王云 李平平 高振珅 張曉萍 王振 周宏

中圖分類號 R944.2+4 文獻標志碼 A 文章編號 1001-0408（2020）09-1054-08

DOI 10.6039/j.issn.1001-0408.2020.09.07

摘 要 目的：制備白屈菜紅堿（CHE）固體分散體（SD），優(yōu)化其處方工藝，并對所制產(chǎn)品進行表征和體外抗氧化活性考察。方法：采用紫外分光光度法測定SD中CHE的含量;在單因素試驗的基礎(chǔ)上，以產(chǎn)品收率為指標，以制備方法、載體材料種類、載體比例（藥物-載體材料質(zhì)量比）為考察因素，采用L9（34）正交試驗優(yōu)化SD的處方工藝并進行驗證。在檢測溶解度和累積溶出度的基礎(chǔ)上，采用熱分析法、X-射線衍射法和掃描電子顯微鏡等技術(shù)對產(chǎn)品進行物相表征;以抗壞血酸為陽性對照，采用1，1-二苯基-2-三硝基苯肼法（DPPH）測定產(chǎn)品的體外抗氧化活性。結(jié)果：CHE檢測質(zhì)量濃度的線性范圍為2.4～5.6 μg/mL，定量限、檢測限分別為0.066 9、0.022 1 μg/mL;精密度、穩(wěn)定性、重復(fù)性試驗的RSD均小于2%，加樣回收率為97.50%～99.25%（RSD<1%，n=3）。最優(yōu)制備工藝是以聚乙二醇6000（PEG 6000）為載體、載體比例為1 ∶ 3，采用溶劑法制備。按最優(yōu)工藝制得3批CHE-PEG-SD，驗證試驗結(jié)果顯示，其在15 min時的累積溶出度為（61.72±0.67）%，收率為（99.04±0.83）%。表征結(jié)果顯示，制成CHE-PEG-SD后，其溶解度（3.725 mg/mL）和累積溶出度（61.72%，15 min）均高于CHE原料藥[0.098 mg/mL，6.24%（180 min）];其吸熱峰、晶體吸收峰均較原料藥和載體有所移動甚至消失，CHE以非晶態(tài)均勻分散于載體中。體外抗氧化試驗結(jié)果顯示，不同質(zhì)量濃度的CHE-PEG-SD均具有一定的DPPH自由基清除能力，半數(shù)抑制濃度為0.124 mg/mL，但高于抗壞血酸的0.041 mg/mL。結(jié)論：所建含量測定方法簡便、準確;優(yōu)化的SD處方工藝穩(wěn)定、可行;所制CHE-PEG-SD的溶解度增大，體外溶出增多，且具有一定的體外抗氧化活性。

關(guān)鍵詞 白屈菜紅堿;固體分散體;工藝優(yōu)化;體外溶出;表征;抗氧化活性

Preparation of Chelerythrine Solid Dispersion and Study on Its Physicochemical Properties and Antioxidant Activity

WANG Yun1，2，3，LI Pingping1，3，4，GAO Zhenshen1，ZHANG Xiaoping1，3，WANG Zhen1，ZHOU Hong3，5，6（1. College of Pharmacy， Linyi University， Shandong Linyi 276005， China; 2. College of Life Science and Biopharmaceutics， Shenyang Pharmaceutical University， Liaoning Benxi 117004， China; 3. Shandong Fuyang Energy Conservation Technology Co.， Ltd.， Shandong Linyi 276005， China; 4. Dept. of Pharmaceutical Engineering， College of Chemistry and Pharmacy， Guangxi Normal University， Guangxi Guilin 541004， China; 5. College of Chemistry and Molecular Engineering， Qingdao University of Science and Technology， Shandong Qingdao 266042， China; 6. Key Laboratory of Optic-electric Sensing and Analytical Chemistry for Life Science， Ministry of Education， Shandong Qingdao 266042， China）

ABSTRACT? ?OBJECTIVE： To prepare Chelerythrine （CHE） solid dispersion （SD）， optimize the formulation technology， characterize its preparation and investigate its in vitro antioxidant activity. METHODS： The content of CHE in SD was determined by UV spectrophotometry. Based on single factor tests， using the product yield as index， using preparation method， carrier material type， carrier material proportion （drug-carrier material mass ratio） as factors， the formulation technology of SD was optimized by L9（34） orthogonal test and validated. Based on solubility and accumulative dissolution determination， the product was characterized with thermal analyssis， X-ray diffraction and scanning electron microscope. Using ascorbic acid as positive control， in vitro antioxidant activity of the product was determined by DPPH method. RESULTS： The linear range of CHE was 2.4-5.6 μg/mL; quantitation limit and detection limit were 0.066 9， 0.022 1 μg/mL; RSDs of precision， stability and reproducibility tests were all lower than 2%; recoveries were 97.50%-99.25%（RSD<1%，n=3）. The optimal preparation technology included using PEG 6000 as carrier material， carrier material ratio of 1 ∶ 3， prepared by solvent method. Three batches of CHE-PEG-SD were prepared. Verification test results showed that the accumulative dissolution of CHE-PEG-SD was （61.72±0.67）% at 15 min， and the yield was （99.04±0.83）%. The results of characterization showed that after CHE-PEG-SD prepared， its solubility （3.725 mg/mL） and accumulative dissolution （61.25%， 15 min） were higher than CHE raw material [0.098 mg/mL， 6.24% （180 min）]. The endothermic peak and crystal absorption peak moved or even disappeared compared with raw material and the carrier material， and CHE was uniformly dispersed in the carrier material as an amorphous state. Results of in vitro antioxidation test showed that different concentration of CHE-PEG-SD showed certain ability of DPPH free radical scavenging， and the IC50 was 0.124 mg/mL， higher than 0.041 mg/mL of ascorbic acid. CONCLUSIONS： Established content determination method is simple and accurate. The optimal SD formulation technology is stable and feasible. The solubility of prepared CHE-PEG-SD increases， and the dissolution in vitro increases， showing certain in vitro oxidation resistance.

KEYWORDS? ?Chelerythrine; Solid dispersion; Technology optimization; Dissolution in vitro; Characterization; Antioxidant activity

白屈菜紅堿（Chelerythrine，CHE）是一種苯并菲啶型生物堿，主要存在于白屈菜、博落回、飛龍掌血、血水草等藥用植物中[1]。研究表明，CHE具有抑菌[2-4]、抗乙型肝炎病毒[5]、抗炎[6-7]、抑制腫瘤[1，8-12]等多種生物活性。但由于該化合物溶解度極低，使得其應(yīng)用受到了一定限制[13]。由此可見，改善CHE的理化性質(zhì)、提高藥物溶解度和溶出速率并研發(fā)相關(guān)制劑對CHE的進一步應(yīng)用具有積極的意義。

目前，有關(guān)CHE劑型的報道涉及明膠微球[14]、磁性納米殼聚糖微球[15]、口服脂質(zhì)體[16]、脂質(zhì)體溫敏凝膠[17]、聚氰基丙烯酸丁酯納米粒[18]、復(fù)合磁性溫敏凝膠[19]等。固體分散體（Solid dispersion，SD）是利用制劑技術(shù)使藥物以固體溶液、微晶或無定型狀態(tài)高度分散在載體中所形成的分散體系。與其他劑型相比，SD制備方法簡單，且藥物粒徑更小、表面自由能更大，故可更顯著地提高難溶性藥物的溶解度、溶出度和生物利用度[20];此外，SD既可作為藥物最終制劑產(chǎn)品，也可作為制劑中間體，在制藥工業(yè)中應(yīng)用廣泛[21-22]?；诖?，本研究以聚乙二醇（PEG）、聚乙烯吡咯烷酮（PVP）、泊洛沙姆為載體材料，將CHE制備成固體分散體（CHE-SD），并篩選其處方和制備方法;在考察其溶解度、體外溶出度的基礎(chǔ)上，采用熱分析法、X射線衍射法（XRD）和掃描電子顯微鏡（SEM）等方法對所得CHE-SD進行表征，并初步評價其體外抗氧化活性，旨在為CHE新制劑的進一步研發(fā)提供參考。

1 材料

1.1 儀器

TU-1810型紫外-可見分光光度計（北京普析通用儀器有限責(zé)任公司）;DF-1型集熱式磁力攪拌器（江蘇金壇金城國勝實驗儀器廠）;AUY 220型電子分析天平（昆山規(guī)矩儀器科技有限公司）;KQ-500B型超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）;DZF-6021型真空干燥箱（上海一恒科技有限公司）;TGA 2型熱分析儀（瑞士Mettler Toledo公司）;NovaTM Nano型SEM（美國FEI公司）;D8 Advance型全自動SEM（德國Bruker公司）。

1.2 藥品與試劑

CHE原料藥（長沙上禾生物科技有限公司，批號：STA-161103003，純度：85%）;CHE對照品（上海融禾醫(yī)藥科技發(fā)展有限公司，批號：B20052，純度：>98%）;PEG 6000、PVP K30（國藥集團化學(xué)試劑有限公司）;泊洛沙姆127、188（德國BASF公司）;1，1-二苯基-2-三硝基苯肼（DPPH，美國Sigma公司，純度：>97%）;抗壞血酸（天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司，純度：>99.7%）;無水乙醇等其余試劑均為分析純，水為蒸餾水。

2 方法與結(jié)果

2.1 CHE-SD的制備

采用不同方法制備CHE-SD。

2.1.1 溶劑法

將CHE原料藥與載體材料按處方比例混勻，加入適量無水乙醇使其溶解，置于60 ℃水浴中，充分攪拌，混勻后蒸發(fā)除去溶劑。將殘渣置于普通干燥器中干燥過夜，取出，即得。

2.1.2 熔融法

將適量載體材料置于80 ℃水浴中，完全熔化后，按處方比例加入CHE原料藥適量，充分攪拌至完全熔融。將上述混合物倒入預(yù)冷的燒杯中，于冰浴中劇烈攪拌至完全固化，置于普通干燥器中干燥過夜，取出，即得。

2.1.3 研磨法

按處方比例精密稱取CHE原料藥與載體材料，置于研缽中，均勻研磨，混合充分后，置于普通干燥器中干燥過夜，取出，即得。

2.1.4 溶劑熔融法

取CHE原料藥和適量無水甲醇，于60 ℃下超聲（功率：250 W，頻率：40 kHz，下同），待藥物溶解后，按處方比例加入熔融的載體材料，混勻，于80 ℃下蒸干溶劑。將殘渣冷卻、固化，置于普通干燥器中干燥過夜，取出，即得。

2.2 CHE定量分析

采用紫外分光光度法檢測CHE的質(zhì)量濃度。

2.2.1 溶液的制備

精密稱取CHE對照品40 mg，置于100 mL量瓶中，加無水乙醇溶解并定容，得質(zhì)量濃度為400 μg/mL的對照品貯備液;取上述貯備液1 mL，置100 mL量瓶中，用無水乙醇稀釋并定容，即得4 μg/mL的CHE對照品溶液。另取“2.1”項下所得CHE-SD適量（約相當(dāng)于CHE 40 mg），置于100 mL量瓶中，加無水乙醇約70 mL，超聲處理15 min使其充分溶解，冷卻至室溫后用無水乙醇定容，搖勻，用干燥濾紙濾過;精密量取續(xù)濾液1 mL，置于100 mL量瓶中，用無水乙醇稀釋并定容，即得供試品溶液。

2.2.2 測定波長的選擇

取對照品溶液適量，在200～400 nm波長范圍內(nèi)掃描。結(jié)果，CHE在282 nm波長處有最大吸收，故將其作為定量分析的檢測波長，詳見圖1。

2.2.3 方法學(xué)考察

（1）專屬性：按處方比例精密稱取載體材料、CHE對照品、CHE原料藥各適量，先后按“2.1.1”（以該法為例，下同）、“2.2.1”項下方法制得不含CHE的空白載體溶液、CHE對照品+空白載體溶液（CHE質(zhì)量濃度為5.4 μg/mL）、CHE-SD供試品溶液，并同法制得不含載體和CHE的空白對照溶液。取上述溶液各適量，于282 nm波長處掃描。結(jié)果，空白載體溶液和空白對照溶液在282 nm波長處均無吸收，而CHE+空白載體溶液和CHE-SD供試品溶液在此波長處均有最大吸收，且不受輔料和空白對照的干擾，提示本方法專屬性良好，詳見圖2。

（2）線性關(guān)系：精密量取“2.2.1”項下CHE對照品貯備液60、80、100、120、140 μL，分別置于10 mL量瓶中，用無水乙醇稀釋至刻度，得CHE質(zhì)量濃度分別為2.4、3.2、4.0、4.8、5.6 μg/mL的標曲溶液，于282 nm波長處測定吸光度。以待測物吸光度（A）為縱坐標、質(zhì)量濃度（c）為橫坐標進行線性回歸，得回歸方程為A=0.143 2c+0.010 7（R 2=0.994 9），CHE檢測質(zhì)量濃度的線性范圍為2.4～5.6 μg/mL。

（3）檢測限與定量限：取“2.2.1”項下CHE對照品貯備液適量，以無水乙醇倍比稀釋，分別按信噪比3 ∶ 1、10 ∶ 1計算檢測限和定量限。結(jié)果，CHE的檢測限、定量限分別為0.022 1、0.066 9 μg/mL。

（4）精密度試驗：取“2.2.1”項下CHE對照品貯備液適量，以無水乙醇分別配制成低、中、高質(zhì)量濃度（2.4、3.0、3.6 μg/mL）的對照品溶液，各溶液均連續(xù)測定6次，記錄吸光度值，考察日內(nèi)精密度;連續(xù)測定3 d，考察日間精密度。結(jié)果，低、中、高質(zhì)量濃度溶液吸光度的日內(nèi)、日間RSD分別為0.37%、0.39%、0.38%（n=6）和0.57%、0.59%、0.55%（n=18），均小于2%，表明儀器精密度良好。

（5）重復(fù)性試驗：按“2.1.1”項下方法制備CHE-SD，并按“2.2.1”項下方法制備供試品溶液，取同一份上述供試品溶液于282 nm波長處重復(fù)測定6次，按外標法計算其質(zhì)量濃度（cx）：cx=（AX/AR）×cR（式中，cx、cR分別為供試品溶液、對照品溶液質(zhì)量濃度，AX、AR分別為供試品溶液、對照品溶液的吸光度）。以質(zhì)量濃度換算成含量（X，%）：X=（cx×10/m）×100%（式中，X為CHE-SD含量，m為CHE-SD質(zhì)量，10為稀釋倍數(shù)）。結(jié)果，CHE平均含量為33.27%，RSD為0.55%（n=6），表明方法重復(fù)性好。

（6）加樣回收率試驗：按“2.1.1”項下方法制備CHE- SD，并按“2.2.1”項下方法制備供試品溶液。取上述供試品溶液各5 mL，共9份，分別置于10 mL量瓶中，分別精密加入“2.2.1”項下對照品貯備液30、50、70 μL（每種體積各3份），以無水乙醇定容，得低、中、高質(zhì)量濃度溶液，于282 nm波長處檢測各溶液吸光度并計算加樣回收率。結(jié)果，低、中、高質(zhì)量濃度溶液的平均加樣回收率分別為98.33%、98.03%、98.80%，RSD分別為0.83%、0.48%、0.53%（n=3），詳見表1。

（7）穩(wěn)定性試驗：按“2.1.1”項下方法制備CHE-SD，并按“2.2.1”項下方法制備供試品溶液，分別于室溫放置0、1、2、4、8、12、24 h時測定其吸光度。結(jié)果，其吸光度的RSD<2%（n=7），表明供試品溶液在室溫放置24 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

（8）樣品含量測定：按“2.1”項下不同方法制備CHE-SD，并按“2.2.1”項下方法制備供試品溶液。取供試品溶液和“2.2.1”項下CHE對照品溶液（5.4 μg/mL）適量，于282 nm波長處檢測其吸光度，按“2.2.3（5）”項下外標法計算CHE的質(zhì)量濃度，并換算成含量。

2.3 體外溶出度的測定

采用2015年版《中國藥典》（四部）通則“特征檢查法”中的溶出度與釋放度測定法——漿法[23]檢測。設(shè)定轉(zhuǎn)速為（100±1）r/min，水浴溫度為（37.0±0.5）℃，以150 mL水為溶出介質(zhì)。精密稱取各待測樣品，置于溶出杯中（實際量取的體積與規(guī)定體積的偏差應(yīng)在±1%范圍之內(nèi)）。自待測樣品接觸溶出介質(zhì)時開始計時，分別于2.5、5、10、15、30、60、90、120、180 min時取樣，每次5 mL，并及時補加等溫等體積溶出介質(zhì)。取樣液經(jīng)0.25? ?μm微孔濾膜濾過后，精密吸取續(xù)濾液適量，按“2.2.1”項下方法制備供試品溶液，然后于282 nm波長處測定其吸光度。按“2.2.3（5）”項下外標法計算各時間點CHE的質(zhì)量濃度，計算累積溶出度。各時間點校正后的累積溶出度（Re，%）：Re=[cnV0+Vi[∑][i=1][n-1]ci

m] ×100%（式中，cn為第n次取樣后溶出介質(zhì)中藥物的質(zhì)量濃度;V0為溶出介質(zhì)的體積;Vi為每次取樣的體積;ci為第i次補液后取樣前溶出介質(zhì)中藥物的質(zhì)量濃度;m為CHE投料量）。

2.4 CHE-SD處方和制備工藝的優(yōu)化

2.4.1 單因素試驗

（1）CHE-SD的制備方法：以PEG 6000為載體材料，以載體比例（即藥物-載體材料質(zhì)量比）為1 ∶ 3，按“2.1”項下不同方法制備CHE-SD，再按“2.3”項下方法測定各SD制劑15 min時的累積溶出度，并計算產(chǎn)品收率（%）：收率=（CHE-SD的質(zhì)量/原料和輔料的總質(zhì)量）×100%。以CHE累積溶出度和收率為指標，對制備方法進行篩選。結(jié)果，制備方法對CHE的累積溶出度有不同程度的影響，除研磨法所制樣品累積溶出度較低外，其他方法所制CHE-SD的累積溶出度均超過50%，其中以溶劑法制得的CHE-SD藥物溶出最多;此外，各方法所制CHE-SD的收率由低到高依次為研磨法、溶劑熔融法、溶劑法、熔融法，詳見圖3A、表2。

（2）CHE-SD的載體材料種類：分別以PEG 6000、PVP K30和泊洛沙姆127、188為載體材料，以載體比例為1 ∶ 3，按“2.1.1”項下方法制備不同載體材料的CHE-SD，再按“2.3”項下方法測定各SD制劑的累積溶出度，并按“2.4.1”項下方法計算其收率。以CHE累積溶出度和收率為指標，對載體材料進行篩選。結(jié)果，在由不同載體材料制得的CHE-SD中，藥物累積溶出度各有不同，其中以PVP K30所制樣品的溶出較少，泊洛沙姆127、188所制樣品的溶出較多;此外，各載體所制CHE-SD的收率由低到高依次為PVP K30、PEG 6000、泊洛沙姆127、泊洛沙姆188，詳見圖3B、表2。

（3）CHE-SD的載體比例：以泊洛沙姆188為載體材料，以載體比例分別為1 ∶ 1、1 ∶ 3、1 ∶ 5、1 ∶ 7，按“2.1.1”項下方法制備CHE-SD，再按“2.3”項下方法測定各SD制劑的累積溶出度，并按“2.4.1”項下方法計算其收率。以CHE累積溶出度和收率為指標，對載體比例進行篩選。結(jié)果，在由不同載體比例制得的CHE-SD中，藥物累積溶出度總體均有隨載體用量增加而逐漸升高的趨勢;此外，各比例載體所制CHE-SD的收率由低到高依次為? ? 1 ∶ 3、1 ∶ 5、1 ∶ 1、1 ∶ 7，詳見圖3C、表2。

2.4.2 正交試驗設(shè)計與結(jié)果

根據(jù)“2.4.1”項下單因素試驗結(jié)果，采用正交試驗法對CHE-SD處方和制備工藝進行優(yōu)選，選取制備方法（A）、載體材料種類（B）、載體比例（C）3個因素，每個因素設(shè)置3個水平，根據(jù)L9（34）正交表安排試驗，以收率（%）為考察指標。正交試驗因素與水平見表3（本研究擬主要考察不同種類的載體材料，故選擇了泊洛沙姆中收率更高的泊洛沙姆188），試驗設(shè)計與結(jié)果見表4，方差分析結(jié)果見表5。

由表4可見，各因素對收率影響程度的排序為B>A>C，各因素水平最優(yōu)組合為A1B1C2。由表5可見，因素A、B對產(chǎn)品收率的影響有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。

2.4.3 驗證試驗

按“2.4.2”項下最優(yōu)工藝制備3批SD（以下稱為“CHE-PEG-SD”），按“2.2”“2.3”項下方法分別測定含量、溶出度，并按“2.4.1”項下方法計算收率。結(jié)果，3批CHE-PEG-SD在15 min時的累積溶出度為（61.72±0.67）%（RSD=1.08%，n=3），收率為（99.04±0.83）%（RSD=0.84%，n=3）。

2.5 CHE-PEG-SD的表征

2.5.1 溶解度

分別取過量的CHE原料藥、CHE與PEG的物理混合物（各組成比例同CHE-PEG-SD，下同）、按“2.4”項下最優(yōu)工藝制得的CHE-PEG-SD（下同）各3份，分別置于刻度試管中，加水1 mL，劇烈振蕩，經(jīng)0.25 μm微孔濾膜濾過。取續(xù)濾液，以無水乙醇適當(dāng)稀釋，混勻，于282 nm波長處測定其吸光度，計算溶解度：溶解度（mg/mL）=溶劑中CHE的質(zhì)量/溶劑體積。結(jié)果，CHE原料藥、物理混合物、CHE-PEG-SD在水中的溶解度分別為0.098、0.112、3.725 mg/mL。

2.5.2 體外溶出度

按“2.3”項下方法分別考察CHE原料藥、CHE與PEG的物理混合物、CHE-PEG-SD的累積溶出度。結(jié)果，CHE原料藥、CHE與PEG的物理混合物在180 min時的累積溶出度分別為6.24%、7.19%，而CHE-PEG-SD在15 min時的累積溶出度就已達最高值61.72%。

2.5.3 熱分析

取CHE原料藥、PEG 6000、CHE與PEG的物理混合物、CHE-PEG-SD各適量，進行熱分析。熱分析條件：氛圍氣為氮氣，升溫速度為10 ℃/min，終點溫度為600 ℃，熱重分析（TGA）、差示掃描量熱分析（DSC）、微商熱重分析（DTG）結(jié)果見圖4。由圖4可見，CHE原料藥在185.17 ℃有1個特征吸熱峰，相當(dāng)于藥物的熔點。PEG 6000在63.83 ℃左右有1個較大的吸熱峰，為其熔融峰;在388.50 ℃有1個較為鈍圓的吸熱峰，為其失重峰。PEG的上述特征吸熱峰較之于CHE與PEG的物理混合物和CHE-PEG-SD的相應(yīng)圖譜中相應(yīng)峰均有一定程度移動，且CHE的吸熱峰消失。這表明形成物理混合物和固體分散體后，CHE以非晶態(tài)分散于載體PEG中。此外，物理混合物與CHE-PEG-SD相比，樣品失重率達5%時的溫度（即分解溫度）提高了，提示CHE-PEG-SD中CHE與PEG之間的相互作用力比物理混合物更強。

2.5.4 XRD分析

取CHE原料藥、PEG 6000、CHE與PEG的物理混合物、CHE-PEG-SD各適量，進行XRD分析。XRD條件：銅（Cu）靶，高壓強度為40 kV，管流為30 mA，掃描范圍為4～90°，掃描速度為2 °/min，結(jié)果見圖5。由圖5可見，CHE原料藥具有明顯的晶體吸收峰;PEG 6000僅在19.3、24.4°處有強吸收峰;上述CHE的晶體吸收峰在CHE與PEG的物理混合物及CHE-PEG-SD中有一定程度的減弱或消失，提示CHE在SD制劑中以非晶態(tài)存在。

2.5.5 SEM分析

取CHE原料藥、PEG 6000、CHE與PEG的物理混合物和CHE-PEG-SD各適量，采用SEM直接觀察其表面形貌，結(jié)果見圖6。由圖6可見，CHE原料藥為斜棱柱狀或片狀結(jié)晶，PEG 6000以非晶態(tài)存在，兩者物理混合物為晶體和非晶體的混合物，而CHE-PEG-SD中未見晶體存在，提示藥物CHE以非晶態(tài)均勻分散在載體中。

2.5.6 抗氧化活性的研究

（1）DPPH溶液的配制：稱取DPPH 19.8 mg，用95%乙醇溶解并定容于50 mL量瓶中，搖勻;取上述溶液1 mL，用95%乙醇定容至10 mL容量瓶中，即得質(zhì)量濃度為39.6 μg/mL的DPPH溶液，備用。

（2）抗壞血酸溶液的配制：精密稱取抗壞血酸0.1 g，置于燒杯中，加水溶解后轉(zhuǎn)移至25 mL量瓶中，用水定容，配制成質(zhì)量濃度為4 mg/mL的抗壞血酸溶液，備用。

（3）CHE-PEG-SD待測液的配制：精密稱取按“2.4”項下最優(yōu)工藝制得的CHE-PEG-SD適量，用適量95%乙醇溶解，定容于10 mL量瓶中，依次量取1、2、3、4、5 mL（取樣量參考本課題組前期預(yù)試驗結(jié)果），以95%乙醇分別定容于10 mL量瓶中，搖勻，即得，備用。

（4）抗氧化活性的測定：精密吸取上述CHE-PEG-SD待測液和抗壞血酸溶液各2 mL，分別與DPPH溶液2 mL混合，搖勻后放置30 min，以95%乙醇為空白對照，于517 nm波長處檢測兩者的吸光度值（A1）;精密吸取上述CHE-PEG-SD待測液和抗壞血酸溶液各2 mL，分別與95%乙醇2 mL混合后，以95%乙醇為空白對照，于517 nm波長處檢測兩者的吸光度值（A2）;將DPPH溶液2 mL與95%乙醇2 mL混合后，以95%乙醇為空白對照，于517 nm波長處測其吸光度值（A3）。計算CHE-PEG-SD對DPPH自由基的清除率：清除率（%）=[1-（A1-A2）/A3]×100%，并計算其半數(shù)抑制濃度（IC50），結(jié)果見圖7。由圖7可見，不同質(zhì)量濃度CHE-PEG-SD和抗壞血酸對DPPH自由基均有一定的清除能力;但與抗壞血酸相比，CHE-PEG-SD對DPPH自由基的清除率更低，IC50更高（抗壞血酸、CHE-PEG-SD的IC50分別為0.041、0.124 mg/mL）。

3 討論

CHE具有多種生物活性，但因溶解度較低，使得其應(yīng)用受到了一定的限制[13]。近年來，國內(nèi)外有關(guān)CHE的藥劑學(xué)研究不多，常見劑型主要包括明膠微球、磁性納米殼聚糖微球、口服脂質(zhì)體、脂質(zhì)體溫敏凝膠、聚氰基丙烯酸丁酯納米粒、復(fù)合磁性溫敏凝膠等[14-19]。在涉及CHE原料藥藥動學(xué)及相應(yīng)微粒分散型制劑的相關(guān)研究[13-19，24]中，僅有1篇[13]關(guān)于CHE-聚乙烯醇-SD及其抗炎活性的研究。CHE是一種難溶性化合物，制成的普通制劑溶出度低、生物利用度差，而明膠微球制劑、磁性納米殼聚糖微球等制劑工藝較為復(fù)雜，故改善其溶解度、開發(fā)制劑工藝簡單的劑型成為CHE劑型研發(fā)的熱點之一。目前，SD技術(shù)已廣泛應(yīng)用于增加難溶性藥物溶解度和溶出速率的制劑研究中，是改善難溶性藥物生物利用度的有效措施之一[20]，加之其工藝較為簡單、相關(guān)研究較少，故本研究對CHE-SD的制備進行了初步探討。

本研究建立了檢測制劑中CHE含量的紫外分光光度法，并進行了專屬性、精密度、重復(fù)性、穩(wěn)定性、加樣回收率等方法學(xué)考察。結(jié)果顯示，CHE在282 nm波長處有最大吸收，各載體成分不干擾CHE的定量分析，方法學(xué)考察結(jié)果顯示本法可用于CHE-SD中藥物含量的檢測。

本研究采用溶劑法、熔融法、研磨法、溶劑熔融法等不同方法制備CHE-SD，并考察了多種載體材料如PEG 6000、PVP K300、泊洛沙姆127/188以及其比例等對CHE-SD藥物溶出度和收率的影響。單因素與正交試驗結(jié)果表明，上述因素對CHE-SD的藥物溶出度和收率均有一定的影響，尤其是制備方法和載體材料種類的影響更為明顯。所得最優(yōu)工藝是以PEG 6000為載體材料，CHE原料藥與載體質(zhì)量比為1 ∶ 3，采用溶劑法制備。以最優(yōu)工藝所得CHE-PEG-SD在15 min時的累積溶出度為（61.72±0.67）%，收率為（99.04±0.83）%，RSD均小于2%，提示工藝可行、穩(wěn)定。

本研究以原料藥、PEG 6000及兩者物理混合物為對照，在檢測溶解度、累積溶出度的基礎(chǔ)上，利用熱分析、XRD、SEM技術(shù)對所制備的CHE-PEG-SD進行了物相表征。結(jié)果顯示，CHE-PEG-SD的溶解度為3.725 mg/mL，顯著高于物理混合物（0.112 mg/mL）和原料藥（0.098 mg/mL）;15 min時累積溶出度已達峰值61.72%，顯著高于物理混合物（6.24%，180 min）和原料藥（7.19%，180 min）。CHE原料藥主要為斜棱柱狀及片狀結(jié)晶;制成SD后，CHE吸熱峰、晶體吸收峰均較原料藥和載體有所移動或消失，藥物主要以非晶態(tài)均勻分散在載體中，物相特征發(fā)生明顯變化。這可能是因為藥物分子與載體之間存在氫鍵等相互作用力，導(dǎo)致在固化時形成了具有較高能量的非結(jié)晶無定形物[25]，而這種作用力及非晶態(tài)可能也是CHE-PEG-SD溶解度增大的原因之一。

本研究以抗壞血酸為陽性對照，采用DPPH法對CHE-PEG-SD的體外抗氧化活性進行了評價。結(jié)果顯示，不同質(zhì)量濃度的CHE-PEG-SD均具有一定的DPPH自由基清除能力（IC50=0.124 mg/mL），但弱于抗壞血酸（IC50=0.041 mg/mL），其具體作用機制有待后續(xù)研究。

綜上所述，本研究所建含量測定方法簡便、準確;優(yōu)化的制備工藝合理、可行;所得CHE-PEG-SD溶解度顯著增大，體外溶出明顯增多，且具有一定的體外抗氧化活性。但本研究所制得的CHE-PEG-SD的穩(wěn)定性、藥動學(xué)特征、藥理活性及作用機制等尚有待進一步研究，且制劑的速釋和控釋功能亦有待完善。

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（收稿日期：2019-09-03 修回日期：2020-03-01）

（編輯：張元媛）