王雅楠，王 倩，劉延琳，2，宋育陽(yáng)，2，秦 義，2，3

（1.西北農(nóng)林科技大學(xué) 葡萄酒學(xué)院，陜西 楊凌 712100；2.陜西省葡萄與葡萄酒工程技術(shù)研究中心，陜西 楊凌 712100；3.西北農(nóng)林科技大學(xué) 合陽(yáng)葡萄試驗(yàn)示范站，陜西 合陽(yáng) 715300）

高級(jí)醇（又稱雜醇）一般指具有兩個(gè)以上的碳原子的一元醇[1]，酵母碳代謝和氨基酸代謝途徑中的重要副產(chǎn)物[2]，常見(jiàn)于各類酒精飲品中，在葡萄酒中主要以異丁醇、異戊醇、β-苯乙醇等為主導(dǎo)[3]。低濃度的高級(jí)醇和它們的酯，對(duì)葡萄酒的風(fēng)味和香味起著關(guān)鍵作用[4-5]，但高濃度雜醇給葡萄酒帶來(lái)異味，容易引起飲酒后“上頭”，甚至給身體健康造成傷害[6-9]。在我國(guó)部分葡萄酒產(chǎn)區(qū)，受原料、工藝等影響導(dǎo)致酒中高級(jí)醇含量通常偏高，因此，對(duì)于這些產(chǎn)區(qū)內(nèi)的葡萄酒生產(chǎn)企業(yè)而言，利用經(jīng)濟(jì)、簡(jiǎn)便的高級(jí)醇檢測(cè)分析手段，發(fā)現(xiàn)并控制葡萄酒中高級(jí)醇的來(lái)源，是亟需解決的技術(shù)問(wèn)題。

葡萄酒中高級(jí)醇的檢測(cè)方法主要有氣相色譜法（gas chromatography，GC）、氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法（gas chromatography-mass spectrometry，GC-MS）和比色法（GB/T 5009.48—2003《蒸餾酒及配制酒衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)的分析方法》）[10]。氣相色譜法和氣質(zhì)聯(lián)用法可以利用高級(jí)醇標(biāo)準(zhǔn)品，對(duì)葡萄酒的單個(gè)高級(jí)醇進(jìn)行相對(duì)定量或者絕對(duì)定量，分析準(zhǔn)確性較高，是目前實(shí)驗(yàn)檢測(cè)使用較為普遍的方法，但存在標(biāo)準(zhǔn)樣品昂貴且不便保存、樣品前處理操作復(fù)雜、設(shè)備價(jià)格昂貴等缺點(diǎn)[11]，并不適宜國(guó)內(nèi)眾多中小型酒類生產(chǎn)企業(yè)在生產(chǎn)過(guò)程中快速檢測(cè)的實(shí)際需要和實(shí)驗(yàn)室以高級(jí)醇含量為觀測(cè)點(diǎn)的大批量菌株的快速初篩。比色法則起初用于蒸餾酒中雜醇的檢測(cè)，其根據(jù)高級(jí)醇（正丙醇除外）與濃硫酸脫水轉(zhuǎn)化為不飽和烴，與對(duì)二甲胺基苯甲醛發(fā)生縮合反應(yīng)，生成橙黃色化合物的原理來(lái)測(cè)定。該法操作簡(jiǎn)單，不需要昂貴檢測(cè)設(shè)備，檢驗(yàn)量大且經(jīng)濟(jì)，依然是生產(chǎn)企業(yè)實(shí)際生產(chǎn)中適用的方法。但是比色法除了不能定量單一高級(jí)醇的缺陷外，還存在加熱溫差大容易導(dǎo)致爆管、針對(duì)葡萄酒檢測(cè)條件不明晰、干擾因素多、顯色不穩(wěn)定等問(wèn)題。

葡萄酒中的高級(jí)醇產(chǎn)量一方面與釀造工藝技術(shù)有關(guān)，如葡萄汁初始糖含量[12]、氮源的種類[13-14]及含量[15-16]，發(fā)酵溫度，pH值、溶氧量和貯存時(shí)間等；另一方面，由于葡萄酒中的高級(jí)醇主要是酵母代謝產(chǎn)生[20]，研究人員主要圍繞酵母的Ehrlich途徑，通過(guò)測(cè)序研究其基因結(jié)構(gòu)及功能[21]，以及通過(guò)基因調(diào)控互作[22-24]研究等，來(lái)揭示酵母的高級(jí)醇代謝調(diào)控途徑，從而為低產(chǎn)高級(jí)醇酵母的基因工程育種提供理論支撐。

本研究在國(guó)標(biāo)比色法[27]和前人研究的基礎(chǔ)上[12，26-27]進(jìn)行多個(gè)條件優(yōu)化，建立了一種顯色穩(wěn)定、能夠準(zhǔn)確檢測(cè)高級(jí)醇含量的方法，隨后以商業(yè)酵母CECA為對(duì)照，采用優(yōu)化比色法和GC-MS法對(duì)課題組核心酵母種質(zhì)資源庫(kù)中的6株本土釀酒酵母產(chǎn)高級(jí)醇能力進(jìn)行檢測(cè)分析，旨在篩選得到具有較好發(fā)酵特性且低產(chǎn)高級(jí)醇的本土釀酒酵母，為實(shí)際生產(chǎn)提供應(yīng)用指導(dǎo)。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

實(shí)驗(yàn)材料為本實(shí)驗(yàn)室前期從新疆、寧夏、內(nèi)蒙古葡萄酒產(chǎn)區(qū)篩選得到的發(fā)酵性能優(yōu)良、具有商業(yè)化潛力的6株本土釀酒酵母（Saccharomyces cerevisiae），對(duì)照菌株為商業(yè)酵母CECA，均于實(shí)驗(yàn)室-80 ℃冰箱中保存。

對(duì)二甲氨基苯甲醛：上海葉源生物科技公司；異戊醇、異丁醇等高級(jí)醇標(biāo)準(zhǔn)品（均為色譜純）；無(wú)水乙醇、濃硫酸、吐溫80（均為國(guó)產(chǎn)分析純）：國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司。對(duì)二甲氨基苯甲醛-硫酸溶液（5 g/L）：0.5 g對(duì)二甲氨基苯甲醛加硫酸溶解至100 mL。高級(jí)醇標(biāo)準(zhǔn)使用液：稱取0.08 g異戊醇，0.02 g異丁醇，50 mL無(wú)雜醇油乙醇，定容至100 mL配成高級(jí)醇標(biāo)準(zhǔn)溶液Ⅰ，隨后吸取5 mL溶液Ⅰ到50 mL容量瓶中，加水稀釋至刻度線（相當(dāng)于0.1 mg/mL高級(jí)醇）。酵母浸出粉胨葡萄糖（yeast extract peptone dextrose，YPD）培養(yǎng)基、Triple M模擬葡萄汁[28]：自制。

1.2 儀器與設(shè)備

UV1800 紫外分光光度計(jì)：日本島津公司；7890B GC、5975B MS氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀：美國(guó)Agilent公司；HH-4數(shù)顯恒溫水浴鍋：國(guó)華電器有限公司；ZHWY-2102C恒溫培養(yǎng)振蕩器：上海智城分析儀器制造有限公司；BK1301生物顯微鏡：重慶光電儀器有限公司；ELX800酶標(biāo)儀：美國(guó)BioTek公司。

1.3 方法

1.3.1 樣品制備

-80 ℃取菌，YPD固體培養(yǎng)基劃線培養(yǎng)，挑單菌落進(jìn)行二次純化，鏡檢后接入50mLTripleM模擬汁中28℃、150r/min培養(yǎng)24 h，隨后以5×105CFU/mL接入300 mL模擬汁中，每株菌設(shè)置3個(gè)平行，模擬白葡萄酒發(fā)酵條件25 ℃靜置發(fā)酵。每天監(jiān)控CO2質(zhì)量損失，待糖降至4 g/L以下結(jié)束發(fā)酵，裝入100 mL樣品瓶中存放于-30 ℃冰箱待測(cè)。測(cè)定殘?zhí)遣捎?,5二硝基水楊酸（dinitrosalicylic acid，DNS）法[29]。

1.3.2 比色法測(cè)定酒中的高級(jí)醇含量

國(guó)標(biāo)法常用于蒸餾酒中高級(jí)醇的檢測(cè)，具體測(cè)步驟詳見(jiàn)GB/T5009.48—2003《蒸餾酒及配制酒衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)的分析方法》[27]，其標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制所用高級(jí)醇標(biāo)準(zhǔn)使用液的體積按照0、0.1 mL、0.2 mL、0.3 mL、0.4 mL、0.5 mL、0.6 mL、0.7 mL、0.8 mL、0.9 mL、1 mL加入反應(yīng)體系，比較高級(jí)醇質(zhì)量濃度在0～40 mg/L、0～50 mg/L、0～60 mg/L、0～70 mg/L和0～100 mg/L間的線性關(guān)系。優(yōu)化實(shí)驗(yàn)則通過(guò)使用乙醇檢測(cè)剩余的蒸發(fā)餾出液作為檢測(cè)初始樣品以簡(jiǎn)化復(fù)雜的前處理步驟，后分別對(duì)酒樣稀釋倍數(shù)（未稀釋，稀釋5、10、20倍）、加樣靜置時(shí)間（1 min、3 min、5 min）、水浴條件（100 ℃15 min、90 ℃20 min、80 ℃20 min、90 ℃30 min、80 ℃30 min）和稀釋劑種類（水、50%硫酸溶液、濃硫酸）進(jìn)行優(yōu)化條件探索，搖勻10 min后，用1 cm比色杯以“0”調(diào)節(jié)零點(diǎn)，波長(zhǎng)520 nm處測(cè)吸光度值，每個(gè)樣品平行檢測(cè)5次，測(cè)定結(jié)果及相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（relative standard deviation，RSD）。

1.3.3 GC-MS法測(cè)定酒中的高級(jí)醇含量

參考蔡建[30]的檢測(cè)方法。標(biāo)準(zhǔn)溶液配制：將內(nèi)標(biāo)物4-甲基-2-戊醇（1.0 g/L）及醇類標(biāo)準(zhǔn)物溶于酒精度12%vol、酸7 g/L（以酒石酸計(jì)）、pH3.3、葡萄糖2 g/L的模擬汁中，現(xiàn)配現(xiàn)用保存于4 ℃。

頂空固相微萃?。篈gilentPALRSI85進(jìn)樣系統(tǒng)，吸取5mL的酒樣、1 g NaCl置于15 mL樣品瓶，PTFE-硅隔膜蓋緊，400 r/min、40 ℃條件下加熱30 min，后解吸25 min。

GC-MS條件：HP-INNOWAX毛細(xì)管柱（60mm×0.25mm×0.25 μm）；載氣高純氦氣（He）（流速1 mL/min）；250 ℃熱解吸25 min，柱溫箱的升溫50 ℃保持1 min，以3 ℃/min的速度升溫至220 ℃，保持5 min；質(zhì)譜接口溫度280 ℃；離子源溫度230 ℃；電離方式為電子電離（electron ionization，EI）源；電子能量70 eV；質(zhì)量掃描范圍29～350 u；運(yùn)行時(shí)間62.67 min；每個(gè)樣品重復(fù)兩次。依據(jù)標(biāo)樣色譜保留時(shí)間、質(zhì)譜信息，比對(duì)美國(guó)國(guó)家生物信息中心（national center of biotechnology information，NIST）14.L標(biāo)準(zhǔn)譜庫(kù)進(jìn)行定性分析，采用內(nèi)外標(biāo)法進(jìn)行定量分析。

1.3.4 統(tǒng)計(jì)分析

2 結(jié)果與分析

2.1 葡萄酒高級(jí)醇檢測(cè)方法的優(yōu)化

2.1.1 待測(cè)樣品的稀釋

實(shí)驗(yàn)首先利用國(guó)標(biāo)法測(cè)定高級(jí)醇質(zhì)量濃度在0～40mg/L、0～50 mg/L、0～60 mg/L、0～70 mg/L和0～100 mg/L間的線性關(guān)系，結(jié)果見(jiàn)圖1。

圖1 高級(jí)醇標(biāo)準(zhǔn)曲線Fig.1 Standard curve of higher alcohol

由圖1可知，高級(jí)醇檢測(cè)濃度與吸光度值在一定范圍內(nèi)才具有良好線性關(guān)系，當(dāng)檢測(cè)樣品的高級(jí)醇含量在不高于40 mg/L時(shí)，最大吸光度值達(dá)0.351 1，其線性系數(shù)（R2）可以達(dá)到0.999，而當(dāng)高級(jí)醇質(zhì)量濃度超過(guò)70 mg/L時(shí)，其吸光度值極不穩(wěn)定。在葡萄酒中，高級(jí)醇含量一般在90～300 mg/L范圍內(nèi)，常高于標(biāo)準(zhǔn)曲線的最高檢出濃度，因此針對(duì)葡萄酒樣品檢測(cè)分析時(shí)，有必要將樣品的高級(jí)醇濃度進(jìn)行稀釋。

而在國(guó)標(biāo)法中并未明確規(guī)定樣品稀釋倍數(shù)，本實(shí)驗(yàn)將同一發(fā)酵酒樣分別進(jìn)行不稀釋、稀釋5倍、10倍和稀釋20倍進(jìn)行吸光度值和相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差比較，結(jié)果見(jiàn)圖2。

圖2 酒樣稀釋倍數(shù)對(duì)吸光度值及精密度的影響Fig.2 Effect of sample dilution times on absorbance and precision

由圖2可知，4種處理的吸光度隨著稀釋倍數(shù)的增加而逐漸減小，且RSD均在5%以內(nèi)，其中未稀釋酒樣精密度雖最好但平均吸光值達(dá)0.982 6，顯著高于標(biāo)準(zhǔn)曲線最高檢出限，而剩余3種處理中稀釋20倍的樣品其標(biāo)準(zhǔn)偏差最小，表示精密度更高，顯色也更穩(wěn)定。

2.1.2 加樣靜置時(shí)間、稀釋劑及反應(yīng)體系條件的優(yōu)化

將稀釋后的酒樣置于試管中，沿管壁緩慢加入二甲氨基苯甲醛-硫酸顯色劑，等其沉至管底后再將各管同時(shí)搖勻進(jìn)行加熱，不同靜置時(shí)間對(duì)檢測(cè)值的影響見(jiàn)圖3。

圖3 加樣靜置時(shí)間對(duì)吸光度值及精密度的影響Fig.3 Effect of sample standing time on absorbance and precision

由圖3可知，靜置時(shí)間與吸光度值成反比，與RSD值成正比，即靜置時(shí)間越短顯色度和精密度越高。從反應(yīng)穩(wěn)定性和顯色強(qiáng)度來(lái)考慮，在加樣后靜置1 min時(shí)，吸光度值為0.409±0.014，RSD（3.45%）最低，為最優(yōu)實(shí)驗(yàn)水平。因此，實(shí)驗(yàn)要求加樣盡量迅速并把控時(shí)間在1 min內(nèi)，避免靜置時(shí)間過(guò)長(zhǎng)導(dǎo)致吸光度值及精密度過(guò)低的問(wèn)題。

GB/T 5009.48—2003《蒸餾酒與配制酒衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)的分析方法》中選擇蒸餾水作為樣品稀釋劑，本實(shí)驗(yàn)分別比較了蒸餾水、50%硫酸溶液和濃硫酸作稀釋劑對(duì)檢測(cè)值的影響，結(jié)果如圖4所示。

圖4 稀釋劑種類對(duì)吸光度值及精密度的影響Fig.4 Effect of diluent type on absorbance and precision

由圖4可知，以濃硫酸為稀釋劑時(shí)，因硫酸液體黏稠等因素，會(huì)造成檢測(cè)結(jié)果的精密度偏低。而將濃硫酸稀釋至50%硫酸溶液后，實(shí)驗(yàn)精密度較水和濃硫酸條件下提高近1倍，且吸光度平均值為0.482±0.028，與以水為稀釋劑（0.439±0.043）無(wú)顯著差異。綜上，50%硫酸溶液較水精密性更好，較濃硫酸更具經(jīng)濟(jì)效益和安全性。

GB/T 5009.48—2003中，需要將盛有反應(yīng)體系的玻璃試管從沸水中立即放入冰水中，但由于溫差懸殊，容易造成爆管、鼓塞等，給實(shí)驗(yàn)帶來(lái)諸多不便，因此需要進(jìn)行水浴條件優(yōu)化。以100 ℃沸水浴15 min為對(duì)照，進(jìn)一步比較90 ℃水浴20 min、30 min及80 ℃水浴20 min、30 min的吸光度值和精密度，結(jié)果見(jiàn)圖5。

圖5 水浴條件對(duì)吸光度值及精密度的影響Fig.5 Effect of water-bath conditions on absorbance and precision

由圖5可知，與沸水浴15 min相比較，90 ℃水浴30 min和80 ℃水浴30 min，樣品檢測(cè)的吸光度值無(wú)顯著差異，但80 ℃水浴30 min條件下，其精密度RSD（4.08%）是最高的，這說(shuō)明80 ℃水浴30 min處理反應(yīng)體系可以在不影響吸光度值的前提下讓顯色更穩(wěn)定，同時(shí)溫和的反應(yīng)條件也大大降低了爆管風(fēng)險(xiǎn)。

2.1.3 優(yōu)化方法的精密度和回收率

通過(guò)對(duì)實(shí)驗(yàn)條件的分析，發(fā)現(xiàn)當(dāng)葡萄酒酒樣在梯度稀釋20倍，加樣靜置1 min，80 ℃水浴30 min且以50%硫酸溶液作為稀釋劑的條件下，實(shí)驗(yàn)得到最優(yōu)水平，隨后分別按國(guó)標(biāo)方法與優(yōu)化方法繪制高級(jí)醇標(biāo)準(zhǔn)曲線，結(jié)果見(jiàn)圖6。由圖6可知，在0～40 mg/L質(zhì)量濃度范圍內(nèi)，吸光度值與高級(jí)醇質(zhì)量濃度均呈具有良好的線性關(guān)系。

隨機(jī)抽取一酒樣，利用國(guó)標(biāo)方法和優(yōu)化方法將其平行檢測(cè)5次，精密度試驗(yàn)結(jié)果以及回收率試驗(yàn)結(jié)果分別見(jiàn)表1和表2。結(jié)果表明，國(guó)標(biāo)方法檢測(cè)的高級(jí)醇含量的標(biāo)準(zhǔn)偏差為32.297，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為6.052%，而優(yōu)化方法檢測(cè)的高級(jí)醇含量的標(biāo)準(zhǔn)偏差僅為7.008，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為1.665%，這表明優(yōu)化后的方法精密度更好，測(cè)量結(jié)果更接近真實(shí)值。取同一酒樣1 mL于試管，加入100 mg/L的高級(jí)醇標(biāo)準(zhǔn)使用液10 μL，后分別采用國(guó)標(biāo)法和優(yōu)化法平行檢測(cè)6次并計(jì)算樣品加標(biāo)回收率，結(jié)果兩種方法的加標(biāo)回收率均＞95%，說(shuō)明實(shí)驗(yàn)方法準(zhǔn)確可行。其中優(yōu)化方法加標(biāo)回收率為99.11%，高于國(guó)標(biāo)方法的加標(biāo)回收率（96.930%），進(jìn)一步說(shuō)明優(yōu)化方法檢測(cè)高級(jí)醇時(shí)準(zhǔn)確度更高，數(shù)據(jù)更可靠。

圖6 國(guó)標(biāo)法與優(yōu)化法標(biāo)準(zhǔn)曲線比較Fig.6 Comparison of standard curves between national standard method and optimized method

表1 國(guó)標(biāo)方法與優(yōu)化比色方法的精密度比較Table 1 Comparison of precision between national standard method and optimized method

表2 國(guó)標(biāo)方法與優(yōu)化比色方法的回收率比較Table 2 Comparison of recovery rate between national standard method and optimized method

2.2 優(yōu)化比色法與國(guó)標(biāo)法檢測(cè)高級(jí)醇含量對(duì)比

通過(guò)優(yōu)化比色法對(duì)實(shí)驗(yàn)室保存的50株釀酒酵母模擬發(fā)酵液中的高級(jí)醇含量進(jìn)行初篩，后結(jié)合發(fā)酵特性篩選6株本土釀酒酵母，以商業(yè)酵母CECA為對(duì)照（CK），利用GC-MS法對(duì)7株釀酒酵母的高級(jí)醇產(chǎn)量進(jìn)行了檢測(cè)分析，結(jié)果見(jiàn)表3。由表3可知，優(yōu)化比色法所測(cè)結(jié)果與GC-MS法所測(cè)結(jié)果之間在統(tǒng)計(jì)學(xué)上沒(méi)有顯著差異（P＜0.05），從而證明優(yōu)化比色法檢測(cè)更準(zhǔn)確、穩(wěn)定，可應(yīng)用于實(shí)踐。

以商業(yè)酵母CECA為對(duì)照（CK），利用GC-MS法測(cè)定6株本土釀酒酵母發(fā)酵液中的高級(jí)醇，結(jié)果見(jiàn)圖7。由圖7可知，且異戊醇、異丁醇、苯乙醇為本土酵母中的主要高級(jí)醇類，正辛醇、正丁醇、異辛醇、正庚醇、正己醇、正戊醇6種醇的含量較低，僅占到高級(jí)醇總量的0.74%～2.22%。通過(guò)進(jìn)一步分析發(fā)現(xiàn)，相對(duì)于CK和菌株LE25來(lái)說(shuō)，其他菌株高級(jí)醇總量的降低主要是由于異丁醇和異戊醇產(chǎn)量的顯著降低，而菌株間苯乙醇含量差異的影響對(duì)導(dǎo)致醇類總量差異貢獻(xiàn)較小。與菌株LE25相比，菌株LP29和LP25的異丁醇產(chǎn)量分別降低了約占85.76%和94.19%，異戊醇產(chǎn)量分別降低了43.85%和44.01%，該菌株可在進(jìn)一步生產(chǎn)試驗(yàn)中保證葡萄酒品質(zhì)的基礎(chǔ)上為降醇提供應(yīng)用。此外，每株低產(chǎn)菌中異戊醇生成量均高于異丁醇，而在CK及LE25中則相反，這也為后續(xù)利用基因工程對(duì)相關(guān)代謝通路進(jìn)行差異性分析提供了思路。

表3 優(yōu)化方法與GC-MS法所測(cè)7株釀酒酵母菌株高級(jí)醇產(chǎn)量比較Table 3 Comparison of higher alcohols content of 7 strains detected by optimized method and GC-MS method

圖7 酒樣中主要高級(jí)醇含量Fig.7 Contents of main higher alcohols in wine sample

3 結(jié)論

本研究對(duì)GB/T 5009.48—2003中比色法測(cè)定酒中高級(jí)醇含量的方法進(jìn)行條件優(yōu)化。優(yōu)化后的分析步驟為：取1 mL梯度稀釋20倍的蒸餾酒樣于試管（置于冷水浴）中，將2 mL質(zhì)量濃度為5 g/L的對(duì)二甲胺基苯甲醛-硫酸溶液沿管壁緩緩加入，蓋塞使其沉至管底靜置1 min后，將各管同時(shí)搖勻置于80 ℃水浴鍋中水浴30 min，取出后迅速?zèng)_水冷卻，立即加入2 mL 50%硫酸溶液混勻，冷卻10 min后倒入1 cm比色皿中，在波長(zhǎng)520 nm處測(cè)定吸光度值。優(yōu)化后得到標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程y=0.016 6x-0.018 2，相關(guān)系數(shù)R2=0.995，精密度試驗(yàn)結(jié)果相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為1.665%，加標(biāo)回收率99.1%，較國(guó)標(biāo)法的96.9%更接近100%，證明優(yōu)化法標(biāo)準(zhǔn)曲線相關(guān)系數(shù)更高，樣品檢測(cè)的精密度較高，準(zhǔn)確度更好。

利用優(yōu)化比色法對(duì)6株本土釀酒酵母的高級(jí)醇產(chǎn)量進(jìn)行了檢測(cè)分析，并利用GC-MS法進(jìn)行對(duì)比驗(yàn)證。一方面，發(fā)現(xiàn)兩種方法均可準(zhǔn)確檢測(cè)葡萄酒中高級(jí)醇總量，且在評(píng)價(jià)酵母菌株產(chǎn)高級(jí)醇總量上無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，優(yōu)化比色法在過(guò)程監(jiān)控中相較于GC-MS法更加經(jīng)濟(jì)、適用，可以完全滿足企業(yè)生產(chǎn)中葡萄酒高級(jí)醇檢測(cè)的需要；另一方面，篩選獲得2株極低產(chǎn)高級(jí)醇的本土釀酒酵母菌株LP29和LP25，這將為我國(guó)部分葡萄酒產(chǎn)區(qū)葡萄酒高級(jí)醇含量相對(duì)較高的問(wèn)題提供解決方案。