布天杰 潘雨煙 張寧

摘要 目的：通過(guò)網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)方法探討經(jīng)方真武湯治療糖尿病腎病（DKD）的核心作用靶標(biāo)基因以及潛在通路機(jī)制，旨在指導(dǎo)臨床用藥同時(shí)為更深入的實(shí)驗(yàn)研究提供依據(jù)。方法：通過(guò)TCMSP數(shù)據(jù)庫(kù)檢索真武湯所含藥物的有效成分、潛在作用靶點(diǎn)，在Genecards、OMIM、DisGeNET數(shù)據(jù)庫(kù)篩選與糖尿病腎病有關(guān)的疾病靶點(diǎn)，借助Cytoscape3.7.2繪制并構(gòu)建“藥物-成分-靶點(diǎn)-疾病”可視化交互網(wǎng)絡(luò)。利用STRING平臺(tái)繪制關(guān)鍵靶點(diǎn)PPI網(wǎng)絡(luò)，在David數(shù)據(jù)庫(kù)里針對(duì)關(guān)鍵靶點(diǎn)蛋白開(kāi)展GO基因功能、KEGG信號(hào)通路富集分析。結(jié)果：檢索查篩出真武湯中有效活性成分59個(gè)、潛在靶點(diǎn)108個(gè)，其中涉及DKD的關(guān)鍵靶點(diǎn)47個(gè)，從蛋白互作網(wǎng)絡(luò)中分析發(fā)現(xiàn)TNF、ATK1、JUN、RELA、IL6、MAPK8、CASP8、NOS2可能是真武湯治療糖尿病腎病的核心靶點(diǎn)。GO富集分析得到180個(gè)條目，主要涉及細(xì)胞增殖、代謝、凋亡及脂肪細(xì)胞因子、葡萄糖穩(wěn)態(tài)等。KEGG信號(hào)通路富集分析得到94條信號(hào)通路，主要涉及TNF信號(hào)通路、Toll樣受體信號(hào)通路、HIF-1信號(hào)通路、FoxO信號(hào)通路等。結(jié)論：本研究初步驗(yàn)證真武湯治療糖尿病腎病的作用機(jī)制涉及多成分、多靶點(diǎn)、多信號(hào)通路，給予真武湯的臨床應(yīng)用及更深層次對(duì)糖尿病腎病的研究以一定理論依據(jù)。

關(guān)鍵詞 真武湯;糖尿病腎病;網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué);作用機(jī)制

Network Pharmacology Study on Mechanism of Zhenwu Decoction in the Treatment of Diabetic Kidney Disease

BU Tianjie1，2， PAN Yuyan2， ZHANG Ning1

（1 Department of Nephrology and Endocrinology， Wangjing Hospital of China Academy of Chinese Medical Sciences， Beijing 100102， China; 2 Beijing University of Chinese Medicine， Beijing 100029， China）

Abstract Objective：Through network pharmacology methods， the core target genes and potential pathway mechanisms of Jingfang Zhenwu Decoction in the treatment of diabetic nephropathy （DKD） are explored， aiming to guide clinical medication and provide basis for more in-depth experimental research. Methods：The active ingredients and potential targets of the drugs contained in Zhenwu Decoction were searched through the TCMSP database， and disease targets related to diabetic nephropathy were screened in the Genecards， OMIM， and DisGeNET databases. With the help of Cytoscape 3.7.2， the visualized interactive network of "drug-component-target-" was drawn and constructed. The STRING platform was used to draw the key target of PPI network， and carry out the GO gene function and KEGG signal pathway enrichment analysis for the key target protein in the David database. Results：A total of 59 effective active components combined with 108 potential targets were searched from Zhenwu Decoction， of which 47 key targets involved in DKD. TNF， ATK1， JUN， RELA， IL6， MAPK8， CASP8 and NOS2 may be the core targets of Zhenwu Decoction in the treatment of diabetic kidney disease. GO enrichment analysis yielded 180 entries， mainly involving cell proliferation， metabolism， apoptosis and adipocytokines， and glucose homeostasis. KEGG signaling pathway enrichment analysis resulted in 94 signaling pathways， mainly involving TNF signaling pathway， HIF-1 signaling pathway，Toll-like receptor signaling pathway and FoxO signaling pathway. Conclusion：The mechanism of Zhenwu Decoction in the treatment diabetic kidney disease involves multiple components， targets and pathways， aiming to give Zhenwu Decoction clinical application and deeper research on diabetic nephropathy with a certain theoretical basis.

Keywords Zhenwu Decoction; Diabetic kidney disease; Network pharmacology; Mechanism of action

中圖分類號(hào)：R285文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：Adoi：10.3969/j.issn.1673-7202.2020.24.001

糖尿病腎病（Diabetic Kidney Disease，DKD）是糖尿?。―iabetes Mellitus，DM）患者的常見(jiàn)并發(fā)癥之一，在我國(guó)發(fā)病率呈逐年上升趨勢(shì)。目前已超過(guò)了腎小球腎炎，成為慢性腎臟病（Chronic Kidney Disease，CKD）的首要病因[1]。糖尿病腎病以高血糖為特點(diǎn)，在糖脂代謝紊亂、炎性反應(yīng)刺激及氧化應(yīng)激等因素影響下，導(dǎo)致腎代謝功能降低[2]。臨床上治療糖尿病腎病的主要原則有維持血糖水平穩(wěn)定、改善腎功能、糾正酸堿平衡及代謝紊亂。而現(xiàn)如今中醫(yī)藥的介入使得患者在進(jìn)行基礎(chǔ)西藥治療的同時(shí)對(duì)本病擁有進(jìn)一步獲取更好療效的機(jī)會(huì)。

中醫(yī)學(xué)并無(wú)糖尿病腎病的病名及相關(guān)記載，而根據(jù)其病因病機(jī)進(jìn)行認(rèn)識(shí)歸納，目前較為認(rèn)可的是“腎消”或“消渴腎病”[3]。中醫(yī)認(rèn)為，DKD亦屬消渴病范疇，系消渴氣陰兩虛日久，病變及腎，陰損及陽(yáng)而導(dǎo)致的以“脾腎陽(yáng)虛，濕毒內(nèi)蘊(yùn)”為基本病機(jī)的病證。真武湯出自古籍《傷寒論》，乃東漢醫(yī)家張仲景治療少陰陽(yáng)氣虛衰，氣不化水，水濕泛濫而創(chuàng)立的經(jīng)方。后世醫(yī)者在掌握其“溫補(bǔ)腎陽(yáng)”的理論基礎(chǔ)上將真武湯廣泛應(yīng)用于臨床實(shí)踐，在治療糖尿病腎病中亦取得了良好的療效[4-5]。

鑒于中藥復(fù)方具有多成分、多靶點(diǎn)的特點(diǎn)，真武湯治療DKD的作用機(jī)制尚未被明確闡明。而近年來(lái)網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)的興起為醫(yī)者提供全新的角度及思路，通過(guò)“基因靶點(diǎn)”及“信號(hào)通路”，以微觀、精準(zhǔn)的層次探索中藥治療有關(guān)疾病的作用機(jī)制。本研究采用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)研究方法，以探討真武湯治療DKD的作用靶點(diǎn)及信號(hào)通路為目的展開(kāi)研究。

1 資料與方法

1.1 真武湯有效活性成分及潛在靶點(diǎn)的篩選

真武湯由附子、茯苓、白術(shù)、生姜、芍藥五味中藥組合而成。使用TCMSP分別篩選出上述五味藥物的所有化學(xué)成分[6]，根據(jù)藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)確定以口服生物利用度（OB）≥30%及類藥性（DL）≥0.18作為化學(xué)成分中有效活性成分的篩選條件[7]進(jìn)行篩選，再剔除其中重復(fù)的化學(xué)成分以及沒(méi)有靶點(diǎn)的化學(xué)成分。將得到的結(jié)果進(jìn)一步搜索得到藥物的潛在靶點(diǎn)。同時(shí)，借助靶點(diǎn)標(biāo)準(zhǔn)化數(shù)據(jù)庫(kù)Uniprot（http：//www.uniprot.org/），對(duì)靶基因名稱進(jìn)行規(guī)范化校正[8]。

1.2 糖尿病腎病相關(guān)靶點(diǎn)檢索與篩選

本研究利用人類基因組數(shù)據(jù)庫(kù)Genecards、OMIM以及DisGeNET，以“diabetic kidney disease”“diabetic nephropathy”作為關(guān)鍵詞進(jìn)行檢索。對(duì)搜索到的結(jié)果進(jìn)行匯總并剔除多余的重復(fù)項(xiàng)。在Genecards數(shù)據(jù)庫(kù)檢索過(guò)程中，為提高研究結(jié)果的準(zhǔn)確性，本研究選取相關(guān)性分?jǐn)?shù)（Relevance score）大于30分的靶點(diǎn)基因進(jìn)行預(yù)測(cè)[9]。OMIM數(shù)據(jù)庫(kù)作為基因和遺傳表型以及它們之間關(guān)系的精確信息的主要儲(chǔ)存庫(kù)，包括基因圖譜的基因組協(xié)調(diào)搜索、表型系列中表型遺傳異質(zhì)性的視圖和臨床概要的并排比較[10]。DisGeNET是一個(gè)整合和標(biāo)準(zhǔn)化多來(lái)源的疾病相關(guān)基因和變異數(shù)據(jù)的知識(shí)管理平臺(tái)，涵蓋了人類疾病的全譜以及正常和異常性狀[11]。

1.3 真武湯治療糖尿病腎病作用靶點(diǎn)的篩選及可視化網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建

將真武湯有效活性成分的靶點(diǎn)與疾病的靶點(diǎn)進(jìn)行匹配，利用OmicShare平臺(tái)繪制韋恩圖，將數(shù)據(jù)導(dǎo)入Cytoscape3.7.2，構(gòu)建真武湯治療糖腎的“藥物-成分-靶點(diǎn)-疾病”可視化交互網(wǎng)絡(luò)。將共有靶點(diǎn)導(dǎo)入String在線數(shù)據(jù)庫(kù)中，限定物種為“Homo sapiens”，選取相互作用閾值高于0.9的高置信度數(shù)據(jù)，隱藏?zé)o蛋白互作關(guān)系的靶點(diǎn)，繪制出蛋白質(zhì)間相互作用關(guān)系PPI網(wǎng)絡(luò)圖[12]。再將數(shù)據(jù)導(dǎo)入Cytoscape3.7.2軟件進(jìn)行可視化處理及分析，以degree值和combined score值分析靶點(diǎn)之間相互的作用關(guān)系。

1.4 GO功能及KEGG通路富集分析

借助David6.8在線數(shù)據(jù)庫(kù)，對(duì)真武湯治療糖尿病腎病的關(guān)鍵靶點(diǎn)開(kāi)展GO及KEGG富集分析，探討相關(guān)靶點(diǎn)在基因功能和信號(hào)通路中的作用[13]。以富集結(jié)果P值<0.05作為篩選條件從小到大進(jìn)行排序，P<0.01被認(rèn)為顯著富集，篩選排名靠前的功能及通路，借助OmicShare平臺(tái)進(jìn)行數(shù)據(jù)可視化處理。

2 結(jié)果

2.1 真武湯有效活性成分及潛在靶點(diǎn)的篩選

在TCMSP數(shù)據(jù)庫(kù)中檢索真武湯組成藥物附子、茯苓、白術(shù)、生姜和白芍的相關(guān)有效活性成分，依據(jù)上述篩選條件，結(jié)果依次得到有效活性成分21、15、7、5、13個(gè)。剔除重復(fù)項(xiàng)后，共得到59個(gè)有效活性成分，見(jiàn)表1及107個(gè)藥物潛在靶點(diǎn)，見(jiàn)表2。

2.2 DKD相關(guān)靶點(diǎn)檢索與篩選

在Genecards、OMIM、DisGeNET數(shù)據(jù)庫(kù)檢索DKD相關(guān)靶點(diǎn)，分別收集到659、517、560個(gè)基因，通過(guò)篩選并剔除重復(fù)，最終得到DKD相關(guān)靶點(diǎn)基因1 462個(gè)。

2.3 真武湯治療DKD作用靶點(diǎn)的篩選及可視化網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建

將篩選得到的DKD相關(guān)靶點(diǎn)與真武湯有效活性成分靶點(diǎn)映射篩選出共同靶點(diǎn)47個(gè)，見(jiàn)圖1。通過(guò)Cytoscape3.7.2軟件構(gòu)建真武湯“藥物-成分-靶點(diǎn)-疾病”可視化網(wǎng)絡(luò)，見(jiàn)圖2。在圖2中節(jié)點(diǎn)的顏色與形狀區(qū)分各自意義，黃色節(jié)點(diǎn)表示藥物的核心作用靶標(biāo)，淺紅色節(jié)點(diǎn)表示藥物的有效活性成分，藍(lán)V節(jié)點(diǎn)表示真武湯組成藥物，淺藍(lán)色圓形節(jié)點(diǎn)代表DKD。

將交叉共有的靶點(diǎn)基因?qū)隨TRING數(shù)據(jù)庫(kù)，得到蛋白互作PPI網(wǎng)絡(luò)圖，見(jiàn)圖3，再將數(shù)據(jù)導(dǎo)入Cytoscape3.7.2軟件進(jìn)行可視化處理及分析，以degree值和combined score值分析靶點(diǎn)之間相互的作用關(guān)系。見(jiàn)圖4。節(jié)點(diǎn)的顏色和形狀大小代表degree值，藍(lán)色越深，圓形越大，degree值越高;橘色越深，圓形越小，degree值越低。節(jié)點(diǎn)之間連線的粗細(xì)代表combined score值，線條越粗，互作分?jǐn)?shù)越高;線條越細(xì)，互作分?jǐn)?shù)越低。以此篩選出網(wǎng)絡(luò)中信息傳遞效率更高、影響作用更大的核心蛋白質(zhì)簇和核心靶點(diǎn)。結(jié)果顯示TNF、ATK1、JUN、RELA、IL6、MAPK8、CASP8、NOS2為其核心靶點(diǎn)。

2.4 真武湯治療DKD GO與KEGG通路富集分析

運(yùn)用David將真武湯治療DKD的靶標(biāo)蛋白基因上傳，開(kāi)展GO功能富集分析，富集分析涉及其生物學(xué)過(guò)程、細(xì)胞組件及分子功能。結(jié)果共得到180個(gè)條目，以P<0.05作為篩選條件得到123個(gè)條目，其中顯著富集P<0.01的有59個(gè)。主要涉及細(xì)胞增殖的正調(diào)節(jié)、細(xì)胞凋亡及RNA聚合酶轉(zhuǎn)錄的正調(diào)控等生物學(xué)過(guò)程，膜筏、細(xì)胞膜外間隙等細(xì)胞組件和蛋白激酶活性、細(xì)胞因子活性及葡萄糖穩(wěn)態(tài)等分子功能。根據(jù)P值，將前30個(gè)條目借助OmicShare平臺(tái)進(jìn)行數(shù)據(jù)可視化處理，氣泡圖中氣泡的大小代表該條目的基因數(shù)量，顏色代表富集顯著性。見(jiàn)圖5。

以相同方法進(jìn)行KEGG通路富集分析共得到94條信號(hào)通路，P<0.05篩選出81條信號(hào)通路，其中顯著富集P<0.01的有65條。主要涉及TNF信號(hào)通路、Toll樣受體信號(hào)通路、HIF-1信號(hào)通路、FoxO信號(hào)通路、NF-κB信號(hào)通路等。以相同方法繪制氣泡圖。見(jiàn)圖6。

3 討論

中醫(yī)學(xué)認(rèn)為糖尿病腎病，系“消渴腎病”，是由消渴病誤治、失治發(fā)展而來(lái)，消渴日久可耗氣傷陰，累及脾腎虛損，腎無(wú)以主水，脾失健運(yùn)，而致痰濕、瘀血、濁毒互結(jié)于腎之脈絡(luò)，引起一系列相關(guān)癥狀。呂仁和教授在治療DKD時(shí)指出，DKD在不同時(shí)期的病機(jī)處于持續(xù)變化的狀態(tài)。初起以陰虛熱結(jié)為主，日久氣陰兩虛，腎氣不固而引發(fā)其他臟腑病變，脾腎陽(yáng)虛證作為常見(jiàn)變證之一，治宜溫陽(yáng)益氣，補(bǔ)腎健脾[14]。真武湯乃仲景方，出自《傷寒論》中，作為溫陽(yáng)利水方主治陽(yáng)虛水泛證，為后世所推崇。方中附子為君，辛溫大熱，溫腎陽(yáng)而散寒;臣以茯苓、白術(shù)健脾益氣，利水燥濕;佐生姜助附子溫陽(yáng)之力，又合白術(shù)、茯苓化濕利水;白芍可利尿養(yǎng)陰并調(diào)和附子燥烈之性。據(jù)臨床研究表明，真武湯可以顯著改善DKD患者臨床癥狀并改善腎功能[4-5]。

現(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究表明，DKD的病理學(xué)特征主要以腎小球肥大，基底膜增厚，系膜基質(zhì)增生，腎間質(zhì)纖維化及腎動(dòng)脈硬化等為主[15]。DKD的發(fā)病機(jī)制較為復(fù)雜，除遺傳因素外包括糖代謝異常、腎臟血流動(dòng)力學(xué)變化、脂代謝紊亂、細(xì)胞因子參與、高糖誘導(dǎo)的氧化應(yīng)激反應(yīng)以及自噬作用等。根據(jù)現(xiàn)代藥理學(xué)研究，附子中含有附子多糖，有通過(guò)促進(jìn)GLUT4轉(zhuǎn)位而增加3T3-L1胰島素抵抗脂肪細(xì)胞對(duì)葡萄糖消耗的功能[16];白術(shù)多糖能夠增強(qiáng)外周靶器官對(duì)胰島素的敏感性從而改善血糖水平[17];茯苓多糖一方面可以利水消腫，另一方面也可以抑制腎臟細(xì)胞凋亡保護(hù)腎臟[18];生姜中姜黃素可降低DKD小鼠尿蛋白、改善腎小球硬化，降低腎臟炎性反應(yīng)水平[19];白芍總苷能夠抑制炎性因子，保護(hù)足細(xì)胞，改善蛋白尿癥狀，延緩DKD的病情進(jìn)展[20]。

本研究結(jié)果顯示，真武湯共含有59個(gè)有效活性成分，主要包括芍藥苷、水黃皮素、谷甾醇、山柰酚等。芍藥苷（Paeoniflorin）是白芍總苷中的主要生物活性成分。有研究表明，芍藥苷可通過(guò)抑制高糖環(huán)境下巨噬細(xì)胞的活化，減少TNF-α、IL-1β、MCP-1及巨噬細(xì)胞活化標(biāo)志物iNOS等炎性因子的產(chǎn)生，發(fā)揮抗炎、抗氧化的作用，從而改善腎臟炎性狀態(tài)達(dá)到保護(hù)腎臟的目的[21]。相關(guān)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)證實(shí)芍藥苷可減少DKD大鼠尿蛋白，抑制腎小球肥大，改善腎臟炎性水平[22]。附子中的水黃皮素（Karanjin）是一種黃酮類化合物，具有降血糖、胃保護(hù)以及抗菌作用[23]，且在大鼠中具有良好的耐受性[24]。谷甾醇（Sitosterol）作為一種附子與生姜共同含有的甾體化合物，具有抗高血糖活性。其降糖作用可能是通過(guò)刺激胰島存活的β細(xì)胞導(dǎo)致更多的胰島素釋放[25]。Rangachari等[26]發(fā)現(xiàn)，谷甾醇通過(guò)增加胰島素分泌并抑制糖異生改善血糖水平，DKD大鼠經(jīng)口給予γ-谷甾醇后血糖和糖化血紅蛋白顯著降低，血漿胰島素水平明顯升高。另有研究表明，β-谷甾醇可通過(guò)激活2型糖尿病大鼠脂肪組織中的IR和GLUT4來(lái)改善血糖控制[27]。白芍中的山柰酚（Kaempferol）對(duì)應(yīng)靶點(diǎn)最多，具有抗炎、抗凋亡、抗氧化的作用，并能夠抑制高糖環(huán)境下腎系膜細(xì)胞的增殖從而保護(hù)腎臟[28]。

根據(jù)蛋白互作網(wǎng)絡(luò)分析，TNF、ATK1、JUN、RELA、IL6、MAPK8、CASP8、NOS2等是真武湯治療DKD的核心靶點(diǎn)。TNF具有廣泛的生物學(xué)活性，體現(xiàn)于TNF-α的雙重生物學(xué)效應(yīng)中。當(dāng)濃度較低時(shí)TNF-α具有抗感染的作用，能夠參與調(diào)節(jié)炎性反應(yīng)及組織修復(fù);當(dāng)其濃度過(guò)高則可破壞免疫平衡，對(duì)機(jī)體產(chǎn)生病理?yè)p傷。研究表明[29-30]，高糖環(huán)境可刺激腎臟多種細(xì)胞釋放TNF-α，其進(jìn)一步刺激系膜細(xì)胞產(chǎn)生氧自由基，過(guò)程中產(chǎn)生的大量的脂質(zhì)代謝產(chǎn)物作用于細(xì)胞內(nèi)膜和基底膜，引起局部微血管通透性增強(qiáng)而損傷腎小球，促進(jìn)蛋白尿的產(chǎn)生。JUN是AP-1家族轉(zhuǎn)錄因子的成員之一，通過(guò)與靶基因啟動(dòng)子中的TRE元件結(jié)合活化下游核轉(zhuǎn)錄因子激活轉(zhuǎn)錄，介導(dǎo)應(yīng)激狀態(tài)下的細(xì)胞改變[31]。相關(guān)研究發(fā)現(xiàn)[32-33]，在DKD持續(xù)高糖的狀況下，轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1（TGFβ1）可被活性氧簇ROS激活，其過(guò)度表達(dá)導(dǎo)致細(xì)胞外基質(zhì)（ECM）沉積以及腎小球硬化，最終導(dǎo)致腎纖維化的發(fā)生。而c-Jun能夠通過(guò)自動(dòng)調(diào)節(jié)和磷酸化作用，與TGF-β1啟動(dòng)子上的特定位點(diǎn)結(jié)合，促進(jìn)其轉(zhuǎn)錄表達(dá)從而加快腎臟纖維化的發(fā)生。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)證實(shí)[34]，抑制c-Jun的表達(dá)可明顯改善DKD大鼠的腎臟損傷狀況。RELA是NF-κB家族的重要成員，通過(guò)調(diào)控下游靶基因轉(zhuǎn)錄參與細(xì)胞多種生命活動(dòng)[35]。最新的證據(jù)表明[36-37]，RELA一方面可以通過(guò)蛋白質(zhì)磷酸化調(diào)節(jié)激活轉(zhuǎn)錄因子增加TNF-α、IL6等炎性因子的釋放增強(qiáng)炎性反應(yīng);另一方面在系膜細(xì)胞中RELA通過(guò)乙?；せ頝F-κB信號(hào)通路，下調(diào)LC3-II從而抑制高血糖誘導(dǎo)的足細(xì)胞自噬，導(dǎo)致腎臟細(xì)胞炎性反應(yīng)加劇和線粒體功能障礙，進(jìn)一步損傷腎臟功能和形態(tài)。以上結(jié)論充分表明真武湯通過(guò)多分子、多靶點(diǎn)的模式有效治療DKD。

GO功能富集分析結(jié)果表示細(xì)胞凋亡、細(xì)胞增殖的調(diào)控、細(xì)胞膜外間隙、外源性凋亡信號(hào)通路、RNA聚合酶啟動(dòng)子轉(zhuǎn)錄的正調(diào)控等生物過(guò)程與真武湯治療DKD存在密切聯(lián)系。KEGG通路富集分析結(jié)果顯示，真武湯治療DKD主要涉及TNF、Toll樣受體、HIF-1、FoxO、NF-κB等多條信號(hào)通路。TNF信號(hào)通路主要參與細(xì)胞生長(zhǎng)、分化、凋亡、炎性反應(yīng)誘發(fā)及免疫調(diào)節(jié)等生物學(xué)效應(yīng)。TNF-α的過(guò)度分泌可刺激促炎細(xì)胞因子MCP-1和瘦素的增加，從而引起胰島素抵抗;另外，TNF-α能夠誘導(dǎo)蛋白激酶C（PKC）的活化，激活NADPH氧化酶，誘導(dǎo)產(chǎn)生ROS，促進(jìn)氧化應(yīng)激過(guò)程從而加速損傷腎臟[38]。Navarro JF等[39]研究發(fā)現(xiàn)，TNF-α拮抗藥可有效減少腎皮質(zhì)中的TNF-α mRNA表達(dá)，從而明顯改善腎臟炎性狀態(tài)并降低蛋白尿。馬俊杰等[40]發(fā)現(xiàn)，真武湯能夠降低大鼠血清TNF-α水平緩解其腎臟炎性反應(yīng)。Toll樣受體作為模式識(shí)別受體之一，參與調(diào)節(jié)機(jī)體免疫炎性反應(yīng)，并發(fā)揮重要作用。TLR2/4主要表達(dá)于腎小管上皮細(xì)胞和腎小球系膜細(xì)胞中，高糖環(huán)境促進(jìn)TLR2/4 mRNA表達(dá)，通過(guò)介導(dǎo)下游MyD88蛋白表達(dá)激活NF-κB增加炎性反應(yīng)因子的轉(zhuǎn)錄;或直接激活免疫細(xì)胞及腎臟實(shí)質(zhì)細(xì)胞，持續(xù)分泌大量炎性遞質(zhì)、細(xì)胞因子加劇腎臟炎性反應(yīng)，加速腎小球硬化[41]。研究證實(shí)[42]，真武湯可有效降低心腎陽(yáng)虛證大鼠TLR2/TLR4蛋白在腎臟組織中的表達(dá)，減緩腎臟病變。低氧誘導(dǎo)因子（Hypoxia Inducible Factor，HIF）通過(guò)特異性調(diào)節(jié)某些基因、蛋白的表達(dá)使細(xì)胞適應(yīng)低氧狀態(tài)。HIF-1能夠與低氧反應(yīng)元件結(jié)合，激活低氧靶基因轉(zhuǎn)錄從而影響組織生長(zhǎng)發(fā)育及應(yīng)激反應(yīng)[43]。在高糖環(huán)境中，組織處于持續(xù)缺氧狀態(tài)，腎臟組織應(yīng)激性提高HIF-1的表達(dá)。HIF-1通過(guò)調(diào)節(jié)線粒體呼吸使局部組織ROS水平及細(xì)胞凋亡增加，促進(jìn)缺氧適應(yīng)性的產(chǎn)生從而降低組織在缺氧狀態(tài)下的損傷，以達(dá)到保護(hù)腎臟細(xì)胞的目的[44-45]。孫靜等[46]發(fā)現(xiàn)，真武湯能夠上調(diào)HIF-1α的表達(dá)，減輕腎小管上皮細(xì)胞的氧化損傷，減緩腎臟纖維化的過(guò)程。

本研究借助網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)研究方法，探討真武湯治療DKD的潛在作用機(jī)制，結(jié)果表明其涉及多成分、多靶點(diǎn)、多通路，是通過(guò)多途徑系統(tǒng)協(xié)同來(lái)發(fā)揮作用。然而，由于中藥組方中君臣佐使間配伍的復(fù)雜性，單純從以大數(shù)據(jù)、生物信息技術(shù)為基礎(chǔ)的網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)研究闡述其作用機(jī)制稍顯單薄。本研究旨在預(yù)測(cè)探討真武湯治療DKD的作用靶點(diǎn)及通路，為進(jìn)一步明確真武湯治療DKD的作用機(jī)制提供了科學(xué)的依據(jù)。通過(guò)本研究篩選得到的基因靶點(diǎn)及真武湯通過(guò)調(diào)節(jié)免疫、炎性反應(yīng)及低氧誘導(dǎo)等信號(hào)通路治療DKD的作用機(jī)制仍需進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證，為其基礎(chǔ)和臨床應(yīng)用提供理論依據(jù)。

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（2020-05-27收稿 責(zé)任編輯：徐穎）

基金項(xiàng)目：國(guó)家自然科學(xué)基金面上項(xiàng)目（81973801）;首都衛(wèi)生發(fā)展科研基金重點(diǎn)攻關(guān)項(xiàng)目（首發(fā)2018-1-4161）作者簡(jiǎn)介：布天杰（1995.08—），男，碩士研究生，研究方向：中醫(yī)藥防治腎病內(nèi)分泌疾病，E-mail：tmacbu@163.com通信作者：張寧（1963.09—），女，醫(yī)學(xué)博士，主任醫(yī)師，博士研究生導(dǎo)師，研究方向：中醫(yī)藥防治腎病內(nèi)分泌疾病，Tel：（010）84739029，E-mail：znice3927@126.com