龐小蓮 黎強(qiáng) 陳宇

摘要：建立食品中毒鼠強(qiáng)殘留量的氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜檢測(cè)方法及科學(xué)的不確定度評(píng)定模型，提高檢測(cè)的質(zhì)量控制水平。結(jié)果表明，毒鼠強(qiáng)質(zhì)量濃度在25.0～250.0 ng/mL線(xiàn)性關(guān)系良好，Y=1.181×103X+5.203×103（R2=0.995 3），加標(biāo)回收率為96.57%，RSD為2.7%，方法檢出限為0.098 μg/kg，當(dāng)食品中毒鼠強(qiáng)含量為0.186 7 mg/kg時(shí)，其擴(kuò)展不確定度為0.000 21 mg/kg。該方法為氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定毒鼠強(qiáng)時(shí)的不確定度的評(píng)定提供了參考依據(jù)。

關(guān)鍵詞：氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜;毒鼠強(qiáng);不確定度

Abstract： To establish a GC-MS method and a scientific uncertainty evaluation model for the determination of tetramine residues in food poisoning， and to improve the quality control level of detection. The results showed that the linear relationship between the concentration of tetramine 25.0～250.0 ng/mL was good， Y=1.181×103X+5.203×103（R2=0.995 3）. The average recovery of three levels was 96.57%， and the corresponding RSD was 2.7%. The detection limit of the method was 0.098 μg/kg. When the content of tetramine in food poisoning was 0.186 7 mg/kg， the expanded uncertainty was 0.000 21 mg/kg. The method of determination of tetramine residues in food poisoning was confirmed， and the reference basis was provided for the evaluation of uncertainty in the determination of tetramine by GC-MS/MS.

Key words： GC-MS/MS; tetramine; uncertainty

毒鼠強(qiáng)化學(xué)名稱(chēng)為四次甲基二砜四胺，是一種劇毒鼠藥，不溶于甲醇及乙醇，其化學(xué)性質(zhì)非常穩(wěn)定，在生物體內(nèi)也不易降解，易造成鏈條性污染[1]。毒鼠強(qiáng)對(duì)中樞神經(jīng)系統(tǒng)有興奮作用，主要引起抽搐，對(duì)γ-氨基丁酸有拮抗作用，主要是由于阻斷γ-氨基丁酸受體所致，此作用為可逆性的。因其對(duì)所有溫血?jiǎng)游锞袆《?，其毒性相?dāng)于氰化鉀的100倍，砒霜的400倍，5 mg即可致人死亡，并有嚴(yán)重的二次中毒作用，加之缺乏有效的解毒藥品，目前已經(jīng)被嚴(yán)禁在國(guó)內(nèi)生產(chǎn)和銷(xiāo)售[2]。但是由于利益驅(qū)動(dòng)不法分子仍會(huì)生產(chǎn)，并且由于管理漏洞和人為投毒，因毒鼠強(qiáng)造成的誤食、投毒、自殺事件仍然時(shí)有發(fā)生。由于食品安全事故存在突發(fā)性、隱匿性等特點(diǎn)，為了能及時(shí)有效地預(yù)防、預(yù)警、應(yīng)對(duì)和處置此類(lèi)事故，并提供相應(yīng)的技術(shù)支持十分必要，依據(jù)中國(guó)實(shí)驗(yàn)室國(guó)家認(rèn)可委員會(huì) CNAS-CL01-2018《檢測(cè)與校準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)室能力認(rèn)可準(zhǔn)則》[3]的要求，開(kāi)展檢測(cè)的實(shí)驗(yàn)室應(yīng)評(píng)定測(cè)量不確定度，應(yīng)對(duì)當(dāng)前食品安全風(fēng)險(xiǎn)監(jiān)測(cè)。試驗(yàn)以豬肉和大米為例，研究并建立畜肉肌肉組織及植物性食品中的毒鼠強(qiáng)檢測(cè)技術(shù)與確證方法[4]，參照CNAS.CL006-2019《化學(xué)分析中不確定度的評(píng)估指南》[5]進(jìn)行不確定度評(píng)定，識(shí)別試驗(yàn)過(guò)程中不確定度的來(lái)源，量化各分量的不確定度，分析各分量的不確定度對(duì)檢測(cè)結(jié)果的影響，以期優(yōu)化檢測(cè)過(guò)程，減少檢測(cè)結(jié)果的誤差，保證檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

1.1.1 儀器 TRACE 1310-TSQ8000 Evo氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀，美國(guó) Thermo Fisher 公司;BSA822-CM型電子天平，賽多利斯科學(xué)儀器（北京）有限公司;ROATNTA 460R型離心機(jī)，德國(guó) SIGMA 公司;541-10000-00-1型渦旋混勻器，德國(guó)海道夫公司;N-EVAP-24型氮吹儀，美國(guó) Organomation 公司;1 000 μL可調(diào)移液槍、200 μL可調(diào)移液槍。

1.1.2 材料與試劑 標(biāo)準(zhǔn)品：毒鼠強(qiáng)，Stanford Chemicals，批號(hào)LY170822-14，濃度為（100±0.5） μg/mL;乙腈，色譜純，美國(guó) Thermo Fisher 公司;QuEChERS 萃取鹽包，美國(guó) Agilent 公司，部件號(hào)5982-6755（含6 g無(wú)水MgSO4，1.5 gNaAc）;15 mL QuEChERS 分散固相萃取管，美國(guó) Agilent 公司，部件號(hào)5982-5256（含300 mg PSA，300 mg C18，90 mg GCB，900 mg無(wú)水MgSO4）。

1.2 方法

1.2.1 標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制 精密量取1.0 mL毒鼠強(qiáng)標(biāo)準(zhǔn)溶液，置10 mL容量瓶中，用乙腈溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得標(biāo)準(zhǔn)使用液，濃度為10.0 μg/mL。分別精密量取0.05、0.10、0.20、0.30、0.40、0.50 mL標(biāo)準(zhǔn)使用液于20 mL容量瓶中，加乙腈定容至刻度，搖勻，即得。濃度依次為25.0、50.0、100.0、150.0、200.0、250.0 ng/mL。

1.2.2 供試品溶液的制備 稱(chēng)取10 g試樣，于50 mL聚苯乙烯具塞離心管中，加入10 mL去離子水，渦旋混勻使其充分浸潤(rùn)，放置30 min，再精密加入20.0 mL乙腈，渦旋混勻后，倒入 QuEChERS 萃取鹽包中，蓋緊瓶蓋并用力振搖2 min，在8 000 r/m下離心5 min，室溫靜置。移取8.0 mL上清液至15 mL QuEChERS 分散固相萃取管中，蓋緊瓶蓋并用力振搖2 min，在8 000 r/m下離心5 min;經(jīng)微孔濾膜（0.22 μm）過(guò)濾，取續(xù)濾液，裝瓶，用于氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜測(cè)定[6]。

1.2.3 氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜分析條件 TG-5MS石英毛細(xì)管柱（30 m×250 μm，0.25 μm）。載氣為He（≥99.99%），柱流量1.2 mL/min，進(jìn)樣口溫度250 ℃，不分流，進(jìn)樣量1 μL，溶劑延遲3.0 min。程序升溫：初始溫度60 ℃，保持1.0 min，以30 ℃/min升至250 ℃，保持6 min。EI源，電子能量為70 eV，燈絲電流25 μA，離子源溫度為300 ℃，質(zhì)譜接口溫度為280 ℃，多反應(yīng)監(jiān)測(cè)（SRM）采集模式，定量離子對(duì)240.0>212.0（CE15V）;定性離子對(duì)212.0>42.2（CE15V），212.0>132.0（CE15V），毒鼠強(qiáng)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)質(zhì)譜見(jiàn)圖1。

2 結(jié)果與分析

2.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)、檢出限和精密度

按試驗(yàn)條件進(jìn)行測(cè)定，以毒鼠強(qiáng)的質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)進(jìn)行線(xiàn)性回歸，以信噪比（S/N）為3確定檢出限，標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)結(jié)果見(jiàn)表1和圖2。結(jié)果顯示，毒鼠強(qiáng)在25.0～250.0 ng/mL與目標(biāo)物的響應(yīng)值呈良好的線(xiàn)性關(guān)系，Y=1.181×103X+5.203×103，R2=0.995 3，方法檢出限為0.098 μg/kg。取濃度級(jí)別4溶液連續(xù)進(jìn)樣7次，以色譜峰響應(yīng)值的RSD計(jì)算精密度，精密度良好（RSD=2.7%）。

2. 2重復(fù)性

取自制陽(yáng)性樣品10份[7]，按“1.2.2”方法制備供試品溶液，測(cè)定濃度并計(jì)算毒鼠強(qiáng)的含量和RSD，結(jié)果見(jiàn)表2。由表2可知，毒鼠強(qiáng)平均含量0.186 7 mg/kg，RSD為1.4%。

2.3 加標(biāo)回收率

加標(biāo)回收率試驗(yàn)設(shè)置高、中、低3個(gè)濃度水平[8]，各濃度水平分別準(zhǔn)確稱(chēng)取空白樣品10 g，分別精密加入“1.2.1”項(xiàng)下的標(biāo)準(zhǔn)使用液0.1、0.2、0.4 mL，按照“1.2.2”供試品溶液的制備加標(biāo)回收樣品溶液，每個(gè)濃度平行制備2份，分別進(jìn)樣測(cè)定，計(jì)算加標(biāo)回收率和RSD，結(jié)果見(jiàn)表3。由表3可知，平均回收率為96.57%，RSD為2.7%。

3 測(cè)量不確定度的評(píng)定

3.1 數(shù)學(xué)模型

式中，C為試樣中毒鼠強(qiáng)的殘留量（mg/kg）;[ρ]為從標(biāo)準(zhǔn)工作曲線(xiàn)上得到的毒鼠強(qiáng)濃度（ng/mL）;V為樣品定容體積（mL）;m為試樣質(zhì)量（g）。

3.2 不確定度的來(lái)源分析及量化

3.2.1 標(biāo)準(zhǔn)溶液引入的不確定度

1）標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)引入的不確定度。毒鼠強(qiáng)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)：生產(chǎn)廠(chǎng)商Stanford Chemicals，批號(hào)LY170822-14，濃度為100 μg/mL，其擴(kuò)展不確定度為0.5 μg/mL，按正態(tài)分布，取k=2，則標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)引入的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度為：[urel（P）=0.5100×2=2.50×10-3]

2）標(biāo)準(zhǔn)使用液引入的不確定度。移液器吸液：使用1 000 μL可調(diào)移液器移取1 000 μL毒鼠強(qiáng)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，用乙腈定容至10 mL容量瓶中，環(huán)境溫度為（20±5） ℃。按照J(rèn)JG646-2006《移液器檢定規(guī)程》[9]1 000 μL 可調(diào)移液器移取1 000 μL溶液，容量允許誤差為±1.0%，按三角分布，其標(biāo)準(zhǔn)不確定度為：[u1-1（V）=1.0%×16=4.08×10-3]

試驗(yàn)環(huán)境溫度為（20±5） ℃，乙腈在20 ℃的體積膨脹系數(shù)為1.37×10-3，按矩形分布[6]，由此產(chǎn)生的標(biāo)準(zhǔn)不確定度為：[u1-2（V）=5×1×1.37×10-33=3.95×10-3]

由移液槍吸液引入的合成相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度為：[u1，rel（V）=（4.08×10-3）2+（3.95×10-3）21=5.68×10-3]

容量瓶定容：A級(jí)10 mL容量瓶最大容量允許誤差為±0.02 mL，按三角分布，其標(biāo)準(zhǔn)不確定度為：

3）標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)配制引入的不確定度。分別精密量取0.05、0.10、0.20、0.30、0.40、0.50 mL毒鼠強(qiáng)標(biāo)準(zhǔn)使用液，于6個(gè)20 mL容量瓶中，加乙腈定容至刻度，稀釋過(guò)程中由移液器移液和容量瓶定容引入不確定度。

移液器移液：按JJG646-2006移液器檢定規(guī)程規(guī)定，移液器容量允許誤差分別為±3.0%、±2.0%、±1.5%、±1.5%、±1.0%、±1.0%，按三角分布，則由體積校準(zhǔn)引入的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度分別為：

容量瓶定容：JJG196-2006《常用玻璃量器檢定規(guī)程》[10]規(guī)定，20 mL A 級(jí)量瓶容量的允許誤差為±0.030 mL，按均勻分布，由此產(chǎn)生的不確定度為： [u1-1（T）=0.0306=1.22×10-2]。

4）標(biāo)準(zhǔn)溶液引入的相對(duì)不確定度。綜合以上3 個(gè)分量的不確定度，標(biāo)準(zhǔn)溶液引入的相對(duì)不確定度為：

3.2.2 樣品引入的不確定度

1）樣品前處理引入的不確定度。前處理：20 mL A級(jí)單標(biāo)線(xiàn)吸量管容量允許誤差為±0.030 mL，按三角分布，其標(biāo)準(zhǔn)不確定度為：

試驗(yàn)環(huán)境溫度為（20±5） ℃，乙腈在20 ℃的體積膨脹系數(shù)為1.37×10-3，按矩形分布，則由溫度效應(yīng)引入的標(biāo)準(zhǔn)不確定度為：

合成樣品前處理過(guò)程引入的不確定度：

2）測(cè)量重復(fù)性引入的不確定度。對(duì)樣品溶液進(jìn)行測(cè)定，計(jì)算其平均值和相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差，平均值為0.186 7 mg/kg，RSD為1.4%。測(cè)量重復(fù)性標(biāo)準(zhǔn)不確定度為：[u2（R）=1.4%10=4.43×10-3]，則測(cè)量重復(fù)性引入的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度為[u2，rel（R）=4.43×10-30.186 7=2.37×10-2]。

3）回收率引入的不確定度。平均回收率為96.57%，RSD為2.7%?；厥章蕵?biāo)準(zhǔn)不確定度為：[u3（R）=2.7%6=1.10×10-2]，則回收率引入的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度為：[u3，rel（R）=1.10×10-296.57%=1.14×10-2]。