李鑫，段麗萍,趙貝,王燕飛,吉雅圖,敖登高娃,佗拉,劉俊猛

(內蒙古自治區(qū)烏拉特后旗動物疫病預防控制中心，巴彥淖爾 巴音寶力格 015543)

包蟲病是由細粒棘球絳蟲的幼蟲所引起的人與動物共患寄生蟲病[1]。細粒棘球絳蟲的成蟲寄生在犬、狼、狐貍等食肉動物小腸內，人和牛羊等草食動物為中間宿主，通過食入被細粒棘球絳蟲孕節(jié)或蟲卵污染的食品和飼料、草場及水源后而感染，在肝臟、肺臟等器官內發(fā)育為包囊，引起嚴重的、甚至是致死性的疾病。由于棘球蚴的生長力強、體積大，其不僅可壓迫周圍組織，使之萎縮、功能障礙、生長發(fā)育受阻、生產性能下降，而且極易造成繼發(fā)感染，特別是蚴體包囊發(fā)生破裂，引起過敏反應，并可導致死亡，因而給人畜生命安全帶來威脅[2]。因此，棘球蚴病是影響社會經濟發(fā)展的重要公共衛(wèi)生問題[3-5]。全世界每年大約有200萬～300萬人患包蟲病，至少有 100 個國家存在包蟲病疫情。包蟲病在我國西藏、四川、青海、新疆、甘肅、內蒙古流行較為嚴重，2011年包蟲病患病人群上升到70萬，因家畜死亡和臟器廢棄造成的直接經濟損失逾10億元[6]。2013年，該病已引起我國政府的高度重視，并被列為重點防控的人畜共患寄生蟲病之一。同時，包蟲病也是直接導致我國西部廣大農牧民“因病致貧、因病返貧”的主要原因[7]。世界衛(wèi)生組織(WHO)和我國衛(wèi)生部、農業(yè)部十分關注包蟲病的防治，農業(yè)部將其列為二類動物疫病，衛(wèi)生部將其列入丙類傳染病。2009年農業(yè)部、衛(wèi)生部將其列入人畜共患病防控名錄。2010 年吳德榮等[8]報道了新疆阜康地區(qū)棘球蚴感染情況，發(fā)現農牧民、學生、家畜和犬的感染率分別為 0.10%、2.80%、15.54%和4.23%，其中未成年學生的感染率與直接接觸未驅蟲的犬密切相關。烏拉特后旗是內蒙古自治區(qū)確定的34個包蟲病重點防控旗縣之一。在2015年以前，由于多種原因尚未進行包蟲病的流行病學調查，也未開展過有組織的防控工作。為了貫徹實施全國包蟲病等重點寄生蟲病防治規(guī)劃(2016—2020)和自治區(qū)關于《畜間包蟲病防治技術方案(試行)》的通知，動物疫病預防控制中心從2015年開始在全旗開展犬、羊、駱駝感染狀況的流行病學調查，并且根據包蟲病在烏拉特草原感染和傳播的特點，系統開展防控研究，旨在有效降低家畜包蟲病的感染率，保障人畜安全。

1 材料與方法

1.1 犬糞的采集、處理

以嘎查(1)“嘎查”是牧區(qū)旗縣“村”的稱呼。(村)為單位，采集新鮮犬糞，統一編號，采集當天在冷藏條件下及時送實驗室，置液氮中(-196 ℃)冷凍7 d，取出室溫下解凍,然后取其1 g，加樣品處理液1 mL, 置室溫下30 min,然后3 000 r/min 10 min，取上清4 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2 羊血清采集

以嘎查(村)為單位，按比例選擇高危羊群(無主犬和狼、狐貍活動頻繁區(qū)域)，從中隨機選取羊頸靜脈無菌采血，分離血清，4 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.3 ELISA檢測試劑盒

犬細粒棘球絳蟲抗原檢測試劑盒和羊抗體檢測試劑盒，購自北京世紀元亨動物防疫技術有限公司。

1.4 疫苗

所用疫苗為羊棘球蚴(包蟲)病基因工程亞單位疫苗，由重慶澳龍生物制品有限公司提供，生產批號：2016008-1，2017007。

1.5 家畜包蟲病流行病學調查

烏拉特后旗轄區(qū)內共有6個蘇木(2)“蘇木”是牧區(qū)旗縣“鄉(xiāng)”的稱呼。(鎮(zhèn))、50個嘎查(村)，其中前達門蘇木、獲各琦蘇木、潮格鎮(zhèn)屬于純牧區(qū)，巴音鎮(zhèn)、呼和鎮(zhèn)、烏蓋蘇木為半農半牧區(qū)。動物疫病預防控制中心在2015年共組成6個包蟲病普查小分隊，分別對6個蘇木(鎮(zhèn))、50個嘎查(村)所有牛、羊、駱駝、家(牧)犬的飼養(yǎng)數量、飼養(yǎng)方式等進行入戶調查，并登記制作電子檔案，同時分別對飼養(yǎng)的牛、羊、駱駱開展抽樣檢測，并于2016年至2019年繼續(xù)開展調查檢測。

1.5.1 犬糞抗原檢測

2015—2019年分別采集50個嘎查(村)犬糞便390、300、450、450、505份進行抗原檢測。檢測方法采用ELISA法，即用犬細粒棘球絳蟲抗原檢測試劑盒，由北京世紀元亨動物防疫技術有限公司提供,批號：Eg-Ag20181201E。該試劑盒是以雙抗體夾心法檢測犬糞便中細粒棘球絳蟲抗原。試驗前將犬糞樣放入液氮凍存1周做滅活處理(如1.1所述)，在抗細粒棘球絳蟲特異性抗體包被的微孔板中加入處理過的樣品，通過酶標記、顯色反應等過程，最后用酶標儀讀取數值，判定結果。

1.5.2 羊抗體檢測

2015年，尚未進行包蟲病疫苗免疫前，從上述50個嘎查(村)采集羊血510份，分離血清，檢測感染抗體；2016—2019年連續(xù)4年進行包蟲病疫苗免疫，因而，只能檢測免疫抗體。檢測方法全部采用間接ELISA法。試驗選用羊包蟲病抗體檢測試劑盒，由北京世紀元亨動物防疫技術有限公司提供,批號：Eg-Ab2018016E，用以檢測動物血清樣本中的包蟲抗體。方法是先將樣品稀釋，與包被板結合，然后加入單克隆抗體酶標記物，進行顯色反應，用酶標儀讀取數值，判定結果。其反應原理是：將待檢羊血清加入包蟲抗原包被的微孔板中，若待測樣本中沒有包蟲抗體，抗包蟲單克隆抗體酶標記物則直接與微孔板上的包蟲抗原結合，加入顯色液后在酶作用下產生顏色反應；若樣本中存在包蟲抗體，則與微孔板上的包蟲抗原結合，抑制了抗包蟲單克隆抗體酶標記物與包蟲抗原的結合，使顯色反應受到抑制，最后通過酶標儀測定顯色反應的強弱，定性檢測待測樣品中的抗包蟲抗體。

1.5.3 屠宰環(huán)節(jié)病變臟器檢查

對轄區(qū)內綠野、游牧、友聯、青山4家屠宰企業(yè)進行牛羊駱駝棘球蚴感染情況調查，通過肉眼觀察和觸摸方式，詳細檢查屠宰動物的肝臟、肺臟表面有無囊狀物或硬結，對眼觀有泡狀物的，用剪刀剖開，察看內部有無囊壁(外囊和內囊)和囊液樣結構，一旦發(fā)現病變，立即追蹤溯源，并對病變臟器進行無害化處理[9]。牛羊駱駝棘蚴感染率(%)= 感染數/檢查數×100%。

1.6 綜合防控措施

1.6.1 犬只管理

對全旗有主犬拴養(yǎng)或籠養(yǎng)管理，對流浪犬進行撲殺，并做無害化處理。由旗農牧局、市場監(jiān)管局及執(zhí)法局協同完成。

1.6.2 犬驅蟲

從2016年開始對所轄區(qū)域的有主犬，每月第1周進行集中驅蟲，藥物選用誘食性吡喹酮。對驅蟲后3 d內所產生的糞便無害化處理，犬驅蟲全程在旗疫控中心監(jiān)督并參與下完成。

1.6.3 羊免疫

2016年對呼和鎮(zhèn)、獲各琦蘇木、巴音前達門3個蘇木(鎮(zhèn))的所有存欄羊用包蟲病基因工程亞單位疫苗進行免疫；2017—2019年連續(xù)3年對全旗轄區(qū)內所有存欄羊進行疫苗免疫，所用疫苗為羊棘球蚴(包蟲)病基因工程亞單位疫苗，頸中部上三分之一皮下注射1 mL。

1.6.4 消毒滅源

建立月消毒制度，即每月1—7日由村級防疫員監(jiān)督，農牧民對自家的棚圈、臥盤用2%的可佳(亞氯酸鈉)或5%的戊二醛進行消毒。

1.6.5 宣傳教育

每年在全旗春秋2次防疫工作部署會議上對所有防疫員、檢疫員、養(yǎng)殖犬戶等相關人員進行培訓，以圖文并茂、蒙漢雙語宣傳材料進行廣泛宣傳教育。

2 結果與分析

2.1 飼養(yǎng)情況

烏拉特后旗所轄潮格鎮(zhèn)、獲各琦蘇木、巴音前達門蘇木3個純牧區(qū)共有牧民1 128戶，牛、羊、駱駝全部放牧，牧民一般每戶平均放牧羊500只左右，放牧牛20余頭，駱駝40余峰，犬1條。半農半牧區(qū)的巴音鎮(zhèn)、呼和鎮(zhèn)、烏蓋蘇木養(yǎng)殖戶共有2 573戶，牛羊圈養(yǎng)和放牧相結合,一般每戶牧民平均飼養(yǎng)牛5頭左右、羊100只左右、犬1～2條。具體見表1。

表1 烏拉特后旗牛羊駱駝及犬存欄數調查

2.2 犬管理

對全旗發(fā)現的流浪犬全部進行撲殺，從2015年至2019年共撲殺流浪犬890條；同時對牧區(qū)和半農半牧區(qū)有主犬全部栓養(yǎng)或籠養(yǎng)。4年間累計無害化處理犬糞便達448噸。

2.3 犬驅蟲

2015年10月至2019年12月，全旗各蘇木(鎮(zhèn))和嘎查(村)共發(fā)放驅蟲藥(吡喹酮片)201 972片。其中，2015年轄區(qū)內共驅蟲犬4 668條，年驅蟲3次，累計使用驅蟲藥(吡喹酮片)15 546片；2016年轄區(qū)內共驅蟲犬4 954條，年驅蟲12次，累計使用驅蟲藥(吡喹酮片)61 280片；2017年轄區(qū)內共驅蟲犬5 154條，年驅蟲12次，累計使用驅蟲藥(吡喹酮片)62 284片；2018年轄區(qū)內共驅蟲犬5 003條，全年驅蟲12次，累計使用驅蟲藥(吡喹酮片)62 024片；2019年轄區(qū)內共驅蟲犬4 969條，年驅蟲12次，累計使用驅蟲藥(吡喹酮片)62 357片。見表2。

表2 2015—2019年各犬驅蟲統計

2.4 犬驅蟲后糞便檢測

犬驅蟲后糞便檢測結果顯示其陽性率呈現下降趨勢，即平均陽性率由2015年的11.03%下降到2019年的0.79%。其中，巴音鎮(zhèn)從7.69%下降到了0；呼和鎮(zhèn)從16.92%下降到1.33%；潮格鎮(zhèn)從9.23%下降到1.11%，前達門蘇木從9.23%下降到1%；獲各琦蘇木從13.85%下降到1.18%；烏蓋蘇木從9.234%下降到0，表明驅蟲效果顯著。詳見表3。

表3 2015—2019年犬驅蟲后糞抗原檢測效果

2015年檢測犬糞抗原390份，陽性43份，陽性率11.03%；2016年檢測犬糞抗原300份，陽性31份，陽性率10.33%；2017年檢測犬糞抗原450份，陽性33份，陽性率7.33%；2018年檢測犬糞抗原450份，陽性17份，陽性率3.78%；2019年檢測犬糞抗原505份，陽性4份，陽性率0.79%。上述結果表明，陽性率呈下降趨勢。

2.5 疫苗免疫

2016年對轄區(qū)內部分蘇木(鎮(zhèn))實施疫苗免疫，即呼和鎮(zhèn)免疫26萬只羊，前達門蘇木免疫18萬只羊，獲各琦蘇木免疫18萬只羊，3個蘇木鎮(zhèn)共免疫羊62萬只；2017年秋季對轄區(qū)內所有存欄羊126.1萬只全部實施免疫；2018年免疫羊83萬只；2019年免疫羊85萬只,4年累計免疫羊356.1萬只。見表4。

表4 2016—2019年各蘇木(鎮(zhèn))羊包蟲病免疫情況 萬只

2.6 血清學抗體檢測及抗體合格率

2.6.1 采用ELISA法進行檢測

試驗設陰性和陽性對照各1孔，臨界對照3孔，用酶標儀讀取450 nm處的吸光(A)值。即陰性對照A值>0.8，陽性對照A值<0.5，試驗成立，否則試驗失敗。結果判定標準：樣品A值>臨界對照A值的平均值，判為陰性；樣品A值≤臨界對照A值的平均值，判為陽性。

2.6.2 疫苗免疫后抗體合格率的判定標準

樣品A值≤臨界對照A值的平均值，判定為免疫合格，即判定標準與陽性判定標準相一致。

2.6.3 疫苗免疫后抗體合格率

由于2015年尚未進行疫苗免疫，從6個蘇木(鎮(zhèn))采集羊血510份，常規(guī)分離血清，用ELISA檢測感染抗體，結果陽性52份，陽性率為10%，由此表明羊自然感染包蟲病后血清中可檢測出感染抗體；從2016年對轄區(qū)內部分蘇木(鎮(zhèn))實施疫苗免疫；2017—2019年對轄區(qū)內所有存欄羊全部進行疫苗免疫。其中，2016年共檢測呼和、獲各琦、前達門3個蘇木(鎮(zhèn))免疫后羊血清426份，抗體合格率為72.07%；2017年共檢測990份，抗體合格率為75.05%；2018年共檢測885份，抗體合格率為81.02%，2019年共檢測925份，抗體合格率為83.69%。見表5。

由表5可知，除2018年烏蓋蘇木免疫合格率略有下降外，其他蘇木(鎮(zhèn))的免疫合格率均呈上升趨勢，即由2016年的72.07%上升到2019年的83.69%。

表5 2016—2019年羊抗體檢測情況

2.7 病變臟器無害化處理

常年對羊、牛、駱駝集中到轄區(qū)內4個屠宰場進行屠宰，集中屠宰占全旗屠宰動物的90%，牧民自宰食用動物僅占總屠宰量的10%左右，而且自宰動物的病變內臟通過宣傳教育后的無害化處理率達到99%以上，杜絕了食用、亂認及飼喂犬的現象。在此期間共檢疫牛羊駱駝內臟7 896套，檢出病變臟器729套，全部進行實施無害化處理。

2015年檢查牛、羊內臟2 621套，檢出病變臟器310份；2016年檢查牛、羊內臟729套，檢出病變臟器68份；2017年檢查牛、羊內臟571套，檢出病變臟器36份；2018年檢查牛、羊內臟541套，檢出病變臟器17份；2019年檢查牛、羊內臟547份，檢出病變臟器12份。見表6。

此外，2015—2019年共檢查駱駝肝、肺2 890套，檢出病變臟器286份。其中2015年檢查541套，檢出病變臟器97份；2016年檢查633套，出現病變臟器90份；2017年檢查512套，檢出病變臟器45份；2018年檢查597套，檢出病變臟器32份；2019年檢查577套，檢出病變臟器22份。見表6。

表6 牛羊駱駝包蟲病感染內臟檢查統計

由表6可看出，羊的內臟病變檢出率由2015年的11.88%下降到2019年的2.37%；駱駝的內臟病變檢出率由2015年的17.93%下降到2019年的3.81%;牛未檢出病變內臟。

2.8 消毒滅源

2015—2019年全旗共發(fā)放消毒液亞氯酸鈉16 000 L、戊二醛8 000 L，由村級防疫員對可能污染的場地進行消毒，最大限度地殺滅環(huán)境中的細粒棘球絳蟲蟲卵，累計消毒面積334 000 m2；按照消毒標準要求，地面浸濕度必須至少達到3 cm；同時撲殺流浪犬890條，全部做無害化處理。

2.9 健康教育與宣傳培訓

從2015年開始，全旗共培訓80 000人次，發(fā)放宣傳材料30 000余份，同時還做到了驅蟲有詳細記錄、明白卡進嘎查(村)所有牧民戶，免疫有記錄，驅蟲有影像，形成了各級政府重視、廣大牧民積極參與的群防群控的局面。

通過采取犬管理驅蟲、羊免疫、屠宰檢疫與病變臟器無害化處理、健康教育與宣傳培訓“四位一體”的綜合防控措施，犬、羊、駱駝的感染率從2015年的11.03%、11.88%、17.93%分別下降到2019年的0.79%、2.37%和3.81%。率先達到了國家和自治區(qū)確定的2020年犬感染率低于1%、羊感染率低于5%的穩(wěn)定控制標準。

3 討論

包蟲病是國家17種優(yōu)先防控的動物疫病之一，也是自治區(qū)重點防控的動物疫病[9]。按照國家和自治區(qū)對包蟲病防控的要求，烏拉特草原通過應用推廣“四位一體”的綜合防控措施，取得了較好的防治成果，由此表明包蟲病是可防可控的。

犬是棘球絳蟲的終末宿主，在棘球蚴的傳播中發(fā)揮了源頭性的作用。只有加強對犬的管理，通過“犬犬投藥、月月驅蟲”和對驅蟲后的犬糞進行無害化處理，才能消滅傳染源，從源頭上控制包蟲病的發(fā)生和流行[10]。

應用包蟲病基因工程亞單位疫苗防控包蟲病是目前較為適用的方法，烏拉特草原通過對轄區(qū)內的羊連續(xù)3年進行疫苗免疫，使包蟲病的病變臟器檢出率明顯下降，由此表明該疫苗具有較好的保護作用[11]。研究制定符合烏拉特草原包蟲病防治實際狀況的綜合防控措施，即犬管理驅蟲、羊免疫、屠宰檢疫與病變臟器無害化處理、健康教育與宣傳培訓即“四位一體”綜合防控措施，并在生產中應用推廣。

通過對牧民包蟲病防控知識知曉情況調查表明，在2015年之前，由于廣大農牧民對包蟲病防控知識了解的較少，防控意識不強，病變臟器隨意丟棄、喂犬，造成包蟲病不斷擴散蔓延[12]。本項研究通過全方位的宣傳、教育、培訓，使得牧民群眾對包蟲病的知曉率由2015年的15%提高到2019年的97.5%；同時對自食羊病變內臟的無害化處理意識也相應提高。此外，無論是屠宰企業(yè)還是牧民自宰，一旦發(fā)現病變臟器要全部銷毀。要求屠宰企業(yè)要建臺賬，專人負責；牧民自行屠宰發(fā)現病變臟器要上報所在蘇木獸醫(yī)站，并且要派專業(yè)人員負責監(jiān)督銷毀，同時要留下影像資料。

通過對屠宰環(huán)節(jié)的監(jiān)管，使病變臟器全部得到了無害化處理，徹底切斷了本病的傳播途徑。

用于牛、駱駝的包蟲病免疫疫苗目前仍尚未研發(fā)上市，只能采取“檢測/診斷→淘汰/隔離”的方式來進化牛群和駱駝的包蟲病[13]。

烏拉特后旗北部3個純牧區(qū)蘇木(鎮(zhèn))與蒙古國接壤，邊界線長達195 km，該區(qū)域狼、狐貍出沒頻繁。因此，對野生動物狼、狐貍的活動規(guī)律及行動軌跡的調查，有待今后進一步研究。

通過本次試驗與研究，我們認為對包蟲病的防控，首先要抓住循環(huán)鏈的關鍵環(huán)節(jié)，才能開展有效防治。因為細粒棘球絳蟲生活史需要經歷2個宿主，3個階段，對中間宿主牛羊棘球蚴病，在未確診個體患病時開展逐只防治，將有一定的盲目性；其次，對犬實施成蟲期前驅蟲，將病原控制在終末宿主體內，既可減輕對外界環(huán)境的污染，又能降低牛羊的感染，收到事半功倍的效果；另外，包蟲病的防控需要廣大牧民和政府的共同參與，因此要建立長效防控機制。一是加大包蟲病防治的財政專項投入和政策支撐[14]；二是普及包蟲病知識，開展高危行為干預，監(jiān)管屠宰流程，采取有效防治措施；三是進行犬登記建檔并加強對流浪犬的管理，檢查犬包蟲病的感染情況，及時銷毀病犬，定期驅蟲；四是禁止自行屠宰牛羊行為，實行定點屠宰，將檢出的病變臟器做無害化處理，嚴禁犬進入屠宰場；五是實施廣泛、深入、系統的健康教育、宣傳培訓，做到家喻戶曉，人人明白，要讓廣大牧民充分了解哪些是不安全的高危行為并自覺轉變，以提高自身的保護意識；六是兒童與學生是包蟲病的易感人群，在課堂內要進行包蟲病防控的系統教育，規(guī)范衛(wèi)生行為，通過學生帶動家庭，實現“小手拉大手”。

目前，烏拉特后旗在防控包蟲病中仍然存在一些問題，諸如局部地區(qū)仍有感染、各級防控機構的基礎條件較差、邊界線長、野生動物狼與狐貍活動頻繁以及經費不足等，仍需進一步系統研究和解決。其次，在檢測手段上應盡快研發(fā)PCR檢測技術，以彌補ELISA檢測技術的不足。