李雪梅，吳 堅(jiān)，徐文堅(jiān)△

（1. 廣東省中山市小欖人民醫(yī)院，廣東 中山 528400； 2. 廣東省汕頭市中心醫(yī)院，廣東 汕頭 515000）

胃病的發(fā)病率高達(dá)80%，其中以胃炎發(fā)病率最高[1]。胃炎是各種原因引起的胃黏膜炎癥，為最常見的消化系統(tǒng)疾病，是一種血管系統(tǒng)的活體組織對(duì)損傷因子所發(fā)生的復(fù)雜防御反應(yīng)，通常包括上皮損傷、黏膜炎性反應(yīng)和上皮再生3個(gè)過程。機(jī)體許多成分參與胃炎反應(yīng)過程，主要包括白細(xì)胞、血管壁細(xì)胞、細(xì)胞外基質(zhì)和胃炎介質(zhì)等。胃炎常表現(xiàn)為腹胃脘部不適、疼痛、飯后飽脹、噯氣、反酸，甚至惡心、嘔吐等癥狀[2]，影響其正常飲食和生活質(zhì)量，甚至威脅機(jī)體健康。目前，治療胃炎仍以化學(xué)藥物為主，能快速改善癥狀，緩解不適，但易復(fù)發(fā)，甚至?xí)a(chǎn)生嚴(yán)重不良反應(yīng)。隨著現(xiàn)代醫(yī)學(xué)科學(xué)研究技術(shù)的發(fā)展，藥物分離及分析技術(shù)的提高，分子生物學(xué)等相關(guān)學(xué)科研究的深入，結(jié)構(gòu)確定、作用溫和、藥效緩慢與持久的藥用天然產(chǎn)物逐漸成為開發(fā)新藥的寶庫(kù)。

小檗堿（berberine，BBR，C20H19NO5，相對(duì)分子質(zhì)量為336.37）又名黃連素，可從小檗科、毛茛科、蕓香科、鼠李科等屬植物中提取分離的異喹啉類生物堿[3]，是除青蒿素、三氧化二砷及阿帕替尼外，我國(guó)自主研發(fā)的藥用植物單體藥物，來源廣泛，成本低，不良反應(yīng)小[4-5]，臨床應(yīng)用廣泛，極具開發(fā)潛能。臨床常用的鹽酸小檗堿（BBRH，相對(duì)分子質(zhì)量372.87）具有多種生物活性，以及抗炎、抗菌、降糖、調(diào)脂、抗痢疾、抗腫瘤等藥理活性[6-15]，可用于治療消化性潰瘍、胃炎、腸炎等消化系統(tǒng)疾病[16]。BBRH 治療胃炎效果良好，但其作用機(jī)制尚未見系統(tǒng)報(bào)道。目前絕大多數(shù)藥物以個(gè)別靶點(diǎn)和通路作為研究對(duì)象闡明其作用機(jī)制，但該法難以全面地反映具有天然屬性的鹽酸小檗堿的藥理機(jī)制。網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)基于系統(tǒng)生物學(xué)理論，從藥物、靶點(diǎn)與疾病間相互作用的整體性和系統(tǒng)性出發(fā)，通過采用復(fù)雜生物網(wǎng)絡(luò)模型，揭示藥物、基因、靶點(diǎn)、疾病之間復(fù)雜的整體生物網(wǎng)絡(luò)關(guān)系，在此基礎(chǔ)上分析、預(yù)測(cè)藥物的藥理學(xué)機(jī)制[17-20]。目前，多采用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)方法研究天然單體藥物和西藥的藥理機(jī)制，如丹參酮ⅡA、苦參堿、大黃素、人參二醇、牛磺鵝去氧膽酸、臭椿酮、阿帕替尼等成分和藥物的機(jī)制分析[21-27]。本研究中基于網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)的分析方法，從整體、系統(tǒng)的生物學(xué)角度綜合探討B(tài)BRH 治療胃炎的作用機(jī)制，為BBRH 藥理機(jī)制的闡明及其更多臨床應(yīng)用的開發(fā)提供研究思路。現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 BBRH 靶點(diǎn)收集及其互作網(wǎng)絡(luò)（PPI）構(gòu)建

在NCBI 數(shù)據(jù)庫(kù)中獲得berberine 的SDF 格式文件，并 將 其 上 傳PharmMapper 服 務(wù) 器（http：／ ／ lilab.ecust.edu.cn／pharmmapper／submit＿file.php）進(jìn) 行 靶 點(diǎn)預(yù)測(cè)，設(shè)置獲得前300個(gè)人類靶點(diǎn)及其名稱、匹配值（score）、PDBID 等 信 息；將 PDBID 導(dǎo) 入 UniProt（https：／ ／www.uniprot.org／）數(shù)據(jù)庫(kù)中檢索和矯正，剔除重復(fù)、非人源與不規(guī)范的靶點(diǎn)，并結(jié)合TCMSP（http：／ ／lsp.nwu.edu.cn／tcmsp.php）和Puchem（https：／ ／pubchem.ncbi.nlm.nih.gov／）收集的靶點(diǎn)建立Berberine 的靶點(diǎn)數(shù)據(jù)庫(kù)；將BBRH 潛在靶點(diǎn)導(dǎo)入STRING 數(shù)據(jù)庫(kù)（http：／ ／string-db.org），選定物種為人類，最后導(dǎo)出BBRH 潛在靶點(diǎn)PPI 網(wǎng)絡(luò)文件，并使用Cytoscape 3.6.1 軟件進(jìn)行可視化分析。

1.2 BBRH 治療胃炎的潛在靶點(diǎn)確認(rèn)及PPI 構(gòu)建

以“gastritis”為 關(guān) 鍵 詞，在GeneCards（https：／ ／www.genecards.org／）數(shù)據(jù)庫(kù)中檢索與胃炎相關(guān)的靶點(diǎn)，建立胃炎相關(guān)靶點(diǎn)數(shù)據(jù)庫(kù)；按1.1 項(xiàng)下同法構(gòu)建胃炎PPI 網(wǎng)絡(luò)；對(duì)BBRH 潛在靶點(diǎn)PPI 網(wǎng)絡(luò)和胃炎相關(guān)靶點(diǎn)PPI 網(wǎng)絡(luò)進(jìn)行交集比對(duì)，確認(rèn)BBRH 治療胃炎的潛在直接作用靶點(diǎn)及間接作用靶點(diǎn)，按1.1 項(xiàng)下同法構(gòu)建BBRH 治療胃炎的潛在作用靶點(diǎn)PPI 網(wǎng)絡(luò)；采用Cytoscape 3.6.1 軟件自帶的“Network Analysis”插件對(duì)該P(yáng)PI 網(wǎng)絡(luò)進(jìn)行拓?fù)湫再|(zhì)分析，包括度數(shù)（degree）和介數(shù)中心度（betweenness）[28-29]，以大于或等于1 倍介數(shù)中心度（betweenness）和接近中心度（closeness）中位數(shù)及大于或等于2 倍度數(shù)（degree）的中位數(shù)為條件篩選關(guān)鍵靶點(diǎn)[30]。

1.3 相關(guān)通路和注釋分析及其網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建

使用DAVID 數(shù)據(jù)庫(kù)（https：／ ／david.ncifcrf.gov／）對(duì)靶點(diǎn)進(jìn)行KEGG 生物通路富集分析，并使用Cytoscape 3.5.1 軟件的ClueGO 插件對(duì)BBRH 治療胃炎的生物學(xué)功能進(jìn)行注釋分析，并采用其Merge 與Union 功能構(gòu)建“藥物-靶點(diǎn)-通路”網(wǎng)絡(luò)。

1.4 藥物-靶點(diǎn)的分子對(duì)接驗(yàn)證

采用Discovery studio 2.5，AutoDock 1.5.6，PyMOL軟件，分別對(duì)原配體和蛋白進(jìn)行預(yù)處理、對(duì)接、作圖，以結(jié)合自由能（ΔGbind）為參考指標(biāo)，ΔGbind 值越小，BBRH 與靶點(diǎn)的結(jié)合能力越強(qiáng)，并從最優(yōu)構(gòu)象上分析BBRH 與靶點(diǎn)的結(jié)合模式，從分子水平探討兩者的結(jié)合情況，準(zhǔn)確了解靶點(diǎn)和活性小分子間的相互作用[31]。

2 結(jié)果與分析

2.1 BBRH 靶點(diǎn)收集及其PPI 網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建

合并PharmMapper（227）和TCMSP（49）及Pubchem（54）3個(gè)數(shù)據(jù)庫(kù)的BBRH 靶點(diǎn)，并取PharmMapper 數(shù)據(jù)庫(kù)中score 排序前30個(gè)靶點(diǎn)及其他2個(gè)數(shù)據(jù)庫(kù)的靶點(diǎn)，剔除重復(fù)項(xiàng)后共獲得117個(gè)靶點(diǎn)，詳見圖1?？梢?，117個(gè)靶點(diǎn)共存在1242 條關(guān)系，對(duì)該網(wǎng)絡(luò)的拓?fù)湫畔⑦M(jìn)行分析可知，degree，betweenness，closeness 的中位數(shù)分別為8，0.0028，0.433，且符合大于或等于1 倍betweenness 和closeness 中位數(shù)及大于或等于2 倍degree 中位數(shù)的靶點(diǎn)共20個(gè)，該類靶點(diǎn)是BBRH 作用的潛在關(guān)鍵靶點(diǎn)。結(jié)果見表1。

2.2 胃炎相關(guān)靶點(diǎn)的收集及其PPI 網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建

從GeneCards 數(shù)據(jù)庫(kù)獲得882個(gè)與胃炎相關(guān)的靶點(diǎn)，對(duì)BBRH 靶點(diǎn)與胃炎相關(guān)靶點(diǎn)進(jìn)行比對(duì)，得出31個(gè)BBRH 治療胃炎的潛在直接靶點(diǎn)，包括TP53，MAPK1，COX-2，PPARG，IFN-γ 等。BBRH 靶點(diǎn)與胃炎靶點(diǎn)的韋恩圖見圖2。在BBRH 治療胃炎的潛在直接靶點(diǎn)PPI網(wǎng)絡(luò)中有30個(gè)靶點(diǎn)存在相互作用，且構(gòu)成127 條關(guān)系，詳見圖3。對(duì)BBRH 治療胃炎的潛在直接靶點(diǎn)PPI 網(wǎng)絡(luò)進(jìn)行Network Analyzer 分析發(fā)現(xiàn)，該P(yáng)PI 網(wǎng)絡(luò)中的degree，betweenness，closeness 分 別 為 6.5，0.00729，0.537，其中符合篩選條件的靶點(diǎn)有TP53，MAPK1，COX-2，PPARG，這4個(gè)靶點(diǎn)是連接其他靶點(diǎn)的樞紐，提示其在BBRH 治療胃炎過程中可起到關(guān)鍵作用。

此外，BBRH 治療胃炎的31個(gè)潛在直接靶點(diǎn)與651個(gè)胃炎相關(guān)靶點(diǎn)存在相互作用關(guān)系，表明BBRH 通過直接作用到31個(gè)潛在靶點(diǎn)上而再影響到651個(gè)靶點(diǎn)的活性，詳見表2；對(duì)間接靶點(diǎn)PPI 網(wǎng)絡(luò)進(jìn)行拓?fù)湫再|(zhì)分析，并列出了該網(wǎng)絡(luò)符合關(guān)鍵參數(shù)條件的前50個(gè)靶點(diǎn)，其中包括白細(xì)胞介素6（IL-6）等靶點(diǎn)。結(jié)果見表3。

圖1 鹽酸小檗堿作用靶點(diǎn)的互作網(wǎng)絡(luò)

表1 關(guān)鍵藥物靶點(diǎn)的拓?fù)鋮?shù)基本情況

圖2 鹽酸小檗堿治療胃炎的潛在直接靶點(diǎn)韋恩圖

2.3 相關(guān)通路和注釋分析及其網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建

對(duì)靶點(diǎn)進(jìn)行ClueGO 生物功能注釋，BBRH 治療胃炎的潛在生物學(xué)功能主要概括為13個(gè)方面的內(nèi)容，如細(xì)胞因子介導(dǎo)信號(hào)通路調(diào)節(jié)、活性氧的代謝調(diào)節(jié)、一氧化氮生物合成過程、血管內(nèi)皮細(xì)胞遷移的調(diào)控、外源性凋亡信號(hào)通路的調(diào)控、RNA 聚合物的轉(zhuǎn)錄、端粒酶活性的調(diào)節(jié)等，該類生物功能均與細(xì)胞增殖、細(xì)胞遷移、細(xì)胞凋亡、血管再生、細(xì)胞周期的調(diào)控，以及轉(zhuǎn)錄、翻譯、信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、炎性反應(yīng)、免疫應(yīng)激等生物過程密切相關(guān)，提示BBRH 對(duì)胃炎的治療是通過多種生命過程共同干預(yù)胃炎的發(fā)生、發(fā)展實(shí)現(xiàn)的。

圖3 鹽酸小檗堿治療胃炎的潛在直接靶點(diǎn)PPI 網(wǎng)絡(luò)

為了進(jìn)一步探討B(tài)BRH 治療胃炎的潛在作用機(jī)制，將31個(gè)潛在靶點(diǎn)映射到DAVID 數(shù)據(jù)庫(kù)，進(jìn)行KEGG 通路富集，共富集到64 條信號(hào)通路（見表4），其中P＞0.05的通路共有50 條，主要與炎癥、癌癥、免疫等相關(guān)（包括TNF 信號(hào)通路等炎癥通路、B 細(xì)胞受體信號(hào)通路等免疫通路、PI3K-Akt 信號(hào)通路等常見腫瘤經(jīng)典通路）。共12個(gè)靶點(diǎn)富集在幽門螺桿菌感染的上皮細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)（DDR1，IκB-α，MAPK14）、缺氧誘導(dǎo)因子-1 信號(hào)通路（HIF-1α，IFN-γ，MAPK1，iNOS，eNOS）、血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子信號(hào)通路（MAPK1，iNOS，eNOS，COX-2）、腫瘤壞 死 因 子 信 號(hào) 通 路（IκB-α，COX-2，MAPK14，MAPK1）、花生四烯酸代謝通路（COX-1，COX-2）、病灶粘連（BRAF，DDR1，GSK-3β，MAPK1）等與胃炎的發(fā)生，發(fā)展密切相關(guān)的信號(hào)通路中，體現(xiàn)了BBHR 干預(yù)胃炎的多途徑作用特點(diǎn)。為更清晰地了解BBRH 干預(yù)胃炎的潛在機(jī)制，本研究中構(gòu)建了“藥物-靶點(diǎn)-通路”可視化網(wǎng)絡(luò)，有助于BBHR 干預(yù)胃炎機(jī)制的闡釋。詳見圖5。

表2 鹽酸小檗堿治療胃炎的潛在直接靶點(diǎn)的拓?fù)鋮?shù)基本情況

表3 間接靶點(diǎn)的關(guān)鍵節(jié)點(diǎn)拓?fù)鋮?shù)基本信息

2.4 分子對(duì)接驗(yàn)證

圖4 鹽酸小檗堿治療胃炎的生物學(xué)功能注釋

將富集在與胃炎發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)通路的12個(gè)潛在靶點(diǎn)與BBRH 進(jìn)行分子對(duì)接（見圖4），配體與受體結(jié)合的構(gòu)象穩(wěn)定時(shí)能量越低，發(fā)生作用可能性越大。本研究中的分子對(duì)接結(jié)果表明，BBRH 與12個(gè)靶點(diǎn)的親和力和各蛋白原配體的親和力相近，其中親和力最強(qiáng)的是iNOS（見圖6），BBRH 與iNOS 的Tyr-483，Gln-199，Trp-366 存在氫鍵作用，其自由能為-10.1 kcal／mol，不僅接近于原配體與該蛋白的自由能，且結(jié)合最穩(wěn)定。詳 見 表5。此 外，BBRH 與IFN-γ，MAPK1，eNOS，GSK-3β 等靶點(diǎn)的自由結(jié)合能較其對(duì)應(yīng)的原配體更低，且存在氫鍵作用。與原配體的結(jié)合相比，BBRH 與這些靶點(diǎn)的結(jié)合更親和和穩(wěn)定，體現(xiàn)了BBRH 多靶點(diǎn)的作用特點(diǎn)。

表4 鹽酸小檗堿治療胃炎的信號(hào)通路

圖5 鹽酸不檗堿對(duì)胃炎的“藥物-靶點(diǎn)-通路”干預(yù)網(wǎng)絡(luò)

3 討論

網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)是一種集系統(tǒng)生物學(xué)和多向藥理學(xué)及計(jì)算機(jī)分析技術(shù)網(wǎng)絡(luò)為一體的新型學(xué)科，其可將藥物和疾病緊密關(guān)聯(lián)起來[32]，建立既復(fù)雜又清晰的藥物-靶點(diǎn)-疾病的相互作用網(wǎng)絡(luò)，助力現(xiàn)代藥物研究者從系統(tǒng)和整體的角度闡明和理解藥物作用機(jī)制，可為先導(dǎo)化合物的發(fā)現(xiàn)、新藥靶點(diǎn)的識(shí)別等研究提供新策略和思路[33-34]。本研究中通過網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)研究發(fā)現(xiàn)，BBRH 可通過多靶點(diǎn)、多通路的作用特性干預(yù)胃炎的發(fā)生、發(fā)展。

圖6 鹽酸小檗堿與NOS2 分子對(duì)接圖

表5 鹽酸小檗堿與14個(gè)重要靶點(diǎn)的對(duì)接結(jié)果

通過PharmMapper 服務(wù)器和TCMSP 數(shù)據(jù)庫(kù)獲得的BBRH 靶點(diǎn)與利用GeneCards 數(shù)據(jù)庫(kù)得到的胃炎相關(guān)靶點(diǎn)進(jìn)行對(duì)比與分析，并預(yù)測(cè)到BBRH 干預(yù)胃炎的潛在靶點(diǎn)共31個(gè)。然后利用STRING 數(shù)據(jù)庫(kù)構(gòu)建PPI，分析發(fā)現(xiàn)，共有30個(gè)蛋白存在相互作用關(guān)系，其中COX-2，MAPK1，TP53，PPAPG 等靶點(diǎn)較關(guān)鍵，這表明BBRH 干預(yù)胃炎的效果是通過多靶點(diǎn)相互作用實(shí)現(xiàn)的。隨后利用ClueGO 對(duì)這些靶點(diǎn)進(jìn)行GO 生物功能注釋，結(jié)果表明，這些靶點(diǎn)主要參與機(jī)體多種應(yīng)激反應(yīng)和多種蛋白酶的生物合成過程，也參與蛋白、氨基酸、脂質(zhì)等代謝，調(diào)控細(xì)胞增殖與凋亡、免疫應(yīng)答及信號(hào)傳導(dǎo)，調(diào)控多種金屬離子的運(yùn)轉(zhuǎn)和多種蛋白激酶的活性及細(xì)胞活化等作用，提示BBRH 干預(yù)胃炎的作用可通過多層次、多途徑實(shí)現(xiàn)。

對(duì)以上靶點(diǎn)進(jìn)行KEGG 通路富集分析發(fā)現(xiàn)，31個(gè)靶點(diǎn)分布在64 條信號(hào)通路上，其中12個(gè)靶點(diǎn)富集在6 條與胃炎發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)的通路上，主要為酶類（包括蛋白酶、蛋白激酶、氧化還原酶等）、受體、轉(zhuǎn)錄因子等。分子對(duì)接結(jié)果也表明，BBRH 與這些靶點(diǎn)均有良好的結(jié)合，進(jìn)一步分析發(fā)現(xiàn)，COX-2 和MAPK1 分別都富集在3 條通路中，且為在12個(gè)靶點(diǎn)中的拓?fù)鋮?shù)最大的2個(gè)靶點(diǎn)。此外，BBRH 與iNOS 的結(jié)合最親和，表明其在BBRH 干預(yù)胃炎的過程中發(fā)揮著較重要的作用，提示網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)對(duì)BBRH 干預(yù)胃炎的機(jī)制研究具有一定的可靠性和參考價(jià)值。

COX 主要分為COX1 和COX-2，前者在大多數(shù)正常組織中表達(dá)，負(fù)責(zé)生理性PG 的生成，后者在正常內(nèi)環(huán)境中不表達(dá)，但其升高可導(dǎo)致炎性級(jí)聯(lián)反應(yīng)和組織損害，并與炎癥程度呈正相關(guān)。COX-2 是催化花生四烯酸（AA）裂解為前列腺素類等致炎介質(zhì)的關(guān)鍵酶，其介導(dǎo)的級(jí)聯(lián)反應(yīng)可調(diào)節(jié)炎性介質(zhì)NO 和前列腺素類（PGs）的合成和釋放，該酶活性的降低或抑制能有效控制炎癥的發(fā)生[35]。有研究發(fā)現(xiàn)，胃炎患者的COX-2 的蛋白表達(dá)陽性率很高[36]，表明COX-2 蛋白的表達(dá)可促進(jìn)黏膜的炎性反應(yīng)[37]。因此，對(duì)COX-2 蛋白表達(dá)下降可修復(fù)胃黏膜并恢復(fù)其正常的生理功能，進(jìn)而緩解胃炎的癥狀[38]。

BBRH 具有保護(hù)胃腸道黏膜的作用，可誘導(dǎo)胃腸黏膜中PGE2 含量的增加，COX-1 表達(dá)的升高及COX-2表達(dá)的降低[39]，同時(shí)，促進(jìn)可能與胃腸黏膜血管內(nèi)皮細(xì)胞分泌NO 密切相關(guān)的eNOS 的表達(dá)，介導(dǎo)胃黏膜血管內(nèi)皮細(xì)胞依賴性舒張反應(yīng)，改善胃局部微循環(huán)，通過修復(fù)胃黏膜的損傷，恢復(fù)胃腸黏膜的生理功能、增強(qiáng)其對(duì)外界刺激的防御能力，從而實(shí)現(xiàn)BBRH 對(duì)胃腸黏膜的保護(hù)作用。

MAPK1（ERK 1／2）和MAPK14（p38）均為絲裂原活化蛋白激酶（MAPK）家族成員，參與機(jī)體對(duì)外界環(huán)境應(yīng)激的適應(yīng)、炎性反應(yīng)等多種生理、病理過程，是多種抗炎藥物作用的共同通路[40]。在生理狀態(tài)下，NF-κB 以p50-p65 異源二聚體的形式存在，且與IκB 結(jié)合而處于失活狀態(tài)[41]。IκB-α 是遏制NF-κB 核因子活性的關(guān)鍵蛋白[42]，可通過與NF-κB 二聚體結(jié)合，使NF-κB 以失活的靜息狀態(tài)存在細(xì)胞質(zhì)中。但當(dāng)細(xì)胞受到外界刺激時(shí)，IκB-α 被磷酸化[43]，NF-κB 變?yōu)橛坞x狀態(tài)，啟動(dòng)相關(guān)基因的轉(zhuǎn)錄和表達(dá)，誘導(dǎo)相關(guān)炎性因子、趨化因子及炎性介質(zhì)表達(dá)，放大炎性損傷[44]。BBRH 能下調(diào)MAPK 信號(hào)通路中ERK 1／2 和p38 蛋白磷酸化水平，提高兩者總蛋白的表達(dá)水平[45]。此外，BBRH 還能降低NF-κB 信號(hào)通路中p65 蛋白和IκB-α 的磷酸化水平和提高IκB-α 總蛋白表達(dá)水平[46]，從而減少炎性因子的轉(zhuǎn)錄和表達(dá)，減輕炎癥對(duì)組織的繼續(xù)損傷而發(fā)揮其抗炎效應(yīng)。

BRAF 作為一種蛋白激酶也參與了促有絲分裂信號(hào)從細(xì)胞膜到細(xì)胞核的傳遞，能磷酸化MAPK1 激活MAPK／ERK 信號(hào)通路，影響細(xì)胞分裂、分化和分泌[47]。由分子對(duì)接結(jié)果可知，BBRH 可與BRAF 的Lys483，Sep467，Phe595，Ser463 形成較穩(wěn)定的氫鍵，據(jù)此推測(cè)BRAF 也是BBRH 參與胃炎治療的重要靶點(diǎn)。

慢性胃炎多由幽門螺桿菌感染引發(fā)。幽門螺桿菌是定植于胃黏膜表面和黏膜層之間的微需氧菌，其細(xì)胞壁的主要成分為脂多糖，可使單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞分泌抗原類物質(zhì)，幽門螺桿菌感染機(jī)體的同時(shí)可刺激iNOS 表達(dá)增高，該蛋白誘導(dǎo)產(chǎn)生的NO 含量也隨之增加[48]，進(jìn)而引起并加劇了胃黏膜的炎性反應(yīng)，造成胃黏膜發(fā)生損傷及萎縮等變化。故幽門螺桿菌的陽性率越高，慢性胃炎的癥狀就越重[49]。

在機(jī)制方面，受體酪氨酸激酶（DDR1）在多個(gè)臟器的炎癥中發(fā)揮重要作用[50-51]，參與調(diào)節(jié)炎性細(xì)胞在病灶的聚集和浸潤(rùn)，可通過促進(jìn)炎性細(xì)胞對(duì)膠原基質(zhì)屏障的黏附和侵襲作用[52]，在多種炎癥性疾病的發(fā)生、進(jìn)展中發(fā)揮關(guān)鍵作用[53]。BBRH 在體內(nèi)外對(duì)幽門螺桿菌均有較強(qiáng)的抑制或殺滅作用，其機(jī)制可能為抑制細(xì)菌在胃上皮的附著和增殖[54]。此外，BBRH 還可抑制促炎因子iNOS 的表達(dá)[55]，減少炎性介質(zhì)的產(chǎn)生。

在炎性反應(yīng)和缺氧環(huán)境中，缺氧誘導(dǎo)因子-1α（HIF-1α）對(duì)此環(huán)境中的代謝、增殖、凋亡、炎性免疫反應(yīng)中發(fā)揮重要作用[56-58]。目前，HIF-1 與PI3K，MAPK，NF-κB 信號(hào)傳導(dǎo)通路之間聯(lián)系緊密[59-60]，多個(gè)促炎因子的轉(zhuǎn)錄和表達(dá)受HIF-1 的調(diào)控[61]，如HIF-1α 調(diào)節(jié)iNOS 表達(dá)升高后產(chǎn)生的NO 可促進(jìn)炎性細(xì)胞釋放TNF-α，放大炎性反應(yīng)。同時(shí)，TNF-α[62]，IL-1β[63]，ROS[64]，NO[65]、生長(zhǎng)因子[66]等致炎因子也能激活HIF-1α 的轉(zhuǎn)錄和表達(dá)，提示HIF-1 與炎性反應(yīng)過程密切相關(guān)[67]，并認(rèn)為HIF-1α 可能作為炎癥疾病治療的一個(gè)新靶點(diǎn)[68-69]。分子對(duì)接結(jié)果顯示，HIF-1α 與Tyr310，Arg383，Arg322 形成穩(wěn)定的氫鍵，提示HIF-1α 也可能在BBRH 治療胃炎的過程中起到非常重要的作用。

糖原合酶激酶3β（GSK-3β）是一種廣泛表達(dá)在真核生物中的一種多功能絲氨酸／蘇氨酸激酶，參與細(xì)胞分化、增殖、凋亡、代謝等多種細(xì)胞活動(dòng)過程[70-72]。GSK-3β 可參與調(diào)控炎癥信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路[73]，在炎癥性疾病的發(fā)生、發(fā)展中可選擇性地調(diào)控炎癥信號(hào)的轉(zhuǎn)導(dǎo)。在不同致病源刺激下，GSK-3β 可選擇性調(diào)控MyD88和TRF 依賴性的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路，正向調(diào)控促炎因子和IFN-γ 的產(chǎn)生，介導(dǎo)不同的炎性反應(yīng)[74-75]，當(dāng)GSK-3β活性受到抑制或其基因被敲除后，可下調(diào)IL-16，IL-12，TNF-α 等促炎因子的產(chǎn)生，上調(diào)IL-10 等抗炎因子的分泌[76-77]。對(duì)分子的對(duì)接結(jié)果分析發(fā)現(xiàn)，BBRH 與GSK-3β的Tyr134，Ser467，Phe201，Gln185 形成較穩(wěn)定的氫鍵，推測(cè)GSK-3β 也可能參與了BBRH 對(duì)胃炎的治療。

綜上所述，可通過調(diào)節(jié)多條生物通路共同作用抑制炎性因子的產(chǎn)生，促進(jìn)胃黏膜保護(hù)物質(zhì)的分泌，阻斷病菌遷移、侵襲、增殖、凋亡等過程干預(yù)胃炎的發(fā)生、發(fā)展。因此，推測(cè)BBRH 主要可通過修復(fù)胃黏膜、減輕炎癥損傷、消除幽門螺桿菌感染等功能發(fā)揮其治療胃炎的作用。

本研究中通過“藥物-靶點(diǎn)-疾病”關(guān)系網(wǎng)絡(luò)的構(gòu)建，獲得了BBRH 干預(yù)胃炎的重要靶點(diǎn)，其中BBRH 與部分靶點(diǎn)的作用已有文獻(xiàn)證實(shí)，在一定程度上確證了本研究的準(zhǔn)確性，其余靶點(diǎn)的作用尚需進(jìn)一步探討，并給予實(shí)驗(yàn)確證；初步解釋了BBRH 干預(yù)胃炎的作用是通過多層次調(diào)控實(shí)現(xiàn)的，為今后更加深入地闡明BBRH 治療胃炎的機(jī)制提供了理論依據(jù)和線索。