朱 潔，周云婷，李俊行，張利英

（1.浙江醫(yī)藥股份有限公司新昌制藥廠，浙江紹興 312500；2.新昌縣食品藥品檢驗檢測中心，浙江紹興 312500)

噴昔洛韋（penciclovir）是一種全合成的阿昔洛韋類抗病毒藥物，對HSV-1、HSV-2、VzV和E-B病毒有抑制活性，而對CMV病毒的活性較弱。與阿昔洛韋相比，其抗病毒效果顯著，是一種抗病毒譜較廣的藥物[1]。本品生產(chǎn)過程中使用了甲酸[2]，甲酸有急性毒性、刺激性和致突變性，甲酸為第三類溶劑，根據(jù)藥典要求，需限制使用，中國藥典規(guī)定其限度為0.5%[3]，因此需要對本品中的甲酸含量進行定量測定，但未發(fā)現(xiàn)有關測定噴昔洛韋原料藥中甲酸殘留的文獻。由于甲酸在氣相色譜的氫火焰離子檢測器（FID）的響應信號很弱，無法用氣相色譜儀直接測定，故采用離子色譜法測定本品中甲酸含量[4]。

1 儀器與試藥

Dionex ICS-2100型離子色譜系統(tǒng)，配置抑制型電導檢測器，EG淋洗液發(fā)生器（賽默飛世爾科技）；METTLERTOLEDO XS205DU型電子天平（梅特勒-托利多儀器有限 公司）。

噴昔洛韋（批號150901、150902、150903）（安捷倫科技有限公司）；Dionex EGC III KOH淋洗液（賽默飛世爾科技有限公司，貨號：074532）；離子色譜用甲酸標準溶液（1mg/mL，西格瑪奧德里奇（上海）貿(mào)易有限公司）；二甲基亞砜（西班牙薩勞有限公司）；水為超純水。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

Dionex Ionpac AS11型陰離子交換色譜柱（4mm×250mm，13μm）；柱溫30℃；流動相A為水，流動相B為Dionex EGC III KOH淋洗液，淋洗液濃度梯度洗脫（洗脫程序見表1）。流速1.0mL/min；定量環(huán)25μL；抑制器Dionex ASRS 300-4mm；抑制電流75mA；檢測方式為抑制型電導檢測器

表1 梯度洗脫程序

2.2 溶液配制

對照品溶液：精密量取甲酸標準溶液50μL（相當于50μg）， 置于100mL量瓶中，加5mL二甲基亞砜，再加水稀釋至刻度，搖勻（0.5μg/mL）。

供試品溶液：精密稱取供試品約25mg，置于100mL量瓶中，加5mL二甲基亞砜使溶解，再加水稀釋至刻度，搖勻 （250μg/ml）。

2.3 專屬性試驗

分別取空白溶劑、對照品溶液和供試品溶液進樣測定，記錄色譜圖，見圖1。從圖1看出，空白溶劑不干擾測定，甲酸峰形良好。

圖1 典型離子色譜圖

2.4 線性試驗

分別精密量取0.1%甲酸標準溶液12.5μL、25μL、50μL、75μL、100μL（分 別 相 當 于12.5μg、25μg、50μg、75μg、100μg），分別置于100mL量瓶中，加5mL二甲基亞砜，再加水稀釋至刻度，搖勻（濃度分別為0.125μg/mL、0.25μg/mL、0.5μg/mL、0.75μg/mL、1μg/mL）。進樣測定，記錄色譜圖。以濃度為橫坐標，以峰面積為縱坐標，進行線性回歸，得回歸方程y=0.565x+0.001，r=1.000。表明甲酸在0.125～1μg/mL時線性關系良好。

2.5 檢測靈敏度試驗

取最低濃度的線性溶液進一步稀釋10倍，配制成0.012 5μg/mL的溶液。進樣測定。計算信噪比為12，所以該方法的檢測限為0.012 5μg/mL，相當于可以檢出噴昔洛韋中甲酸的含量為0.005%。

2.6 精密度試驗

取對照品溶液，進樣測定6次，色譜圖峰面積的RSD為4.2%。

取同一批供試品，依法平行操作制備6份供試品溶液，分別進樣測定，6份結(jié)果的平均值為0.10%，RSD為5.4%。

2.7 加樣回收率試驗

分別在供試品中加入0.05%、0.2%和0.4%的甲酸，依法處理并測定，計算加樣回收率，結(jié)果平均回收率為114.4%，RSD為2.1%。

2.8 樣品測定

取噴昔洛韋樣品3批，依法處理并測定，結(jié)果分別為0.10%、0.08%和0.10%。

3 結(jié)論

在常規(guī)檢測中，由于甲酸在GC-FID上的響應信號弱，甲酸含量測定多采用衍生化法，但衍生化程度較難控制。由于甲酸在水溶液中呈離子狀態(tài)存在，故可以采用操作簡易的離子色譜法。

在本實驗中，通過較全面的方法學驗證，建立了一種離子色譜法測定噴昔洛韋中甲酸含量的方法，結(jié)果表明，甲酸在0.125～1μg/mL時線性關系良好，三個濃度平均回收率為114.4%，RSD為2.1%，方法準確度良好，精密度良好。在該色譜系統(tǒng)中，甲酸色譜峰保留時間適宜，峰形良好，重現(xiàn)性好，靈敏度高，可準確可靠地測定噴昔洛韋原料藥中甲酸的殘留量。