畢德忠

摘 要 目的：研究鹽酸氨溴索膠囊的體外溶出度試驗和生物等效性相關性。方法：測定自制制劑在不同溶出介質中的累積溶出度，并進行生物等效性研究，考察處方工藝的合理性和溶出曲線的相似性。結果：經過處方和工藝優(yōu)化后制得的自制制劑能夠符合既定質量標準要求，空腹和餐后生物等效性與參比制劑一致。結論：鹽酸氨溴索膠囊體內外試驗呈現(xiàn)與參比制劑一致性，建立的制劑新工藝可適應工業(yè)化生產。

關鍵詞 鹽酸氨溴索 處方工藝 溶出曲線 臨床試驗

中圖分類號：R974.1； R945 文獻標志碼：A 文章編號：1006-1533（2020）15-0086-04

In vitro dissolution test and bioequivalence study of ambroxol hydrochloride capsules

BI Dezhong*

（Shanghai Xinyi Tianping Pharmaceutical Co.， Ltd.， Shanghai 201108， China）

ABSTRACT Objective： To study the correlation between in vitro dissolution and bioequivalence of ambroxol hydrochloride capsules. Methods： The cumulative dissolution of the home-made preparation in different dissolution media was determined and the bioequivalence was studied to investigate the rationality of the prescription process and the similarity of the dissolution profile. Results： Home-made preparations prepared after the optimization of prescription and process were able to meet the requirements of the established quality standards and the fasting and postprandial bioequivalence was consistent with the reference preparation. Conclusion： Home-made ambroxol hydrochloride capsules showed consistency with the reference formulation in vitro and in vivo， and the new formulation process established can be adapted to industrial production.

KEY WORDS ambroxol hydrochloride； formulation process； dissolution profile； clinical trial

鹽酸氨溴索為鹽酸溴己新的體內活性代謝物，是新一代黏痰溶解劑，臨床用于伴有痰液分泌不正常及排痰功能不良的各種急慢性呼吸道疾病的祛痰治療，特別是對慢性支氣管炎的祛痰治療，可顯著改善排痰和呼吸狀況[1]。鹽酸氨溴索可提高肺部功能指標，病人的咳嗽、呼吸不能、肺部啰音等癥狀也有明顯好轉，它比N-乙酰半胱氨酸和鹽酸溴己新等起效快[2]。

鹽酸氨溴索在常見呼吸道疾病的化痰和排痰治療中應用廣泛，近年來的研究又發(fā)現(xiàn)大劑量鹽酸氨溴索具有特殊的肺部保護功能，在慢性阻塞性肺疾病、呼吸窘迫綜合征尤其是新生兒呼吸窘迫綜合征等嚴重肺部疾病的治療以及危重患者術后肺部并發(fā)癥的預防中取得了較好的療效[3]。

目前，2015年版《中國藥典》收載的鹽酸氨溴索劑型有口服溶液、片劑、注射液、膠囊、緩釋膠囊和糖漿6種。現(xiàn)今臨床使用較多是鹽酸氨溴索片，對鹽酸氨溴索膠囊及其他劑型的藥學及臨床研究相對較少。本研究采用經過完整溶出度方法學試驗后的標準，對參比制劑和產業(yè)化自制品進行了不同溶出介質的研究，同時進行了人體餐前、餐后生物等效性試驗，結果表明鹽酸氨溴索膠囊和參比制劑具有相同的療效。

1 材料和方法

1.1 試藥和試劑

鹽酸氨溴索（山東羅欣藥業(yè)集團股份有限公司）；乳糖（上海華茂藥業(yè)有限公司）；預膠化淀粉（上?？房蛋录夹g有限公司）；聚維酮K30（BASF公司）；硬脂酸鎂（海鹽六和藥業(yè)有限公司）；鹽酸氨溴索膠囊（上海信誼天平藥業(yè)有限公司）；鹽酸氨溴索片參比制劑（Sanofi-Aventis France公司）；鹽酸氨溴索對照品（批號100599-201604，中國食品藥品檢定研究院）。

鹽酸、醋酸鈉、磷酸二氫鉀、氫氧化鈉、磷酸、乙腈（國藥集團化學試劑有限公司）。

1.2 儀器

1200 series高效液相色譜儀（美國安捷倫公司）；FADT-801RC溶出度儀（上海富科思公司）；XPE205電子天平（梅特勒公司）；HLSG220B濕法混合制粒機（北京航空制造工程研究所）；FL-120沸騰干燥機（重慶廣廈干燥設備工程公司）；NJP2200全自動硬膠囊填充機（浙江飛云科技有限公司）。

1.3 累積溶出度測定

根據國內外鹽酸氨溴索制劑溶出曲線測定方法[4-7]，以及完整的方法學研究結果，確定溶出曲線測試條件：按照中國藥典2015年版四部溶出度與釋放度測定法第一法（0931），采用0.1 mol/L鹽酸溶液、pH 4.5醋酸鹽溶液、pH 6.8磷酸鹽溶液和水四種介質進行溶出度試驗，按照f2相似因子法或15 min溶出度應均大于85%進行判定。

1.4 HPLC測定

色譜柱以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑（4.6 mm× 250 mm，5 mm）；流動相為0.01 mol/L磷酸氫二銨（用磷酸調節(jié)pH 7.0）-乙腈（50∶50）；檢測波長248 nm；流速1.0 ml/min；柱溫25 ℃；進樣體積20 ml。對照品溶液濃度為0.033 mg/ml，按外標法以峰面積計算含量。

1.5 處方和工藝篩選

1.5.1 原料藥的理化特性確認

本品為口服固體制劑，濕法制粒工藝中涉及到高溫高濕條件，對可能影響制劑質量的原藥特性進行確認，結合相關試驗對本品溶解度、PKa、粒度分布和晶型等進行確認。

1.5.2 輔料選擇

參考參比制劑說明書、原輔料相容性試驗及公司實際生產經驗，確定采用稀釋劑乳糖、崩解劑預膠化淀粉和粘合劑聚維酮K30為主要輔料，并以參比制劑的溶出曲線為評價指標進行處方篩選與考察。

1.5.3 制粒正交試驗設計

制劑工藝采用國內較為常用的濕法制粒工藝，即三相攪拌制粒和沸騰干燥工藝。為確保產業(yè)化過程中裝量差異和含量均勻度符合藥典規(guī)定，需進行攪拌速度、制粒速度和加漿量三者關系的進一步試驗。具體操作為按照正交設計要求，加入原輔料后，按照各工藝因素水平要求（表1），開啟攪拌開關，加入粘合劑后，開啟制粒開關進行制粒，獲得合適的濕顆粒。

1.6 生物等效性試驗

以指定的鹽酸氨溴索片為參比制劑、自制鹽酸氨溴索膠囊為受試制劑，通過單中心、隨機、開放、單次給藥、兩周期和雙交叉臨床研究方法來評價兩種制劑的人體生物等效性[8-9]，總共計劃入組48例受試者（空腹和餐后各24例）。根據相關指導原則[10-12]以及參比制劑與自制制劑的藥品說明書的相關內容，采用液質色譜聯(lián)用檢測法測定血漿中氨溴索的藥物濃度。

2 結果

2.1 處方和工藝篩選

2.1.1 原料藥的理化特性確認

鹽酸氨溴索BCS分類為Ⅰ類，PKa為8.03，在水中略溶解，在pH 1.0～8.0范圍內其溶解度為17～30 mg/ml，無明顯pH依賴性。按最大規(guī)格30 mg計算，屬于高溶解性藥物?；谙嚓P試驗及特性，鹽酸氨溴索原料藥的粒徑分布在74～245 mm對制劑無直接影響。經X射線-粉末衍射測定，確認本品原料藥晶型與參比制劑完全一致，且多批次原料藥晶型相同。通過影響因素試驗，確認原料藥晶型具有良好的穩(wěn)定性，在制劑生產過程中不會發(fā)生晶型變化。

2.1.2 輔料選擇

乳糖在本品中用作稀釋劑，其粒度分布可能對制劑的含量均勻度與溶出產生影響，通過試驗發(fā)現(xiàn)于粒徑245 mm粉碎后的乳糖，對制劑含量均勻度與溶出無較大影響；預膠化淀粉采用直接內加法，聚維酮K30水溶液作為粘合劑時，加入速度不宜過快；考慮到硬脂酸鎂具有較強疏水性的特點，對用量在0.25%～1.0%范圍內進行了溶出度研究，結果表明該用量范圍對溶出度影響不明顯，同時硬脂酸鎂用量在0.5%時，顆粒流動性已可滿足膠囊灌裝的需要，故擬定硬脂酸鎂的用量為0.5%。

2.1.3 制粒工藝

以與參比制劑溶出曲線相似性為目標，同時為確保產業(yè)化過程中裝量差異和含量均勻度符合藥典規(guī)定，產業(yè)化過程中進行了攪拌速度、制粒速度和加漿量的正交試驗。正交試驗初步溶出度（pH 6.8磷酸鹽緩沖溶液）結果顯示，當采用2.5%的聚維酮K30漿液、攪拌轉速設定為120 r/min、制粒轉速設定為1 400 r/min的樣品溶出度與原研制劑最為接近。粘合劑用量在7.5%時，制粒得的顆粒偏濕，對溶出度有較大影響（表2）。

綜合上述試驗結果，確定A3B1C3為最佳方案，新處方為乳糖（稀釋劑）、預膠化淀粉（崩解劑）、聚維酮K30（粘合劑漿液濃度為2.5%）、硬脂酸鎂（潤滑劑）。確定的新工藝采用三相濕法制粒（攪拌轉速：120 r/min；切割轉速：1 400 r/min）進行制備三批樣品（批號：Z180501、Z180502、Z180503），質量評價表明均符合相關質量標準要求（表3）。

2.2 自制和參比制劑累積溶出曲線比較

5 min時間點自制制劑在四種介質中的累積溶出度均略低于參比制劑，原因是自制制劑為膠囊劑，膠囊殼的溶解需約2～3 min，相對參比片劑的快速崩解有一定延遲；但15 min時兩者在四種介質中的累積溶出度均大于85%（圖1）。根據有關要求[13]，判定自制和參比制劑體外溶出行為相似。

2.3 生物等效試驗

在空腹條件下共篩選68例受試者，入選24例受試者，23例參與研究給藥，1例受試者未參與給藥。23例受試者完成兩個周期給藥研究。

在餐后條件下共篩選68例受試者，入選24例受試者參與給藥研究，2例受試者在第2周期入住當天自行退出研究，共22例受試者完成兩個周期給藥研究。

結果表明，口服氨溴索膠囊與參比制劑在空腹和餐后給藥時具有生物等效性（表4～5，圖2）。

3 討論

采用經過優(yōu)化的處方和工藝制備的三批樣品，從根本上改善了原處方中采用淀粉漿為粘合劑制得顆粒，對產品溶出曲線的影響，改變了原質量標準中采用單一介質、單一時間溶出度測定法，來判斷產品溶出行為的優(yōu)劣，對改進的樣品進行了多種溶出介質的全面研究，并通過體內生物利用度進行了驗證。后續(xù)還將對制劑處方和工藝進一步進行深入研究，提高自制品與參比制劑在空腹生物等效性試驗中Cmax值的接近程度。未來上市后的產品也可采用溶出曲線來評價工藝執(zhí)行和偏離程度，以進一步保證人民用藥安全和用藥有效。

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