田嘉銘 于小紅 王銀月 王 旭 王治寶 王 金 盧金銘

1.河北北方學(xué)院藥學(xué)系，張家口，075000，中國

2.河北省神經(jīng)藥理學(xué)重點實驗室，張家口，075000，中國

3.河北建筑工程學(xué)校，保定，071000，中國

糖平煎由黃芪（14 g）、黃連（6 g）、麩炒蒼術(shù)（10 g）、元參（10 g）、山藥（10 g）、荔枝核（6 g）、丹皮（6 g）、桑葉（8 g）、僵蠶（10 g）等多種藥材組成［1］，具有降糖降脂、健脾疏肝、益氣淡滲、清熱燥濕、活血涼血等作用［2］。目前關(guān)于糖平煎的研究主要集中在藥效及降糖機理方面［3-5］，而關(guān)于質(zhì)量控制方面的研究卻少有報道。糖平煎復(fù)方中蒼術(shù)具有健脾益氣、燥濕化痰之功，對于表現(xiàn)為“脾虛、肝郁、痰淤”的2 型糖尿病具有重要意義。蒼術(shù)酮為蒼術(shù)的主要有效成分之一，本實驗通過研究，建立了氣相色譜內(nèi)標法測定糖平煎中蒼術(shù)酮含量的方法，為糖平煎的質(zhì)量控制提供了依據(jù)。

1 儀器與試藥

GC-7900 氣相色譜儀及配套設(shè)備，Techcomp 天美有限公司；D-7900 色譜工作站，氫火焰離子檢測器（flame ionization detector，F(xiàn)ID）；蒼術(shù)酮標準品，天津一方科技有限公司，批號AB026A；萘，上海研拓生物科技有限公司；乙醚，天津市化學(xué)試劑二廠，批號 120904；麩炒蒼術(shù)，張家口張恒中藥飲品有限公司，批號 100701；黃芪，河北祁新中藥顆粒飲片有限公司，批號20 140312；玄參，張家口張恒中藥飲品有限公司，批號 100901；山藥，張家口張恒中藥飲品有限公司，批號 110501；丹皮、黃連、桑葉、僵蠶、荔枝核購自同仁堂。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱：PEG-20M 毛細管色譜柱（30 m×0.25 mm× 0.25 μm）；進樣口溫度290 ℃，檢測器溫度300 ℃。柱升溫程序：起始溫度150 ℃，保持5 min，以2 ℃·min-1升溫至164 ℃，保持1 min，再以3 ℃·min-1升溫至200 ℃，保持2 min。載氣為氮氣，純度≥99.999%，流速1 mL·min-1；分流進樣，分流比40∶1，進樣量1 μL。分別取對照品、供試品溶液在前述色譜條件下進行氣相檢測，萘的出峰時間為3.54 min，蒼術(shù)酮出峰時間為15.91 min，與相鄰色譜峰分離度較好，樣品運行時間為28 min，結(jié)果見Fig.1。

Fig.1 Chromatogram of reference solution and sample solution a Naphthalene b Atractylone

2.2 標準溶液配制

精密稱取蒼術(shù)酮對照品10.5 mg，置于10 mL容量瓶中，乙醚溶解并稀釋定容至刻度，得濃度為1.05 mg·mL-1的蒼術(shù)酮對照品儲備液。

精密稱定44.0 mg 萘，置于5 mL 容量瓶中，乙醚溶解并稀釋定容至刻度，作為內(nèi)標儲備液。

精密量取對照品儲備液0.1、0.2、0.5、1.0、2.0 mL分別置于25 mL 容量瓶中，隨后分別加入內(nèi)標儲備液0.5 mL，乙醚定容至刻度，配成含有內(nèi)標（176 μg·mL-1）的系列對照品溶液。

2.3 供試品溶液制備

取已干燥粉碎的糖平煎粗粉5.0 g，置于具塞錐形瓶中，加入正己烷100 mL（料液比為1∶20），稱重，超聲提取30 min，冷卻至室溫，補足缺失質(zhì)量，上清液過0.22 μm 微孔濾膜，精密吸取續(xù)濾液2 mL 置于10 mL容量瓶中，加入內(nèi)標儲備液0.5 mL，乙醚定容至刻度，搖勻，即得。

2.4 方法學(xué)考察

2.4.1 線性關(guān)系、檢出限和定量限

取“2.2”項下系列蒼術(shù)酮標準溶液，按“2.1”項下色譜條件進樣測定，以蒼術(shù)酮與內(nèi)標萘峰面積比值（Y）對蒼術(shù)酮濃度（C）進行線性回歸，得線性回歸方程為：Y=1.2687X-201.624，r=0.9997，蒼術(shù)酮在4.2～84.0 μg·mL-1范圍內(nèi)，線性關(guān)系良好。逐級稀釋標準溶液，以信噪比（signal-to-noise ratio，S/N）≥3 計算檢測限為0.42 μg·mL-1，以信噪比（S/N）≥10 計算定量限為1.40 μg·mL-1。

2.4.2 精密度實驗

取同一對照品溶液按“2.1”項下色譜條件下連續(xù)進樣6 次，每次1 μL，計算蒼術(shù)酮峰面積與內(nèi)標峰面積比值的相對標準偏差（relative standard deviation，RSD）為0.86%，表明儀器精密度良好。

2.4.3 重復(fù)性考察

取糖平煎樣品6 份，按“供試品溶液制備”項下方法配制供試品溶液，按“2.1”項下色譜條件分別進樣1 μL，計算蒼術(shù)酮含量RSD 值為1.24%，表明方法重復(fù)性良好。

2.4.4 穩(wěn)定性考察

取糖平煎樣品6 份，按“供試品溶液制備”項下方法配制供試品溶液，分別于0、1、2、4、6 h 按“2.1”項下色譜條件進樣1 μL，計算蒼術(shù)酮含量RSD 值為1.37%，表明樣品溶液在室溫下放置6 h 穩(wěn)定。

2.4.5 回收率實驗

取已測含量的糖平煎粉末9 份，每份4 g，分別精密加入對照品儲備液適量，然后按“2.3”項制備供試品溶液，制成加樣回收率供試液，按“2.1”項下色譜條件進樣，測定并計算加樣回收率，結(jié)果見Tab.1。

Tab.1 Sample recovery test

2.5 樣品測定

分別取不同時期配制的糖平煎樣品5 份，按“供試品溶液制備”項下方法配制供試品溶液，按“2.1”項下色譜條件進樣1 μL，計算蒼術(shù)酮含量為（1.13±0.03）mg·g-1。

3 討論

影響糖平煎揮發(fā)油提取物中蒼術(shù)酮與其它組分分離的主要因素有進樣口溫度、升溫程序、色譜柱流量、分流比等參數(shù)。實驗發(fā)現(xiàn)，進樣口溫度過低時，色譜峰有拖尾現(xiàn)象，升高進樣口溫度，則峰形較好。程序升溫速率過快時，樣品中蒼術(shù)酮與其它成分難以有效分離，當(dāng)升溫速率降為2 ℃·min-1，能達到較滿意的分離度。分別選擇分流比為10∶1、20∶1、30∶1 和40∶1 進樣，計算檢測限（10 倍基線噪聲）分別為0.98、1.06、1.22 和1.40 μg·mL-1，分流比越大時，雜質(zhì)峰雖也相應(yīng)提高，但響應(yīng)值提高更多，綜合考慮，本實驗選擇分流比為40∶1。

與外標法相比，內(nèi)標法可以減少由于標準曲線擬合和測量重復(fù)性引入的不確定度，可以減少系統(tǒng)誤差，具有更高的精密度與準確度［6-8］。本實驗建立的方法簡便快捷，適用性和專屬性良好，有利于糖平煎復(fù)方的質(zhì)量控制。