汪端 王安徽 傅文生

[摘要] 目的 研究非小細(xì)胞肺癌（NSCLC）患者血清程序性細(xì)胞死亡5（PDCD5）及增殖細(xì)胞核抗原（PCNA）的表達(dá)及與近期預(yù)后的關(guān)系。 方法 選取2017年2月～2018年2月安徽省宿州市立醫(yī)院診治的NSCLC患者79例作為癌癥組，以同期40名健康體檢者作為對(duì)照組。應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)檢測(cè)兩組血清PDCD5、PCNA的表達(dá)水平。分析NSCLC患者PDCD5、PCNA表達(dá)與臨床病理特征之間的關(guān)系。分析NSCLC患者PDCD5、PCNA不同表達(dá)水平與1年總生存期（OS）的關(guān)系。 結(jié)果 癌癥組血清PDCD5表達(dá)水平低于對(duì)照組，而PCNA表達(dá)水平高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P < 0.05）。血清PDCD5、PCNA表達(dá)與TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)（均P < 0.05）。血清PDCD5與PCNA表達(dá)呈顯著負(fù)相關(guān)（r = -0.621，P = 0.000）。低PDCD5表達(dá)患者1年OS低于高PDCD5表達(dá)患者（P < 0.05）;高表達(dá)PCNA患者1年OS低于低PCNA表達(dá)患者（P < 0.05）。 結(jié)論 NSCLC患者血清PDCD5表達(dá)降低，PCNA表達(dá)升高，二者與TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)，有希望成為新的NSCLC血清腫瘤標(biāo)志物。

[關(guān)鍵詞] 非小細(xì)胞肺癌;程序性細(xì)胞死亡5;增殖細(xì)胞核抗原;短期預(yù)后

[中圖分類號(hào)] R734.2? ? ? ? ? [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A? ? ? ? ? [文章編號(hào)] 1673-7210（2020）05（b）-0098-04

Relationship between serum PDCD5 and PCNA expression with clinicopathological characteristics and short-term prognosis in patients with non-small cell lung cancer

WANG Duan? ?WANG Anhui? ?FU Wensheng

Department of Cardiothoracic Surgery， Suzhou Municipal Hospital， Anhui Province， Suzhou? ?234000， China

[Abstract] Objective To study the expressions of programmed cell death 5 （PDCD5） and proliferating cell nuclear antigen （PCNA） in serum of patients with non-small cell lung cancer （NSCLC） and their relationship with the short-term prognosis. Methods From February 2017 to February 2018， 79 cases with NSCLC patients who diagnosed and treated in Suzhou Municipal Hospital of Anhui Province were selected as cancer group， and 40 healthy medical examinees in the same period were used as control group. Enzyme-linked immunosorbent assay was used to detect the expression of PDCD5 and PCNA in the serum of two groups. The relationship between PDCD5， PCNA expression and clinicopathological characteristics of NSCLC patients were analyzed. The relationship between different levels of PDCD5 and PCNA expressions and the 1-year overall survival （OS） rate in NSCLC patients were analyzed. Results The expression levels of PDCD5 in cancer group were lower than those in control group， while the expression levels of PCNA in cancer group were higher than those in control group， and the difference was statistically significant（P < 0.05）. The expressions of PDCD5 and PCNA in serum of the cancer group were related to TNM stage and lymph node metastasis （P < 0.05）. Serum PDCD5 was significantly negatively correlated with PCNA expression （r = -0.621， P = 0.000）. Patients with low PDCD5 expression had lower OS than patients with high PDCD5 expression for 1-year （P < 0.05）. The 1-year OS of patients with high PCNA expression was lower than that of patients with low PCNA expression （P < 0.05）. Conclusion The expression of serum PDCD5 of NSCLC patients is decreased， while the expression of PCNA is increased， which are related to the staging of TNM and lymph node metastasis， and are expected to become a new tumor marker in NSCLC serum.

[Key words] Non-small cell lung cancer; Programmed cell death 5; Proliferating cell nuclear antigen; Short-term prognosis

肺癌是人類常見的惡性腫瘤，全球每年新發(fā)病例數(shù)約180萬(wàn)，死亡例數(shù)約159萬(wàn)，占所有癌癥特異死亡例數(shù)的19%[1]。肺癌的治療方式包括手術(shù)、化療及分子靶向治療等，但中晚期肺癌患者復(fù)發(fā)率及轉(zhuǎn)移率仍較高，5年生存率低于55%[2]。肺癌中以非小細(xì)胞肺癌（NSCLC）最為常見，但由于患者早期無(wú)明顯臨床表現(xiàn)，診斷時(shí)多為中晚期，手術(shù)及放化療治療效果不佳[3]。因此，有必要深入研究NSCLC的發(fā)生發(fā)展機(jī)制，尋找新的有助于臨床診斷治療及評(píng)估預(yù)后的血清腫瘤標(biāo)志物。程序性細(xì)胞死亡5（PDCD5）基因位于19q13.11，該基因編碼蛋白在細(xì)胞凋亡期間表達(dá)升高，并且從細(xì)胞質(zhì)迅速轉(zhuǎn)移到細(xì)胞核。功能上，PDCD5通過(guò)抑制賴氨酸乙?；D(zhuǎn)移酶5蛋白酶體依賴性降解，參與調(diào)控DNA轉(zhuǎn)錄、損傷應(yīng)答和細(xì)胞周期控制[4]。近年來(lái)研究顯示[5]，腫瘤細(xì)胞中存在PDCD5異常表達(dá)的現(xiàn)象，并可作為腫瘤診斷、治療及預(yù)后標(biāo)志物。增殖細(xì)胞核抗原（PCNA）基因位于20p12.3，該基因編碼的蛋白質(zhì)存在于細(xì)胞核中，是DNA聚合酶δ的輔因子。該基因編碼的蛋白質(zhì)形成同源三聚體，并促進(jìn)DNA復(fù)制過(guò)程中前導(dǎo)鏈合成，DNA損傷時(shí)，該蛋白被泛素化并參與RAD6依賴的DNA修復(fù)途徑[6]。腫瘤發(fā)生時(shí)，腫瘤組織中PCNA表達(dá)水平升高，并促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的增殖及遷移等生物學(xué)行為，有可能成為判斷腫瘤預(yù)后的標(biāo)志物[7]。近年來(lái)有研究發(fā)現(xiàn)[8-9]，肺癌患者血清中PDCD5、PCNA存在異常表達(dá)，并可能有助于判斷腫瘤患者的預(yù)后。本研究通過(guò)檢測(cè)NSCLC患者血清中PDCD5、PCNA表達(dá)，分析其與臨床病理特征及短期預(yù)后的關(guān)系，初步探討兩者的臨床意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2017年2月～2018年2月安徽省宿州市立醫(yī)院（以下簡(jiǎn)稱“我院”）診治的NSCLC患者79例作為癌癥組。納入標(biāo)準(zhǔn)：①經(jīng)病理檢查確診為NSCLC;②均為首次診治;③臨床病理及隨訪資料完整。排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并有感染性疾病，免疫系統(tǒng)疾病等;②合并其他系統(tǒng)惡性腫瘤;③合并心肺等臟器功能不全;③有放化療等治療史。其中男43例，女36例;年齡43～62歲，平均（48.1±5.7）歲;病理類型：腺癌45例，鱗癌34例;腫瘤大小：≤5 cm 51例，>5 cm 28例;TNM分期：Ⅰ期21例，Ⅱ期24例，Ⅲ期23例，Ⅳ期11例。腫瘤分化程度：高分化20例，中分化26例，低分化33例;伴淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移44例，無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移35例。以同期40名健康體檢者作為對(duì)照組，男23例，女17例;年齡39～65歲，平均（47.6±5.5）歲。兩組性別、年齡一般資料比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P > 0.05），具有可比性。所有患者及家屬對(duì)本研究均知情同意并簽字，本研究經(jīng)我院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

1.2 方法

酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）雙抗體夾心法檢測(cè)兩組血清PDCD5、PCNA的表達(dá)水平。取癌癥組入院后、對(duì)照組體檢時(shí)清晨空腹12 h靜脈血5 mL，EDTA抗凝，靜置2 h后，5000 r/min離心10 min，離心半徑10 cm，分離上層血清，置于EP管中，-80℃保存。實(shí)驗(yàn)步驟嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書進(jìn)行，PDCD5試劑盒購(gòu)自武漢優(yōu)爾生有限公司（生產(chǎn)批號(hào)：20170119），PCNA試劑盒購(gòu)自上海艾博抗有限公司（生產(chǎn)批號(hào)：20170118）。PDCD5檢測(cè)范圍為7.8～5000.0 pg/mL，PCNA檢測(cè)范圍為150～10 000.0 pg/mL。

1.3 觀察指標(biāo)

①比較兩組血清PDCD5、PCNA表達(dá)水平;②分析癌癥組血清PDCD5、PCNA表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系;③分析血清PDCD5、PCNA表達(dá)的相關(guān)性;④癌癥組所有患者自出院之日起進(jìn)行隨訪，每月隨訪1次，以門診或電話方式進(jìn)行，隨訪12個(gè)月，隨訪內(nèi)容包括患者生存情況，隨訪截止至隨訪結(jié)束或患者的死亡情況。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 19.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，兩組間比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn);Pearson線性相關(guān)分析PDCD5與PCNA表達(dá)的相關(guān)性。組間生存率比較采用Kaplan-Meier生存曲線進(jìn)行評(píng)估，Log-rank檢驗(yàn)進(jìn)行比較。以P < 0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組血清PDCD5、PCNA表達(dá)水平比較

癌癥組血清PDCD5表達(dá)水平低于對(duì)照組，PCNA表達(dá)水平高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.05）。見表1。

2.2 血清PDCD5、PCNA表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系

血清PDCD5、PCNA表達(dá)水平與TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)（P < 0.05）。見表2。

2.3血清PDCD5、PCNA表達(dá)的相關(guān)性分析

血清PDCD5表達(dá)水平與PCNA表達(dá)水平呈顯著負(fù)相關(guān)（r = -0.621，P = 0.000）。見圖1。

2.4 血清PDCD5、PCNA表達(dá)水平與短期預(yù)后關(guān)系

至隨訪結(jié)束，中位隨訪時(shí)間7個(gè)月，死亡35例。以血清PDCD5的均數(shù)32.9 pg/mL為界，分為高PDCD5表達(dá)41例和低PDCD5表達(dá)38例，低PDCD5表達(dá)患者1年總生存期（OS）低于高PDCD5表達(dá)患者（χ2=4.697，P = 0.044）;以PCNA均數(shù)422.9為界，分為高PCNA表達(dá)40例和低PCNA表達(dá)39例，高PCNA表達(dá)患者1年OS低于低PCNA表達(dá)患者（χ2=6.311，P = 0.012）。見圖2。

3 討論

肺癌是最常見的惡性腫瘤，每年死亡的患者例數(shù)達(dá)150萬(wàn)[10]。NSCLC是最常見的肺癌類型，目前其治療方式主要包括手術(shù)及化療，隨著對(duì)NSCLC分子機(jī)制研究的深入，發(fā)現(xiàn)NSCLC中存在多種基因如表皮生長(zhǎng)因子受體基因的突變或重排，促進(jìn)了腫瘤的發(fā)生發(fā)展[11]，因而分子靶向藥物及免疫檢查點(diǎn)抑制劑的臨床應(yīng)用取得了良好的治療效果，但部分患者存在治療不敏感或耐藥的現(xiàn)象[12]。因此有必要深入研究NSCLC疾病的發(fā)生發(fā)展機(jī)制，尋找有意義的診斷治療及提示預(yù)后的血清腫瘤標(biāo)志物。

程序性細(xì)胞死亡又稱凋亡，是一種多階段、多種基因調(diào)控的細(xì)胞自我死亡的過(guò)程。細(xì)胞凋亡異常與炎癥、免疫及腫瘤等多種疾病的發(fā)生發(fā)展有關(guān)[13]。隨著分子生物學(xué)技術(shù)的發(fā)展，發(fā)現(xiàn)腫瘤中存在多種凋亡調(diào)控的基因如Bcl-2家族基因、FAS家族基因等表達(dá)失常的現(xiàn)象。PDCD5基因是近年來(lái)新發(fā)現(xiàn)的凋亡相關(guān)基因，在胃癌、結(jié)直腸癌等多種腫瘤中均存在異常表達(dá)，PDCD5的低表達(dá)促進(jìn)細(xì)胞增殖，其誘導(dǎo)細(xì)胞周期停滯在G2/M期，細(xì)胞凋亡能力減弱，進(jìn)而促進(jìn)腫瘤的增殖、凋亡等生物學(xué)行為[14]。本研究結(jié)果顯示，癌癥組血清PDCD5表達(dá)水平低于對(duì)照組，提示NSCLC患者血清PDCD5表達(dá)下調(diào)，其機(jī)制可能是與調(diào)控PDCD5的上游轉(zhuǎn)錄因子表達(dá)異常有關(guān)。有研究[15]顯示，腫瘤中正向調(diào)控PDCD5的上游轉(zhuǎn)錄因子PITX1表達(dá)降低，導(dǎo)致PDCD5表達(dá)水平下降。本研究結(jié)果顯示，NSCLC患者血清PDCD5表達(dá)與TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)。高臨床分期、伴淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者血清中PDCD5表達(dá)水平較低，其原因可能是PDCD5是p53、Bcl-2、BAX等抑癌基因的重要上游調(diào)節(jié)因子，腫瘤發(fā)生時(shí)，PDCD5表達(dá)降低，導(dǎo)致p53、Bcl-2、BAX等抑癌基因表達(dá)水平下降，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的增殖，細(xì)胞周期進(jìn)程和凋亡，導(dǎo)致腫瘤分期升高[16]。進(jìn)一步分析發(fā)現(xiàn)，低PDCD5表達(dá)患者1年OS明顯低于高表達(dá)患者，提示檢測(cè)血清PDCD5水平有助于反映NSCLC患者的短期預(yù)后情況，血清PDCD5有可能成為判斷NSCLC患者短期預(yù)后的腫瘤標(biāo)志物。

PCNA是重要的真核生物復(fù)制輔助因子，在DNA復(fù)制、修復(fù)、細(xì)胞周期和細(xì)胞凋亡中起著至關(guān)重要的作用。在DNA損傷修復(fù)和DNA復(fù)制過(guò)程中，PCNA與核酸內(nèi)切酶XPG結(jié)合，促進(jìn)新的DNA片段的重新合成[17]。近年來(lái)發(fā)現(xiàn)，多種腫瘤中PCNA表達(dá)水平升高，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的的惡性進(jìn)展[18]。本研究結(jié)果顯示，NSCLC患者血清PCNA表達(dá)水平明顯高于對(duì)照組，提示NSCLC患者血清PCNA表達(dá)水平升高，其機(jī)制可能與PCNA的轉(zhuǎn)錄后表達(dá)調(diào)控異常有關(guān)。有研究[19]報(bào)道，肺癌發(fā)生時(shí)腫瘤中微小RNA（miRNA）-363-3p表達(dá)下調(diào)，導(dǎo)致其結(jié)合到PCNA信使RNA的3′非編碼區(qū)減少，抑制PCNA表達(dá)能力，使PCNA水平升高。本研究結(jié)果顯示，NSCLC患者血清PCNA表達(dá)與TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)。高臨床分期、伴淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者血清中PCNA表達(dá)水平較高，其機(jī)制可能是PCNA表達(dá)升高后，其與p21結(jié)合以促進(jìn)細(xì)胞周期的進(jìn)程，并與生長(zhǎng)抑制劑1（ING1）相互作用以抑制細(xì)胞凋亡的發(fā)生[20]。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，高PCNA表達(dá)患者1年OS明顯低于高低達(dá)組，提示血清PCNA水平能反映患者的短期預(yù)后，PCNA有可能作為判斷患者預(yù)后的腫瘤標(biāo)志物。

此外，本研究結(jié)果顯示，NSCLC患者血清PDCD5表達(dá)與PCNA表達(dá)呈顯著負(fù)相關(guān)，目前兩者之間相互作用關(guān)系尚不明確，可能與兩者受共同miRNA調(diào)控有關(guān)，有研究[15，21]報(bào)道，miR-19表達(dá)上調(diào)后促進(jìn)PCNA表達(dá)的同時(shí)，直接或間接抑制PDCD5的表達(dá)。

綜上所述，NSCLC患者血清PDCD5表達(dá)降低，而PCNA表達(dá)升高，兩者與NSCLC腫瘤分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)，有望成為新的NSCLC診斷、治療及提示預(yù)后的腫瘤標(biāo)志物，但兩者的臨床意義有待進(jìn)一步研究。

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（收稿日期：2020-02-04? 本文編輯：劉明玉）