辛潔萍，王海麗，王敏，白玉瑩，徐文娟，徐新房，魏鋒，李向日*

1.北京中醫(yī)藥大學(xué) 中藥學(xué)院/北京市中藥品質(zhì)評(píng)價(jià)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，北京 102488 2.中國(guó)食品藥品檢定研究院，北京 100050

苦杏仁為薔薇科植物山杏PrunusarmeniacaL .var.ansuMaxim.、西伯利亞杏P.sibiricaL .、東北杏P.mandshurica(Maxim.) Koehne或杏P.armeniacaL .的干燥成熟種子。始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，漢代時(shí)出現(xiàn)燀制和炒制，而后逐漸出現(xiàn)了麩炒、藥汁制和童便制等[1]，《中華人民共和國(guó)藥典》(2015年版)(以下簡(jiǎn)稱為《中國(guó)藥典》)中收載了苦杏仁、燀苦杏仁和炒苦杏仁[2]。

《中國(guó)藥典》是藥品研制、生產(chǎn)、經(jīng)營(yíng)、使用和監(jiān)督管理等均應(yīng)遵循的法定依據(jù)，它的不斷修訂和完善對(duì)保證飲片質(zhì)量，確保臨床用藥安全有效有重要的意義。隨著研究的不斷深入，《中國(guó)藥典》中存在的不足之處也逐漸暴露。本課題組在研究的過(guò)程中發(fā)現(xiàn)苦杏仁的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)存在一些問(wèn)題，雖然《中國(guó)藥典》(2015年版)第一增補(bǔ)本中已對(duì)苦杏仁的【鑒別】項(xiàng)進(jìn)行了完善和規(guī)范，但仍存在標(biāo)準(zhǔn)不完善以及含量限度不符合炮制特點(diǎn)的問(wèn)題。

本研究對(duì)苦杏仁及其炮制品的顯微鑒別、水分及含量測(cè)定進(jìn)行研究，以期為苦杏仁的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)完善提供依據(jù)。

1 材料

1.1 儀器

高效液相色譜儀(Waters1525系統(tǒng)、Waters2487紫外檢測(cè)器、Empower色譜工作站，美國(guó)Waters公司)；萬(wàn)分之一及十萬(wàn)分之一電子分析天平(北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司)；FW100 高速萬(wàn)能粉碎機(jī)(天津市泰斯特儀器有限公司)；電熱鼓風(fēng)干燥箱(DHG-9070A型，常州諾基儀器有限公司)；超聲波清洗器(SB25-12DTDN型，寧波新芝生物科技股份有限公司)。

1.2 試藥

苦杏仁苷對(duì)照品 (成都克洛瑪生物科技有限公司，批號(hào)：CHB171011，純度≥98%)；純凈水(娃哈哈)；乙腈、磷酸(色譜純，美國(guó)Fisher公司)；甲醇、甲苯、氫氧化鉀(分析純，北京化工廠)。

苦杏仁、燀苦杏仁、炒苦杏仁從市場(chǎng)各收集20批，產(chǎn)地分布于河北、山東等地，編號(hào)SKR01～SKR20的樣品為苦杏仁，編號(hào)DKXR01～DKXR20的樣品為燀苦杏仁，編號(hào)CKXR01～CKXR20的樣品為炒苦杏仁，經(jīng)北京中醫(yī)藥大學(xué)李向日教授鑒定為正品，樣品信息見(jiàn)表1。

表1 苦杏仁、燀苦杏仁、炒苦杏仁樣品信息

續(xù)表1

2 方法與結(jié)果

2.1 顯微鑒別

取苦杏仁樣品于試管中，加入5%的氫氧化鉀溶液適量，加熱至用玻璃棒擠壓種皮離散為止，傾去堿液，加水洗滌后，取出至載玻片上，解剖針剝開(kāi)種皮，并除去內(nèi)種皮，取外種皮，以稀甘油裝片觀察，實(shí)驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)圖1。

注：A.類圓形；B.多邊形。圖1 苦杏仁(KXR05)外種皮細(xì)胞

2.2 水分

2.2.1水分測(cè)定方法的考察 為了確定揮發(fā)油性成分對(duì)水分測(cè)定是否有影響，本研究以炒苦杏仁為例，比較烘干法和甲苯法2種方法測(cè)定的水分結(jié)果，見(jiàn)表2。

表2 苦杏仁飲片烘干法與甲苯法水分測(cè)定結(jié)果 %

通過(guò)比較15批炒苦杏仁烘干法和甲苯法的水分測(cè)定結(jié)果，SAS進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，結(jié)果P<0.05，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，說(shuō)明苦杏仁中的揮發(fā)性成分對(duì)水分的測(cè)定有一定的影響，因此應(yīng)采用甲苯法測(cè)定炒苦杏仁的水分，而炒苦杏仁是在燀苦杏仁的基礎(chǔ)上進(jìn)行炒的操作，揮發(fā)性成分損失最多，因此苦杏仁和燀苦杏仁也應(yīng)采用甲苯法進(jìn)行水分測(cè)定。

2.2.2水分測(cè)定 采用甲苯法分別對(duì)20批苦杏仁、燀苦杏仁和炒苦杏仁樣品進(jìn)行水分測(cè)定，測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表3。

表3 苦杏仁飲片的水分 %

2.3 含量測(cè)定

采用《中國(guó)藥典》2015年版中苦杏仁【含量測(cè)定】項(xiàng)下方法進(jìn)行測(cè)定，各樣品HPLC圖見(jiàn)圖2，測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表4。

注：A. 苦杏仁苷；B. 苦杏仁；C. 燀苦杏仁；D. 炒苦杏仁。圖2 苦杏仁各飲片的HPLC圖

表4 苦杏仁各飲片中苦杏仁苷的質(zhì)量分?jǐn)?shù)%

3 結(jié)果與討論

苦杏仁為止咳平喘的常用藥，市場(chǎng)廣泛流通，臨床應(yīng)用廣，合理完善的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)對(duì)保證飲片的質(zhì)量具有重要意義。

3.1 顯微鑒別

《中國(guó)藥典》2015年版中對(duì)于苦杏仁種皮外表皮細(xì)胞的表述為：種皮外表皮細(xì)胞淺橙黃色至棕黃色，常與種皮石細(xì)胞相連，類圓形，壁常皺縮。但市場(chǎng)反應(yīng)苦杏仁的外種皮細(xì)胞除了類圓形的細(xì)胞外，還存在多邊形的細(xì)胞。因此，對(duì)于苦杏仁外種皮細(xì)胞的形狀需要進(jìn)一步驗(yàn)證，以對(duì)苦杏仁的【鑒別】項(xiàng)進(jìn)行完善。

采用水合氯醛裝片，顯微鏡下觀察苦杏仁外種皮，發(fā)現(xiàn)細(xì)胞重疊嚴(yán)重，分界不清晰。為清晰地觀察到苦杏仁外種皮細(xì)胞的形狀，本研究采用氫氧化鉀解離組織裝片法對(duì)苦杏仁樣品進(jìn)行顯微觀察。經(jīng)解離剝?nèi)?nèi)種皮稀甘油裝片后，顯微鏡下能清晰地觀察到淺橙黃色、棕黃色的外種皮細(xì)胞，與石細(xì)胞相連，呈類圓形或多邊形，細(xì)胞壁皺縮。因此，苦杏仁【鑒別】項(xiàng)對(duì)于苦杏仁外種皮細(xì)胞的表述需要進(jìn)一步的完善，建議修改為：種皮外表皮細(xì)胞淺橙黃色至棕黃色，常與種皮石細(xì)胞相連，類圓形或多邊形，壁常皺縮。

3.2 水分

苦杏仁為種子類藥材，富含較多的油脂，易走油變質(zhì)，水分的限定對(duì)保證苦杏仁飲片的質(zhì)量有重要意義?！吨袊?guó)藥典》2015年版中苦杏仁【檢查】項(xiàng)下缺少對(duì)水分限制，對(duì)保障苦杏仁的質(zhì)量存在一定問(wèn)題，因此需要對(duì)“水分”項(xiàng)進(jìn)行補(bǔ)充。烘干法是測(cè)定藥材及飲片水分最常用的方法，適用于不含揮發(fā)性藥材的水分測(cè)定，對(duì)于含揮發(fā)性成分的藥材，常用甲苯法測(cè)定。研究發(fā)現(xiàn)，苦杏仁中含有揮發(fā)性成分，超聲處理提取苦杏仁揮發(fā)油，收率最高可達(dá)4.62%[3]；微波照射-同時(shí)蒸餾萃取法提取苦杏仁揮發(fā)油，測(cè)得質(zhì)量分?jǐn)?shù)為4.5%，水蒸氣蒸餾法測(cè)得揮發(fā)油的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為1.15%[4]。因此揮發(fā)性成分的存在是否會(huì)對(duì)烘干法測(cè)定水分的結(jié)果產(chǎn)生影響需要進(jìn)一步研究，本研究比較了烘干法和甲苯法測(cè)定水分，SAS對(duì)測(cè)定結(jié)果進(jìn)行分析，結(jié)果P<0.05，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，說(shuō)明揮發(fā)性成分對(duì)水分的測(cè)定有一定影響，因此宜采用甲苯法進(jìn)行水分測(cè)定。

通過(guò)對(duì)市售苦杏仁及其飲片的水分測(cè)定，苦杏仁的平均水分為3.6%，最高含水量為4.1%；燀苦杏仁的平均水分為3.5%，最高含水量為4.7%；炒苦杏仁的平均水分為3.2%，最高含水量為4.5%。參考《中國(guó)藥典》2015年版項(xiàng)下籽仁類藥材的水分限度標(biāo)準(zhǔn)，其中酸棗仁、核桃仁項(xiàng)下水分測(cè)定方法為《中國(guó)藥典》2015年版四部通則0832第二法，限度分別為9.0%、7.0%，考慮到我國(guó)南北地域的差異，以及四季濕度的不同，因此建議將水分限度定為：苦杏仁不得超過(guò)7.0%(通則0832第四法)、燀苦杏仁不得超過(guò)7.0%(通則0832第四法)、炒苦杏仁不得超過(guò)6.0%(通則0832第四法)。

3.3 含量測(cè)定

苦杏仁的主要活性成分為苦杏仁苷，課題組前期研究發(fā)現(xiàn)，炒制可以促進(jìn)L-苦杏仁苷向D-苦杏仁苷(以下簡(jiǎn)稱“苦杏仁苷”)的轉(zhuǎn)化，使苦杏仁苷含量顯著增加[5]。而《中國(guó)藥典》2015年版中對(duì)于苦杏仁的含量限度要求為：燀苦杏仁中苦杏仁苷含量不得少于2.4%，炒苦杏仁中苦杏仁苷的的含量不得少于2.1%[2]。炒苦杏仁中苦杏仁苷含量限度反而低于燀品，不符合炒苦杏仁的炮制原理。因此，炒苦杏仁的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)有待于規(guī)范。

所測(cè)20批市售燀苦杏仁樣品中苦杏仁苷的平均質(zhì)量分?jǐn)?shù)為3.0%，炒苦杏仁的平均質(zhì)量分?jǐn)?shù)為3.4%，炒苦杏仁中苦杏仁苷較燀苦杏仁而言，平均含量較高。考慮到生產(chǎn)的實(shí)際情況，建議將炒苦杏仁的限度標(biāo)準(zhǔn)提高到與燀苦杏仁的一致，即炒苦杏仁中含苦杏仁苷(C20H27NO11)不得少于2.4%。

在對(duì)市售樣品進(jìn)行含量測(cè)定的過(guò)程中，發(fā)現(xiàn)有1批生苦杏仁和5批燀苦杏仁的苦杏仁苷含量不符合限度要求，生品不合格原因是樣品中可見(jiàn)變質(zhì)的種子和不成熟的果實(shí)；燀苦杏仁在于其燀制時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，苦杏仁苷溶解在水中，造成苦杏仁苷的流失，使其含量不達(dá)標(biāo)。另外有1批炒苦杏仁樣品的苦杏仁苷含量不符合新擬定的炒苦杏仁的苦杏仁苷含量限度標(biāo)準(zhǔn)，該批樣品顏色較深、焦斑較多，分析其原因?yàn)榕谥瞥潭容^深，造成成分分解，使得飲片質(zhì)量下降。飲片的外觀性狀與其內(nèi)在質(zhì)量有一定關(guān)系，隨著炮制程度的加深，飲片的外觀性狀發(fā)生了變化，其內(nèi)在成分的含量也隨之變化[6]。

本研究通過(guò)對(duì)苦杏仁及其飲片的顯微鑒別、水分項(xiàng)以及苦杏仁苷含量的研究，分別對(duì)《中國(guó)藥典》2015年版苦杏仁及其飲片的【鑒別】、【檢查】和【含量測(cè)定】項(xiàng)的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行完善，為保證苦杏仁藥材及其飲片的質(zhì)量提供依據(jù)。