楊涵，黃學惠 ，鄧繼紅，張雯，楊廷仙

（1 昆明市婦幼保健院，云南 昆明；2 昆明醫(yī)科大學第一附屬醫(yī)院，云南 昆明）

0 引言

卵巢癌是影響女性健康的重大惡性腫瘤之一，且死亡率在女性惡性腫瘤中最高[1]。骨橋蛋白（osteopontin，OPN）是一種含精氨酸- 甘氨酸- 天冬氨酸三肽序列的分泌型磷酸化糖蛋白，廣泛分布于胃腸、卵巢、腎臟等組織細胞中，其與腫瘤細胞的生長、浸潤及轉移有很大的關系[2,3]，國內外大量研究表明[4-7]，在病理狀態(tài)時(免疫性疾病、炎癥和腫瘤)OPN表達增強。本研究為探索OPN 基因與卵巢上皮性腫瘤的相關性，使用的方法為免疫組化學SABC，分別對正常的卵巢組織、良性卵巢上皮性腫瘤組織及卵巢上皮性癌組織中的OPN進行檢測，分析OPN 與卵巢上皮性癌組織學類型、臨床分期及年齡之間存在的相關性，現(xiàn)將研究情況報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

隨機抽取昆明醫(yī)科大學第一附屬醫(yī)院中留存的病理檔案82 例，均為卵巢上皮組織蠟片，時間均在2010 年9 月至2011 年9 月，將82 例分為三個小組：（1）惡性組：共有24 例，均經(jīng)過手術及病理確診為原發(fā)性上皮性卵巢癌，漿液性囊腺癌最多，其次為粘液性囊腺癌，再次為宮內膜樣癌；（2）良性組：共有28 例，均經(jīng)過手術及病理證實，腫瘤類型為漿液性囊腺瘤及粘液性囊腺瘤各占一半；（3）正常組：共有30 例，均經(jīng)過病理證實。所有病例均為首次治療，均無其他部位腫瘤、心臟病、高血壓等疾病。將所有的切片進行HE 染色，由2 名有豐富工作經(jīng)驗的醫(yī)生將合適的切片挑選出來進行染色處理，使用的方法為免疫組化學SABC 法。

1.2 免疫組化SABC 法

OPN 基因單克隆抗體購于美國Abcam 公司（貨號：ab91655），免疫組化學染色SABC 試劑盒購于英國Novocastra 公司。按照SABC 試劑盒說明書，OPN 抗體稀釋1:100 進行操作，檢測OPN 基因的表達情況。

1.3 評分標準

采用雙盲法，2 名有經(jīng)驗的病理診斷醫(yī)師同時進行診斷。將PBS 液作為陰性對照，并參考相關的文獻[8]：OPN 基因陽性呈現(xiàn)出的是胞漿顏色的變化，即為棕色及黃褐色。在高倍視野下（×200），隨機選取5 個不同的視野來統(tǒng)計切片視野中細胞總數(shù)和核/漿陽性細胞數(shù)，計算陽性率的方法為陽性細胞數(shù)與總細胞數(shù)之比，根據(jù)患者陽性細胞所占比例來進行計分統(tǒng)計：（1）陽性細胞率≤5%為0 分；（2）陽性細胞率6%-25% 為1 分；（3）陽性細胞率26%-50% 為2 分；（4）陽性細胞率＞51%為3 分。染色強弱程度計分：（1）陰性1 分；（2）弱染色2 分；（3）中等強度染色3 分；（4）強染色4 分。每張片著色程度得分與著色細胞百分率之積為最后的得分。通過得分來判定，當分數(shù)為0-1 分為（-），＞2 分（+）。統(tǒng)計分析時（-）表示陰性表達，（+）表示陽性表達。

1.4 統(tǒng)計學分析

采用SPSS 18.0 軟件進行統(tǒng)計學分析，計數(shù)資料采用（%）表示，行χ2檢驗，P＜0.05 表示差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 基本情況

本實驗中正常卵巢組織的平均年齡為（40.4±9.4）歲，良性卵巢上皮性腫瘤組織的平均年齡為（40.0±11.5）歲，卵巢上皮性癌組織的平均年齡為（38.8±11.0）歲，組間差異無統(tǒng)計學差異（P＞0.05）；24 例卵巢上皮性癌中將其進行分期，其中有8 例患者為I 期，9 例患者為II 期，7 例患者為III 期，前兩者之間的例數(shù)分布差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05），見表1。

表1 基本情況

2.2 OPN 基因在不同類型上皮性卵巢腫瘤組織中的表達

OPN 在正常組、良性組和惡性組的陽性率分別為10.00%、7.14%、62.50%。見表2。

表2 OPN 基因在不同類型上皮性卵巢腫瘤組織中的表達

2.3 OPN 基因在不同類型上皮性卵巢癌（EOC）組織中的表達

OPN 在EOC 組織表達陽性率分別為：漿液性囊腺癌為70.00%，粘液性囊腺癌為62.50%，惡性宮內膜樣癌為50.00%；不同病理類型EOC 的陽性率無統(tǒng)計學差異（P＞0.05），但均顯著高于良性卵巢上皮性腫瘤組織，差異具有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），見表3。

表3 OPN 在不同類型卵巢上皮性癌組織中的表達

2.4 OPN 基因表達與EOC 臨床特征的關系

（1）OPN 在早期EOC（Ⅰ-Ⅱ期）和晚期（Ⅲ期）患者組織中的陽性表達率分別為47.06%，100%，組間具有統(tǒng)計學差異（P＜0.05），其陽性表達均隨國際婦產(chǎn)科聯(lián)盟（FIGO 2000年）臨床分期增高而增強；（2）OPN 表達與EOC 患者年齡無統(tǒng)計學差異（P＞0.05）。

3 討論

OPN 最初是從骨質中分離出來的，是一種重要的細胞外基質的組成成分[9]。在本次研究中得出的結果為OPN 基因在卵巢上皮性癌組、良性卵巢上皮性腫瘤組和正常卵巢組織組中的陽性表達率分別為62.50%、7.14%、10.00%，OPN 明顯表達于過度細胞，其在正常的細胞中呈現(xiàn)出低表達或者是不呈現(xiàn)表達，這就表明OPN 的過度表達能夠成為良惡性卵巢上皮性腫瘤鑒別重要的免疫標記物。通過進一步的分析得出：在EOC 的臨床分期中OPN 基因呈現(xiàn)出的陽性表達率間的差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），在臨床晚期的OPN 基因有100%的呈現(xiàn)出高表達，只有47.06%臨床早期（Ⅰ-Ⅱ期）的腫瘤呈現(xiàn)出過度表達，同樣可說明OPN 基因表達程度的檢測可能作為判斷EOC 病情的指標。這一結論符合大多數(shù)研究[10,11]：OPN 在原發(fā)性及復發(fā)性的卵巢癌癥患者中均有高表達。因此，OPN 有助于EOC 的診斷以及病情檢測，但是在不同病理類型上皮性卵巢癌組間和不同年齡患者中OPN 表達沒有統(tǒng)計學差異（P＞0.05），此結果與Bhattacharya R 等研究存在差異[12]，這是否與樣本例數(shù)不夠有關，尚需進一步研究證實。

綜上所述，OPN 基因對于良惡性卵巢上皮性腫瘤的鑒別有一定的臨床意義，可作為鑒別的重要免疫標記物；其呈現(xiàn)出的過表達與卵巢癌國際婦產(chǎn)科聯(lián)盟（FIGO 2000 年）臨床分期有關，隨著臨床分期的不斷增高，OPN 表達陽性率也越來越高，在一定程度上反映了EOC 的惡性程度。