余鋒 賈芳芳 徐波 張憲亮

摘 要：目的：探析β-淀粉樣蛋白（β-amyloid， Aβ）降解酶在自主運動調節(jié)APP/PS1轉基因（Tg-APP/PS1）小鼠海馬Aβ沉積過程中的作用機制。方法：C57系Tg-APP/PS1小鼠和C57系野生小鼠各34只分別隨機分為Tg-APP/PS1自主運動組（TE， n=17），Tg-APP/PS1安靜對照組（TC， n=17），野生自主運動組（E， n=17）和野生安靜對照組（C， n=17）。TE組和E組小鼠從3月齡開始，除給予日常飲食和飲水，施以16周自主運動，TC組和C組小鼠僅給予正常飲食、飲水。實時定量RT-PCR實驗檢測海馬Aβ降解酶腦啡肽酶（neprilysin， NEP）、胰島素降解酶（insulin degrading enzyme， IDE）、血管緊張素轉化酶（angiotensin-converting enzyme， ACE）、內皮素轉化酶（endothelin-converting enzyme， ECE）、基質金屬蛋白酶-9（matrix metalloproteinase 9， MMP-9）和纖溶酶（Plasmin， PL）的mRNA表達水平，Western blot實驗檢測NEP、IDE、ACE和MMP-9的蛋白表達，免疫組化實驗檢測Aβ斑塊沉積情況。結果：1）16周自主運動促進了Tg-APP/PS1小鼠海馬NEP和IDE mRNA表達的極顯著性上調（P<0.01），促進了ACE、MMP-9和PL mRNA表達的顯著性上調（P<0.05）;2） 16周自主運動促進了Tg-APP/PS1小鼠海馬IDE蛋白表達極顯著性上調（P<0.01），促進了NEP、ACE和MMP-9的蛋白表達顯著性上調（P<0.05）;3） 16周自主運動顯著性下調了Tg-APP/PS1小鼠海馬Aβ沉積（P<0.01）。結論：自主運動可通過上調海馬內Aβ降解酶的基因和蛋白表達進而抑制Tg-APP/PS1小鼠海馬內的Aβ沉積。

關鍵詞：自主運動;阿爾茨海默病;APP/PS1轉基因小鼠;Aβ沉積;Aβ降解酶

中圖分類號：G804.2 文獻標識碼：A 文章編號：1006-2076（2020）06-0072-09

Abstract：Objective： To observe the effects and mechanism of Aβ degradation enzyme on the hippocampal Aβ deposition in transgenic mice of Alzheimers disease （AD） after 16 weeks voluntary wheel running. Methods： 34 Male Tg-APP/PS1 mice and 34 wild type mice of three-month-old C57BL/6 strain were randomly divided into Tg-APP/PS1 voluntary wheel running group （TE， n=17）， Tg-APP/PS1 quiet control group （TC， n=17）， wild type voluntary wheel running group （E， n=17） and wild type quiet control group （C， n=17）. Mice in group TE and group E were subjected to wheel running with ad libitum access to food and water for 16 weeks from 3 months of age. Mice in group TC and group C were subjected to food and water ad libitum， without exercise. Real-time RT-PCR test was used to detect mRNA level of Aβ degradation enzyme， including NEP， IDE， ACE， ECE， MMP-9 and PL. Western blot test was used to detect protein level of NEP， IDE， ACE and MMP-9. Immunohistochemistry test was used to determine hippocampal Aβ deposition. Results： 1） After 16 weeks voluntary wheel running， the mRNA expression of NEP and IDE were very significant up-regulated （P<0.01）， and the mRNA expression of ACE， MMP-9 and PL were significant up-regulated （P<0.05） in the hippocampus of Tg-APP/PS1 mice. 2） After 16 weeks voluntary wheel running， the protein expression of IDE was very significant up-regulated （P<0.01）， and the protein expression of NEP， ACE， MMP-9 were significant up-regulated （P<0.05） in the hippocampus of Tg-APP/PS1 mice. 3） After 16 weeks voluntary wheel running， the Aβ deposition in the hippocampus of Tg-APP/PS1 mice was very significant down-regulated （P<0.01）. Conclusion： Voluntary wheel running decreased the deposition of Aβ by promoting the expression of Aβ degradation enzyme in the hippocampus of Tg-APP/PS1 mice.

Key words：voluntary wheel running; Alzheimers disease; Tg-APP/PS1 mice; Aβ deposition; Aβ degradation enzyme

認知和學習記憶是腦的重要高級功能，決定著人類認識自然和改造社會的深刻程度。腦的認知和學習記憶能力的增齡性減弱，是導致神經退行性疾病的重要歸因。阿爾茨海默?。ˋlzheimers disease， AD）是一種腦的認知下降和學習記憶損害相關的神經退行性疾病，被稱為世界第一大神經退行性疾病。AD主要的病理標志是腦內β-淀粉樣蛋白（β-amyloid， Aβ）沉積產生老年斑（senile plaque， SP），tau蛋白過度磷酸化形成神經纖維纏結及由Aβ沉積和tau蛋白過度磷酸化所導致的神經細胞的缺失等[1]。其中，Aβ沉積是AD發(fā)病的主要病因之一。Aβ具有很強的神經毒性，能誘導腦組織的免疫炎癥反應、神經細胞的異常凋亡、氧化應激損傷、誘導鈣離子穩(wěn)態(tài)以及導致線粒體的能量供應系統(tǒng)功能紊亂，致使神經細胞異常死亡和神經系統(tǒng)的退行性病變[2]。

正常腦內Aβ的產生和降解呈動態(tài)平衡，故不會沉積。AD腦內Aβ的產生和清除之間的平衡被打亂，Aβ不能被及時清除，而在神經細胞外聚積，導致其沉積，進而引發(fā)一系列神經毒性和病理學改變，阻礙神經細胞正常生理功能的發(fā)揮。正常情況下腦內生成的Aβ主要是通過三種方式清除（如圖1）：即經神經細胞內Aβ降解酶的降解清除、血腦屏障中Aβ轉運蛋白的轉運出腦清除和小膠質細胞對其進行吞噬降解清除[2]，三種清除方式中Aβ降解酶占主導作用。研究發(fā)現，腦內的Aβ降解酶包括腦啡肽酶（neprilysin， NEP）、胰島素降解酶（insulin degrading enzyme， IDE）、血管緊張素轉化酶（angiotensin-converting enzyme， ACE）、內皮素轉化酶（endothelin-converting enzyme， ECE）、基質金屬蛋白酶-9（matrix metalloproteinase 9， MMP-9）和纖溶酶（Plasmin， PL）等主要幾種。

隨著對AD風險防控意識的增強及其病癥臨床實踐和實驗研究的逐步深入，人們對AD病理干預手段的認識也在改變，開始由對病癥治療向積極預防轉變。體育科學研究發(fā)現，經常參與體育運動或體力活動可提高老年人的認知功能[4-6]，降低AD的患病風險[7-9]。動物實驗亦發(fā)現，運動干預可預防和改善AD病理，其機制涉及運動誘導Aβ沉積的減少[4， 10-16]，抑制tau蛋白的過度磷酸化[17-19]，促進神經細胞的抗氧化[18， 20-21]、緩解神經細胞死亡[22-24]和神經炎癥[13， 25]等生物學機制。其中，運動調節(jié)Aβ沉積的研究居多，運動可通過調節(jié)Aβ生成相關分泌酶的表達或活性來抑制Aβ的生成[10， 14， 26-27]，通過抑制APP的表達水平來抑制Aβ的產生[12， 28-29]等。但目前并未發(fā)現運動作為獨立影響因素的研究證明其可通過調節(jié)Aβ降解酶進而降低Aβ沉積，僅有的Maesako等[30]結合飲食控制和運動干預的研究及Lazarov等[31]通過內設跑輪運動裝置豐富環(huán)境干預的研究表明：運動結合其他干預方式可促進NEP與IDE的表達減少腦內Aβ沉積。關于運動干預通過介導ACE、ECE、MMP-9和PL等幾種降解酶而調節(jié)Aβ沉積，預防和緩解AD的研究，以及運動干預作為獨立因素調控Aβ降解酶介導AD病理的研究均未見報道，相關機制更缺乏深入研究。本研究擬探討16周自主運動能否通過上調Aβ降解酶的表達，進而下調Tg-APP/PS1小鼠海馬Aβ沉積，解釋自主運動調節(jié)腦Aβ沉積的可能機制。

1 材料與方法

1.1 實驗對象與材料

從南京生物醫(yī)藥研究院實驗動物模式研究所選購3月齡C57系APP/PS1轉基因雄性小鼠34只（體重19.56±1.48 g）與3月齡野生型C57系小鼠34只（體重20.24±1.02 g），單獨飼養(yǎng)。小鼠飼料、墊料購自上海斯萊康公司，自由飲水和飲食，墊料定期更換。飼養(yǎng)環(huán)境為清潔級。

1.2 實驗對象分組與干預方案

將APP/PS1轉基因小鼠隨機分為運動組（TE）和對照組（TC），將野生C57小鼠亦隨機分為運動組（E）和對照組（C）。其中，TE組和E組小鼠除給予正常飲食和飲水之外，為其提供自主跑輪裝置，使其進行16周的自主運動（如圖2、圖3）。

1.3 實時熒光定量實驗（RT-PCR）

運動干預實驗結束24小時后，每組隨機選取12只實驗小鼠麻醉、斷頸處死，取海馬組織迅速置于液氮保存，后轉移至-80℃冰箱冷凍待測。

所有實驗小鼠海馬組織取完后，每組取6只小鼠海馬組織于冰上進行實驗操作，按照Invitrogen Trizol法提取總RNA，采用Toyobo Fsq101反轉錄試劑盒和實時熒光定量PCR儀檢測相關基因相對含量[14]。各目的基因和內參基因的引物序列如下表（引物設計與合成均由上海生工生物公司完成）。

1.4 免疫印跡實驗（Western blot）

每組取剩余的6只小鼠海馬組織于冰上進行實驗操作，剪碎放入研磨管中，按照Beyotime P0013 Western及RAP裂解液說明書進行操作。采用8%分離膠電泳，通過Millipore ECL超敏試劑盒顯影和Alpha FC2型凝膠成像系統(tǒng)進行冷光掃膜。所有抗體購于CST公司，采用Flour Chem FC2軟件分析圖像灰度值，冷光掃膜。實驗所用抗體購于CST和Abcam公司，使用Flour Chem FC2軟件對所捕捉圖像進行灰度值分析，具體實驗步驟參照文獻[18]進行。

1.5 免疫組化實驗（Immunohistochemistry）

運動干預實驗結束24小時后，每組余下5只小鼠按0.1ml/20 g體重的劑量經腹腔注射1.5%的戊巴比妥納麻醉，剪開腹腔至胸腔，暴露出心臟，從心臟左心室尖處灌注0.9%的生理鹽水（4℃）沖洗血液，至大鼠肝臟發(fā)白、流出液基本無血后，換成4%的多聚甲醛溶液（4℃）繼續(xù)灌注，至頭、四肢均已僵硬后迅速斷頭取腦，于-80℃冰箱保存。采用OCT包埋劑進行冰凍包埋，于冰凍切片機切片，厚度為20 μm。先后通過小鼠Aβ抗兔單克隆抗體（I抗，1∶200）和兔抗小鼠IgG抗體（II抗，1∶400）孵育切片。每只小鼠取6張切片，各隨機取相應海馬區(qū)的2個視野進行分析。采用二氨基聯苯胺（DAB）顯色液染色，于顯微鏡下觀察。Aβ沉積陽性免疫反應產物呈棕黃色或棕褐色，集中分布于胞漿及核膜周圍，呈斑塊狀，計算其在所選視野中的面積百分比，百分比值高，Aβ蛋白表達多，反之則少。實驗所用抗體購自CST和Abcam公司，具體實驗步驟參照文獻[10]進行。

1.6 數據統(tǒng)計

采用SPSS 18.0數據統(tǒng)計軟件、Image J圖像處理軟件、GraphPad繪圖分析軟件以及Excel 2010辦公軟件分析實驗數據。所有實驗數據均以（平均值±標準差）表示，組間比較采用采用單因素分析法（One-Way ANOVA），事后檢驗采用LSD 法。記P<0.05為具有顯著性差異，記P<0.01 為具有極顯著性差異。

2 結果分析

2.1 各組小鼠海馬Aβ降解酶 mRNA表達的比較

與C組相比，TC組小鼠海馬NEP、IDE和ECE mRNA表達均極顯著性降低（P<0.01），ACE、MMP-9和PL mRNA表達均顯著性降低（P<0.05）。與TC組相比，TE組小鼠海馬NEP和IDE mRNA表達均極顯著性上調（P<0.01），ACE、MMP-9和PL mRNA表達均顯著性上調（P<0.05），ECE mRNA表達呈上調趨勢，但兩組間無顯著性差異。與E組相比，TE組小鼠海馬NEP、IDE、ACE和PL mRNA表達均顯著性降低（P<0.05），ECE mRNA表達極顯著性降低（P<0.01），TE組小鼠海馬MMP-9 mRNA表達呈下調趨勢，但兩組之間不具有顯著性差異。與C組相比，E組小鼠海馬NEP mRNA表達極顯著性上調（P<0.01），ECE mRNA表達顯著性上調（P<0.05），而IDE、ACE 、MMP-9和PL mRNA表達呈上調趨勢，但兩組間不具有顯著性差異（如表2、圖4）。

2.2各組小鼠海馬Aβ降解酶蛋白表達的比較

與C組相比，TC組小鼠海馬NEP、IDE和ACE蛋白表達顯著性降低（P<0.05），MMP-9蛋白表達極顯著性降低（P<0.01）。與TC組相比，TE組小鼠海馬NEP、ACE和MMP-9蛋白表達均顯著性上調（P<0.05），IDE蛋白表達極顯著性上調（P<0.01）。與E組相比，TE組小鼠海馬NEP和ACE蛋白表達均呈下降趨勢，但兩組間無顯著性差異，TE組小鼠海馬IDE和MMP-9蛋白表達均顯著性降低（P<0.05）。與C組相比，E組小鼠海馬NEP、ACE和 MMP-9蛋白表達均有上調趨勢，但兩組間無顯著性差異，而E組小鼠海馬IDE蛋白表達顯著性上調（P<0.05）（如表3、圖5）。

2.3 各組小鼠海馬Aβ沉積的比較

與C組相比，TC組小鼠海馬Aβ沉積的面積百分比極顯著性上調（P<0.01）;與TC組相比，TE組小鼠海馬Aβ沉積的面積百分比極顯著性降低（P<0.01）;與E組相比，TE組小鼠海馬Aβ沉積的面積百分比顯著性上調（P<0.05）;與C組相比，E組小鼠海馬Aβ沉積的數量顯著性降低 （P<0.05）（如表4、圖6）。

3 討論

本研究所選用的APP/PS1 雙轉基因小鼠是通過表達人類突變型基因PS1（DeltaE9）和小鼠與人類APP（APPSwe）基因嵌合體的雙轉基因小鼠，自南京大學——南京生物醫(yī)藥研究院的模式動物研究所引進，該小鼠相關的基因型為Tg（APPswe，PSEN1dE9）85Dbo，其種源來自美國的Jackson實驗動物中心。研究發(fā)現，APP/PS1轉基因小鼠在4月齡時腦內便可發(fā)現老年斑的出現，在6月齡時則可在大腦皮層及海馬區(qū)發(fā)現Aβ的沉積，Aβ沉積與AD實驗動物的年齡密切相關[32]。與同品系野生型小鼠相比，在10～12月齡時可出現行為學的空間記憶能力缺陷[33]，因此，APP/PS1轉基因AD小鼠模型是研究腦的功能紊亂性疾病，特別是AD相關疾病最為理想的實驗動物模型。在AD實驗動物生長的適當年齡進行干預是控制Aβ沉積的重要靶點。研究[34]發(fā)現，Tg-APP/PS1小鼠在6-7月齡腦內開始出現Aβ沉積。Liu等[12]從3月齡開始對Tg-APP/PS1小鼠的進行跑臺干預實驗，發(fā)現5個月的跑臺運動抑制了轉基因小鼠海馬Aβ沉積和tau蛋白過磷酸化，表明從3月齡起對Tg-APP/PS1小鼠進行運動干預可以達到調控AD病理的作用。本研究從3月齡對Tg-APP/PS1小鼠施加運動干預，7月齡提取腦組織，符合運動干預Aβ沉積的生理條件。

3.1 自主運動對Tg-APP/PS1小鼠海馬Aβ降解酶的影響

3.1.1 自主運動對Tg-APP/PS1小鼠海馬NEP和IDE表達的調控

NEP和IDE是研究最多也是最重要的兩種Aβ降解酶，受到大量關注。研究[35-36]發(fā)現，腦內NEP水平和Aβ表達及神經細胞外淀粉樣斑塊沉積的程度之間關系密切。對NEP基因敲除小鼠和其他Aβ降解酶基因敲除小鼠比較發(fā)現，NEP基因敲除小鼠腦內Aβ40和Aβ42的水平均顯著增加[37-38]。本研究發(fā)現，Tg-APP/PS1小鼠海馬NEP mRNA表達低于野生小鼠，但兩者之間差異不顯著，Tg-APP/PS1小鼠海馬NEP蛋白表達則顯著低于野生小鼠，說明Tg-APP/PS1小鼠NEP基因轉錄水平與正常小鼠無差異，但其蛋白表達低于野生小鼠。16周自主運動上調了Tg-APP/PS1小鼠海馬NEP mRNA和蛋白水平，說明自主運動可有效促進Tg-APP/PS1小鼠海馬NEP的基因轉錄和蛋白表達。研究[39]發(fā)現，AD轉基因小鼠腦內IDE mRNA和蛋白表達受Aβ40和Aβ42表達的調控，二者呈正相關性變化。而Tg2576小鼠腦內IDE的表達在Aβ斑塊周圍顯著升高，且腦內IDE的蛋白表達隨小鼠年齡的增大呈上升的趨勢[40]。本研究發(fā)現，Tg-APP/PS1小鼠海馬IDE mRNA和蛋白表達均顯著低于野生小鼠，說明Tg-APP/PS1小鼠在IDE的基因轉錄和翻譯水平上均存在缺陷性;而16周自主運動后，Tg-APP/PS1小鼠海馬IDE mRNA和蛋白表達均顯著增加，說明自主運動可有效抵抗Tg-APP/PS1小鼠海馬IDE表達的下降;運動對野生小鼠海馬IDE mRNA表達調節(jié)作用不顯著，但運動上調了野生小鼠海馬IDE蛋白表達，說明自主運動可上調野生小鼠海馬IDE的蛋白翻譯，促進腦內合成較多的IDE，有助于腦內Aβ產生和清除動態(tài)平衡的維持。

先前對運動干預AD實驗動物腦內NEP和IDE影響的研究并不多見，僅有兩篇研究報道了自主運動或內設自主跑輪裝置的豐富環(huán)境干預對這兩種Aβ降解酶的調節(jié)作用，所得結論尚不具代表性，此亦本實驗選擇研究運動對轉基因小鼠海馬Aβ降解酶進行干預的主要原因。如Maesako等[30]給予APP轉基因小鼠高脂飲食，同時采用20周的自主運動干預，發(fā)現自主運動促進了該小鼠腦內的NEP的活性增加進而抑制了Aβ沉積。Lazarov等[31]發(fā)現，5個月自主運動促進了Tg-APP/PS1小鼠海馬NEP和IDE的蛋白表達，抑制了Aβ沉積。Adlard等[10]發(fā)現1個月的自主運動降低了TgCRND8小鼠APP 蛋白片段（α-CTF和β-CTF），但未改變海馬和皮質內的Aβ40和Aβ42表達，NEP與IDE的mRNA和蛋白表達亦未見顯著變化，其原因可能與1個月的運動時間較短有關，這也是本研究采用16周中長期運動干預的直接原因，較長時程的運動可能起到重復刺激的效果，能夠強化腦對運動干預的適應性變化。

3.1.2 自主運動對Tg-APP/PS1小鼠海馬ACE和MMP-9表達的調控

本實驗發(fā)現，Tg-APP/PS1小鼠海馬ACE mRNA和蛋白表達均顯著低于野生對照組小鼠;Tg-APP/PS1小鼠海馬MMP-9 mRNA表達較野生小鼠下調，但不具有顯著性差異，Tg-APP/PS1小鼠海馬MMP-9蛋白表達顯著低于野生小鼠;16周自主運動顯著上調了轉基因小鼠海馬ACE和MMP-9的 mRNA和蛋白表達。提示，Tg-APP/PS1小鼠海馬內ACE和MMP-9的表達被抑制，而16周自主運動可促進ACE 和MMP-9的表達。ACE和MMP-9也是重要的Aβ降解酶，可協(xié)同NEP和IDE對Aβ的降解，促進對Aβ的清除。ACE水平和Aβ沉積誘導AD發(fā)病之間顯著相關，研究[41]發(fā)現，ACE可通過降解Aβ多肽內天冬氨酸第7位點到絲氨酸第8位點的Aβ蛋白。腦內ACE的增多可促進對Aβ的降解，而ACE抑制劑可阻斷其對體外培養(yǎng)的Aβ降解[42]。MMP-9可在離體或在體條件下降解Aβ沉積[43]。外源性MMP-9可直接作用于α-分泌酶的APP降解位點，降低體外的Aβ多肽，而且外源性MMP-9可在離體或在體條件下降解聚積的Aβ纖維[44]。過表達MMP-9基因的轉基因小鼠海馬和皮質內APP的降解產物sAPPα水平顯著升高，突觸分枝的密度顯著增加[45]，表明MMP-9的表達上調，可促進對Aβ的降解清除。

3.1.3 自主運動對Tg-APP/PS1小鼠海馬ECE和PL表達的調控

本實驗發(fā)現，與野生小鼠相比，Tg-APP/PS1小鼠海馬ECE mRNA表達顯著降低，而16周自主運動未能上調轉基因小鼠海馬ECE mRNA表達，但運動干預上調了野生小鼠海馬ECE mRNA表達。實驗還發(fā)現，轉基因小鼠海馬PL mRNA表達與野生小鼠相比亦顯著下調，16周自主運動上調了轉基因小鼠海馬PL mRNA表達，但對野生小鼠海馬PL mRNA表達的調節(jié)并不顯著。本實驗表明，Tg-APP/PS1小鼠海馬內ECE和PL基因表達均受到轉基因造模的影響而被抑制，16周自主運動未能有效上調轉基因小鼠海馬內ECE基因表達，但上調了PL基因表達。ECE和PL也參與了腦內Aβ的降解過程，對調節(jié)腦內Aβ水平具有積極作用。體外試驗發(fā)現重組的ECE可在3個位點降解合成的Aβ40，產生Aβ1-16、Aβ1-17、Aβ1-19以及Aβ20-40等Aβ片段[46]。ECE基因缺陷小鼠腦內Aβ40和Aβ42 表達均顯著上調[47]。PL在AD發(fā)病過程中其含量及其活性亦處于較低水平，在離體條件下抑制PL可增強Aβ聚積所導致的神經細胞損傷[48]，而腦內PL增多可促進Aβ的降解[49]。

目前運動科學領域尚未發(fā)現通過運動干預介導AD實驗動物腦內ACE、MMP9、ECE和PL等的文獻可供參考，因此，本研究探討自主運動對Tg-APP/PS1小鼠海馬中ACE、MMP9、ECE和PL等Aβ降解酶的影響，是一種探索性研究，有望為今后該領域的研究提供參考。

3.2 自主運動對Tg-APP/PS1小鼠海馬Aβ沉積的影響

免疫組化實驗發(fā)現，與野生小鼠相比，Tg-APP/PS1小鼠海馬Aβ沉積較為密集，所占面積百分比顯著大于野生小鼠。與其對照組比較，Tg-APP/PS1運動組小鼠海馬Aβ沉積顯著減少，提示16周主運動能夠有效抑制Tg-APP/PS1小鼠海馬Aβ的沉積。與野生運動組小鼠相比，Tg-APP/PS1運動組小鼠海馬Aβ沉積和Aβ沉積數量上均顯著性增多，表明16周自主運動雖然能夠顯著抑制Tg-APP/PS1小鼠海馬Aβ沉積，但由于轉基因小鼠腦內APP與PS1基因[26]的過表達導致海馬Aβ沉積顯著增多，可能在一定程度上抵消了運動干預的獲益，導致運動組轉基因小鼠海馬Aβ沉積僅下調到野生對照組小鼠的水平。大量研究表明，Aβ沉積可誘導腦神經元的退行性病理改變，損害腦的認知和學習記憶能力。Adlard等[10]發(fā)現，5個月自主運動降低了TgCRND8小鼠海馬的Aβ沉積。Cracchiolo等[50]發(fā)現，7個半月自主運動和相同時間內設跑輪的豐富環(huán)境干預降低了Tg-APP/PS1小鼠海馬Aβ沉積。Yuede等[51]發(fā)現，自主運動和跑臺運動均促進了Tg2576轉基因小鼠海馬Aβ沉積。Liu等[12]發(fā)現，5個月跑臺運動降低了Tg-APP/PS1小鼠海馬Aβ沉積和Aβ40與Aβ42的蛋白表達。Llort等[20]發(fā)現5周跑臺運動降低了3xTg-AD小鼠海馬Aβ42/Aβ40的比值，但運動干預后該小鼠海馬區(qū)的Aβ斑塊沉積與對照組小鼠相比無顯著變化。Ke等[11]發(fā)現，4周短期跑臺運動下調了Tg-APP/PS1小鼠海馬Aβ的表達，但免疫組化實驗發(fā)現運動對海馬Aβ沉積的調節(jié)作用不顯著。綜上研究表明，運動干預可降低實驗動物腦內的Aβ沉積，且長期運動干預效果更佳。16周自主運動下調了Tg-APP/PS1小鼠海馬Aβ的沉積與上文所述運動促進了Aβ降解酶的表達具有直接聯系，說明自主運動可通過上調Aβ降解酶的表達，促進其對Aβ的降解，進而下調轉基因小鼠腦內的Aβ沉積。

4 結論

本研究表明Tg-APP/PS1小鼠海馬內主要的Aβ降解酶的mRNA和蛋白表達較同月齡野生型小鼠顯著性降低，其海馬Aβ沉積顯著性增加;而16周的自主運動顯著性上調了Tg-APP/PS1小鼠海馬內Aβ降解酶的mRNA和蛋白表達，下調了海馬Aβ沉積。提示：自主運動可能通過促進腦內Aβ降解酶的表達，進而抑制Aβ沉積，改善AD病理。

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