身就攜帶有GBS且大多不表現(xiàn)出臨床特征，但是卻極可能會在女性妊娠期間引起相應(yīng)感染，尤其在妊娠晚期，孕婦感染GBS后可能影響妊娠結(jié)局，對孕產(chǎn)婦及新生兒造成不良后果，甚至危及生命。直接接種細(xì)菌培養(yǎng)法對試驗條件要求較低，大多數(shù)醫(yī)院基本都可完成，但是其檢出率低，可能出現(xiàn)漏檢，影響GBS治療。已有文獻(xiàn)表示，免疫層析法、PCR法可快速檢測GBS，且檢出率相對較高[4-5]。本研究主要結(jié)合本院GBS檢測開展情況與相關(guān)文獻(xiàn)，對選擇性肉湯培養(yǎng)基增菌后分別采用免疫層析法、PCR法，并統(tǒng)計分析兩種方法的檢測效能比，同時通過Logistic回歸分析B族鏈球菌感染的影響因素。現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2018年4月-2019年7月于本院產(chǎn)檢的妊娠晚期孕婦643例為研究對象，年齡22～39歲，平均（32.3±3.1）歲。（1）納入標(biāo)準(zhǔn)：孕周35～37周。（2）排除標(biāo)準(zhǔn)：①1周內(nèi)使用過抗菌藥或陰道周圍外用清洗劑;②存在認(rèn)知、溝通障礙。孕婦知情且同意入組并簽署知情同意書，本研究經(jīng)本院醫(yī)學(xué)倫理委員會同意批準(zhǔn)。

1.2 方法與試劑

1.2.1 試劑與儀器 選擇性肉湯培養(yǎng)基由青島海博生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)提供，血平板由鄭州安圖生物工程股份有限公司提供，細(xì)菌鑒定儀由法國生物梅里埃股份有限公司提供，型號VITEK2 COMPACT，免疫層析法試劑盒由北京金沃夫生物工程科技有限公司生產(chǎn)提供，全自動熒光定量PCR儀由美國應(yīng)用生物系統(tǒng)公司提供，型號VIIA 7DX，GBS核酸檢測試劑盒及陰、陽對照試劑盒由中山大學(xué)達(dá)安基因股份有限公司生產(chǎn)提供。

1.2.2 方法 （1）標(biāo)本采集：采集研究對象陰道-直腸分泌物標(biāo)本。（2）增菌培養(yǎng)：采用無菌操作方法，將標(biāo)本放入選擇性肉湯培養(yǎng)基中增菌，在35 ℃的二氧化碳培養(yǎng)箱（濃度5%～10%）內(nèi)培養(yǎng)18 h;（3）分離培養(yǎng)及鑒定：接種血平板，繼續(xù)在35 ℃的二氧化碳培養(yǎng)箱（濃度5%～10%）內(nèi)培養(yǎng)18 h。血平板上可疑GBS菌落為灰白色，外表光滑凸起，具有透光性。對可疑菌落進(jìn)行生化鑒定，革蘭染色陽性、觸酶試驗陰性、CAMP試驗陽性，挑取單個菌落進(jìn)行上機(jī)鑒定，鑒定為無乳鏈球菌。質(zhì)控菌株選無乳鏈球菌和化膿鏈球菌分別做為陽性和陰性對照。（4）免疫層析法檢測：增菌18 h后，留取

1 mL增菌液檢測，操作方法嚴(yán)格按試劑盒要求進(jìn)行。

（5）PCR法檢測：增菌18 h后，留取1 mL增菌液離心后棄上清，加入DNA提取液，100 ℃裂解10 min，12 000 r/min離心5 min，取上清5 μL做為模板進(jìn)行PCR擴(kuò)增并按試劑盒要求作結(jié)果判定。

1.3 觀察指標(biāo)及判定標(biāo)準(zhǔn) 統(tǒng)計免疫層析法與PCR法的陽性率，并以增菌后細(xì)菌培養(yǎng)法為金標(biāo)準(zhǔn)，對各檢驗方法的靈敏度、特異度、準(zhǔn)確性及一致性進(jìn)行對比分析。靈敏度=真陽性/（真陽性+假陰性）×100%，特異度=真陰性/（真陰性+假陽性）×100%，準(zhǔn)確性=真陽性+真陰性/總數(shù)×100%。（1）比較免疫層析法與增菌細(xì)菌培養(yǎng)法的檢測結(jié)果。（2）比較PCR法與增菌細(xì)菌培養(yǎng)法的檢測結(jié)果。（3）比較免疫層析法與PCR法檢測效能比。（4）GBS感染的影響因素Logistic回歸分析，統(tǒng)計研究對象中細(xì)菌培養(yǎng)法檢測陽性的所有孕婦的年齡、體重指數(shù)、合并高血壓、合并糖尿病、甲狀腺功能、合并陰道炎、初產(chǎn)與經(jīng)產(chǎn)情況、流產(chǎn)史等資料，并作為自變量，將GBS感染作為因變量，并采用Logistic回歸分析這些因素與GBS感染的相關(guān)性。

1.4 統(tǒng)計學(xué)處理 采用SPSS 20.0軟件對所得數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計分析，計量資料用（x±s）表示，比較采用t檢驗;計數(shù)資料以率（%）表示，比較采用McNemar檢驗或字2檢驗;多因素采用Logistic回歸分析。以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 免疫層析法與增菌細(xì)菌培養(yǎng)法的檢測結(jié)果比

較 免疫層析法GBS檢測陽性率為11.8%（76/643），增菌細(xì)菌培養(yǎng)法檢測陽性率為9.5%（61/643），兩者比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P=0.067），免疫層析法檢測GBS的靈敏度63.9%，特異度93.6%，準(zhǔn)確性90.8%。見表1。

2.2 PCR法與增菌細(xì)菌培養(yǎng)法的檢測結(jié)果比

較 PCR法GBS檢測陽性率為11.4%（73/643），增菌細(xì)菌培養(yǎng)法檢測陽性率為9.5%（61/643），兩者比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P=0.096），PCR法檢測GBS的靈敏度73.8%，特異度95.2%，準(zhǔn)確性93.2%。見表2。

2.3 免疫層析法與PCR法檢測效能比的比較 免疫層析法與PCR法陽性檢出率、靈敏度、特異度、準(zhǔn)確性比較，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05），見表3。

2.4 陽性患者與陰性患者基本資料比較 單因素分析結(jié)果顯示，陽性患者與陰性患者的年齡>32歲、體重指數(shù)>24 kg/m2、妊娠合并糖尿病、妊娠期陰道炎、甲狀腺功能減退、經(jīng)產(chǎn)、流產(chǎn)史比較，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）;陽性患者與陰性患者妊娠合并高血壓比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。見表4。

2.5 GBS感染的Logistic回歸分析 Logistic回歸分析發(fā)現(xiàn)年齡>32歲、妊娠合并陰道炎、妊娠合并糖尿病、甲狀腺功能減退、經(jīng)產(chǎn)、流產(chǎn)史均為B族鏈球菌感染的獨(dú)立危險因素（P<0.05），見表5。

3 討論

GBS感染是臨床發(fā)生率較高的妊娠晚期疾病，嚴(yán)重危害妊娠結(jié)局及新生兒健康。妊娠期的臨床篩查是預(yù)防GBS感染的有效途徑[6-7]。美國CDC自1996年至今共發(fā)布了三版妊娠期GBS篩查指南，我國在2010年開始公布妊娠期GBS篩查指南。指南中直接接種細(xì)菌培養(yǎng)法被各大醫(yī)院廣泛應(yīng)用。主要是細(xì)菌培養(yǎng)法對實驗設(shè)備及場地要求不高，容易操作。但是已有文獻(xiàn)[8-9]表示，直接接種細(xì)菌培養(yǎng)法陽性檢出率不高，臨床容易出現(xiàn)漏診。近年來，國內(nèi)醫(yī)院開始使用選擇性肉湯培養(yǎng)基增菌后轉(zhuǎn)種細(xì)菌培養(yǎng)。雖然選擇性肉湯培養(yǎng)基轉(zhuǎn)種耗時長，但是較多研究表示增菌后細(xì)菌培養(yǎng)陽性檢出率更高[10-12]。另外有研究指出，臨床采用免疫層析法或PCR法，可獲得較好的陽性檢出率，且檢測便捷，可能更適合臨床GBS篩查[13-14]。本研究基于上述文獻(xiàn)，結(jié)合課題研究，對各種篩查方法進(jìn)行研究討論。另外，由于妊娠期婦女GBS的篩查并未納入國內(nèi)所有醫(yī)院的常規(guī)檢查項，而且也由于地域與種族等差異，GBS攜帶情況也不一樣[15-16]，因此對于本地區(qū)妊娠期婦女GBS的影響應(yīng)針對個體因素進(jìn)行統(tǒng)計與分析。因此，本研究更進(jìn)一步地對細(xì)菌培養(yǎng)法檢測陽性的個體資料進(jìn)行統(tǒng)計與分析，并采用Logistic回歸分析其與GBS感染的相關(guān)性，以期分析出本地區(qū)妊娠期婦女GBS感染的獨(dú)立危險因素，為臨床GBS檢測提供更多支撐依據(jù)。

相關(guān)文獻(xiàn)[17-18]報道，采用增菌后的標(biāo)本進(jìn)行檢測，能夠獲得更高的陽性檢出率。主要是因為直接培養(yǎng)法中菌種豐富，影響GBS的生長，加大了檢測難度。而選擇性肉湯培養(yǎng)基中包含有萘啶酸、黏菌素等抗菌藥，能夠有效抑制受檢者陰道樣本中非目標(biāo)菌種（多數(shù)為革蘭陰性菌）的生長，雖然對GBS也會產(chǎn)生輕度抑制作用，但選擇性肉湯培養(yǎng)基中的鏈球菌生長營養(yǎng)成分可同時有助GBS的生長，更利于檢出。因此，為了獲得更加準(zhǔn)確的檢測結(jié)果，本研究免疫層析法、PCR法以及細(xì)菌培養(yǎng)法均采用增菌后標(biāo)本。另外，筆者認(rèn)為有條件的醫(yī)院可以將選擇性肉湯培養(yǎng)基增菌作為GBS檢測的常規(guī)步驟，臨床檢驗中能快速、便捷植入樣本，保證檢測時效性與準(zhǔn)確性。對增菌后的樣本使用免疫層析法與PCR法進(jìn)行檢測，結(jié)果顯示免疫層析法GBS檢測陽性率為11.8%，增菌細(xì)菌培養(yǎng)法檢測陽性率為9.5%，兩者比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。PCR法GBS檢測陽性率為11.4%，增菌細(xì)菌培養(yǎng)法檢測陽性率為9.5%，兩者比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。另外，以增菌后細(xì)菌培養(yǎng)法檢測為金標(biāo)準(zhǔn)，對免疫層析法與PCR法進(jìn)行分析，結(jié)果顯示免疫層析法的檢測靈敏度（63.9%）低于PCR法檢測靈敏度（73.8%），但兩者比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。需增加樣本量進(jìn)一步研究其顯著性。免疫層析法與PCR法在增菌后的檢測特異度及準(zhǔn)確性均較高，因為免疫層析法與PCR法可以忽略細(xì)菌培養(yǎng)法中GBS生長的情況，而且能夠檢出非β型溶血性GBS及CAMP陰性的GBS。免疫層析法檢測簡單快捷，僅需試劑盒及一些簡單的試驗設(shè)備，結(jié)果判讀簡單易操作，對工作人員專業(yè)水平要求不高，且檢測時間短，30 min左右即可完成。但是相應(yīng)的其檢測靈敏度相對較低，適用于基層醫(yī)院臨床初步篩查，防止漏檢。而PCR法操作相對復(fù)雜，配合全自動熒光定量PCR儀，檢驗2～3 h即可完成批量檢測，結(jié)果判讀也簡單易行，但是基層地區(qū)可能不具備臨床基因擴(kuò)增實驗室的條件，因此PCR法可作為有條件地區(qū)臨床準(zhǔn)確檢測GBS的檢測方式。

另外，為了進(jìn)一步為妊娠期婦女GBS感染檢測提供更多臨床依據(jù)，本研究對細(xì)菌培養(yǎng)法檢測陽性的婦女進(jìn)行個體相關(guān)因素回歸性分析。從結(jié)果2.4可知，單因素結(jié)果顯示陽性患者與陰性患者在年齡>32歲、體重指數(shù)>24 kg/m2、妊娠期陰道炎、妊娠合并糖尿病、甲狀腺功能減退、經(jīng)產(chǎn)、流產(chǎn)史比較，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）;陽性患者與陰性患者妊娠合并高血壓比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。多因素Logistic回歸分析結(jié)果顯示年齡>32歲、妊娠合并陰道炎、合并糖尿病、甲狀腺功能減退、經(jīng)產(chǎn)、有流產(chǎn)史的妊娠期婦女是感染GBS的獨(dú)立危險因素。研究結(jié)果與國內(nèi)其他地區(qū)有部分相同，但是也存在部分差異。吳麗娜等[19]研究指出年齡并非GBS感染的獨(dú)立危險因素，不過在其研究中分析的年齡界限為30歲。龔明霞等[20]則分析出年齡35歲以上是感染GBS的獨(dú)立危險因素。在本研究中，入組對象平均年齡在32歲左右，因此將年齡32歲作為分析界限。不過目前引起GBS感染的機(jī)制尚不明確，這些獨(dú)立危險因素僅作為本院研究結(jié)果，可供本地區(qū)其他醫(yī)院以及外地區(qū)醫(yī)院作臨床參考。

綜上所述，免疫層析法檢測方便快捷，可作為基層醫(yī)院妊娠晚期GBS初步篩查方式。PCR法具有可批量操作的優(yōu)點，適應(yīng)性也廣。臨床可根據(jù)受檢者具體情況選擇合理的檢測方式，防止漏檢誤檢。另外，對于本地區(qū)GBS檢測為非常規(guī)檢查項的醫(yī)院，應(yīng)注意對高齡、妊娠合并陰道炎、合并糖尿病、甲狀腺功能減退、經(jīng)產(chǎn)、有流產(chǎn)史的妊娠期婦女進(jìn)行GBS篩查。

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（收稿日期：2020-02-06） （本文編輯：姬思雨）