孫未娜

【摘 ?要】目的：對高效液相色譜法測定啟脾丸中的橙皮苷的含量進行測定。方法：在測定的方法中使用的色譜柱為ZORBAX Eclipse XDB-C 18（4.6 mm×150 mm，5μm），其流動相為0.2molL-1醋酸銨-冰醋酸-甲醇的比例為57.24∶2.76∶40，柱溫為23度，設置成流速為0.8ml min-1，最后檢測其波長的長度為285nm，進樣量使用的是外標峰面積法進行定量。結果：經(jīng)過測試后發(fā)現(xiàn)橙皮苷的保留時間可以達到5.6min，進樣量在0.04μg～0.36μg之間，具有良好的內線性關系，經(jīng)過計算可以得出其平均回收率為95.878%，RSD=1.963%。結論：使用高效液相色譜法對啟脾丸中橙皮苷的含量進行測定，不僅操作起來高效，而且具備重現(xiàn)性好的優(yōu)點，最后的結果達標，因此可以用于啟脾丸的質量控制。

【關鍵詞】高效液相色譜法;啟脾丸;橙皮苷;含量測定

啟脾丸的主要成分是人參、茯苓、甘草、陳皮、山藥、山楂、六神曲、麥芽等，其主要的功能是健脾護胃、促進消化等功效，尤其是對胃腸功能較差的患者具有較強的調節(jié)功能。其中白術、陳皮、茯苓和甘草對腸道的平滑肌具有較好的調節(jié)作用;而白術、茯苓多肝又具有很好的保護功能，同時還可以對胃腸虛弱的癥狀起到良好的改善作用，對腸道感染具有一定的抑制作用。對于脾胃虛弱和消化不良等癥狀具有較為明顯的療效?；趩⑵⑼柙谂R床上的重要作用，其質量的高低對治療會有較高的影響，本文采用HPLC法對啟脾丸中的橙皮苷進行了詳細的測定，其方法具有操作簡單方便且對成分的分離效果好，測驗結果的誤差也較小。

1儀器與試藥

1.1儀器

Agilent 1200型高效液相色譜儀（美國安捷倫公司），ZORBAX Eclipse XDB-C 1 8色譜柱（4.6×150mm，5μm），高壓四元泵，自動進樣器，二極管陳列檢測器DAD1 DL-720D數(shù)控超聲波清洗器（上海之信儀器有限公司），M ETTL ER TOL EDO電子天平（德國）。

1.2試藥

甲醇（色譜純，山東禹王實業(yè)有限公司化工分公司），甲醇（分析純，天津市光復科技發(fā)展有限公司），冰醋酸（分析純，上海中秦化學試劑有限公司），乙酸銨（NH 4 A C）（分析純，天津市標準科技有限公司），甘草酸對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號：110731-200409，約5 mg），啟脾丸（蘭州佛慈制藥股份有限公司，批號：20081、20086、20089），水為娃哈哈純凈水經(jīng)蒸餾得。

2方法與結果

2.1色譜條件

固定相為ZORBAX Eclipse XDB-C 18（4.6 mm×150 mm，5μm），流動相為0.2 molL-1醋酸銨-冰醋酸-甲醇（57.24∶2.76∶40），檢測波長為285 nm，流速為0.8 mLmin-1，進樣量為5μL，柱溫為23℃（室溫）。

2.2溶液的配制

2.2.1對照品溶液配制取橙皮苷對照品適量，精密稱定，加甲醇（色譜純）制成每1 mL含40μg的溶液。

2.2.2在對樣品溶液進行配置時，需要取啟脾丸3g，對樣品經(jīng)過精密后使用研缽進行精細的研磨，最后使用20ml的甲醇進行定量轉移，轉移至25ml的容量瓶中，提取30分鐘，對其進行冷卻后使其溫度降至室溫即可，加入甲醇，加入量以刻度為準，再對液體進行搖勻和靜置，并取出上清液，最后使用孔徑為0.45μm的微孔過濾膜對溶液記性過濾，將初濾液進行去除，剩下的續(xù)濾液留置瓶中。

2.2.3陰性樣品溶液的配制按處方比例稱取除去陳皮的其他藥材，依照啟脾丸的制備工藝和制備樣品溶液的方法制備陰性樣品溶液。

2.3專屬性試驗

分別精密吸取對照品溶液、樣品溶液、陰性樣品溶液各5μL，按2.1項下色譜條件進樣測定，樣品溶液和對照品溶液色譜圖上有一保留時間相同的特征色譜峰，保留時間為1 0.34 min，而陰性樣品溶液在此保留時間無此特征峰，如附圖1。

2.4標準曲線的繪制及線性范圍考察

分別精密吸取2.2.1項下的對照品溶液（濃度為40μgmL-1）1、3、5、7、9μL注入高效液相色譜儀中，記錄色譜圖，得橙皮苷線性回歸方程為Y=429.23 X-206.79，r=0.9998，結果表明：橙皮苷在0.04μg～0.36μg范圍內線性良好。

2.5樣品含量測定

需要取啟脾丸的樣品3.0g，對樣品經(jīng)過嚴謹?shù)姆Q量和研細，再將20ml的甲醇轉移到25ml的大小的瓶子中，使用超聲對其進行提取，時間為30min，在對其進行冷卻直至達到室溫為止，使用甲醇進行定容，最后對甲醇進行混勻。用孔徑為0.45μm的濾微孔過濾膜濾掉并且去除初濾液，取得續(xù)濾液組后即可得到樣品溶液。然后對該溶液進行精密吸取5μL，將高效液相色譜儀注入其中，將色譜圖記錄下來，其色譜圖的結果如表1 所示，在進行外標法計算出每1g的啟脾丸樣品中含有的橙皮苷的量。

2.6精密度試驗

分別精密吸取同一濃度的橙皮苷對照品溶液5μL，按上述色譜條件重復進樣5次，記錄色譜圖，結果RSD=1.179%，結果表明該方法精密度良好。

2.7穩(wěn)定性試驗

分別精密吸取批號為的供試品溶液5μL，每隔進樣次，共進樣5次，記錄色譜圖，結果RSD=3%表明供試品在內基本穩(wěn)定。

2.8重復性試驗

取同一批號（20081）樣品共5份，分別精密稱定，按2.2.4項下樣品溶液的制備方法制備，按2.1項下色譜條件下分別進樣分析，記錄色譜圖，外標法計算每份樣品中甘草酸的含量，RSD=1.21 22%。

2.9回收率試驗

采用加樣回收法，分別精密稱取已知含量為416.155 7μg g-1的同一批號（20081）樣品適量，共9份，分別精密加入一定量的橙皮苷對照品，按2.2.2項下方法制備樣品溶液，按2.1項下色譜條件下分別進樣分析，結果如表2，平均回收率為95.8778%，RSD=1.963%。

3小結

通過高效液相色譜法對啟脾丸中橙皮苷的含量進行測定后，可以得出以下結論：橙皮苷的保留時間可以達到5.6min，其進樣量可以達到0.04μg～0.36μg之間并且具有穩(wěn)定且良好的內線性關系，使用其回收率的計算公式進行計算可以得其平均回收率為95.878%，RSD=1.963%。通過高效液相色譜法對啟脾丸中的額橙皮苷進行測定可以得出以下總結，其方法不僅操作起來十分的便捷，還具有良好的重現(xiàn)性，最終達到滿意的測定效果，可以很好的應用于對啟脾丸的質量控制。

參考文獻

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