孫江萌，沈麗華*，楊 穎，胡春波

(南通大學(xué)附屬醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科，南通 226001)

帕金森病是老年人常見的神經(jīng)退行性疾病，臨床上主要表現(xiàn)為運(yùn)動(dòng)遲緩、肌強(qiáng)直、靜止性震顫等典型運(yùn)動(dòng)癥狀。其病因不明，認(rèn)為老齡、遺傳因素、環(huán)境因素相互作用導(dǎo)致其發(fā)生。目前全球有570萬帕金森病患者，我國患病人數(shù)達(dá)260萬[1]，為社會(huì)和家庭帶來沉重的負(fù)擔(dān)。α-突觸核蛋白(alpha-synuclein,αsyn)是由SNCA基因編碼的一種可溶性蛋白質(zhì)，在中樞神經(jīng)系統(tǒng)中高度表達(dá)，α-syn在帕金森病狀態(tài)下可發(fā)生病理性聚集，由無序單體聚集成寡聚體、原纖維、纖維等形態(tài)，或進(jìn)行翻譯后修飾如磷酸化、硝化等，并參與路易小體的形成[2]。研究[3]發(fā)現(xiàn)路易小體中大約90%的α-syn存在磷酸化修飾，遠(yuǎn)高于生理狀態(tài)下α-syn發(fā)生磷酸化修飾的概率。蛋白降解機(jī)制失調(diào)是帕金森病發(fā)生發(fā)展的一個(gè)核心因素。泛素蛋白酶體系統(tǒng)是細(xì)胞內(nèi)重要的非溶酶體蛋白降解途徑，參與細(xì)胞內(nèi)80%以上蛋白質(zhì)的降解。泛素羧基末端水解酶L1 (ubiquitin carboxy-terminal hydrolase L1,UCH-L1)是泛素蛋白酶體系統(tǒng)中的一種多功能酶，UCH-L1 S18Y位點(diǎn)基因突變與帕金森病發(fā)病存在相關(guān)性，目前關(guān)于血清UCH-L1改變與急性腦卒中、顱腦外傷等疾病的相關(guān)性研究較多，而血清UCHL1在帕金森病中的研究甚少。本研究通過分析血清α-syn及UCH-L1水平與帕金森病之間的相關(guān)性，探討血清α-syn及UCH-L1作為帕金森病診斷生物標(biāo)志物的潛在價(jià)值。

1 對(duì)象和方法

1.1 研究對(duì)象 選取2019年4月—2020年2月在南通大學(xué)附屬醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科門診就診的帕金森病患者58例(帕金森病組)，均符合2015年運(yùn)動(dòng)障礙協(xié)會(huì)《臨床帕金森病診斷標(biāo)準(zhǔn)》[4]。排除標(biāo)準(zhǔn)：存在明確病因(如腦部腫瘤、感染、外傷、藥物、中毒等)導(dǎo)致的繼發(fā)性帕金森綜合征者；伴帕金森表現(xiàn)的其他神經(jīng)變性疾病者：如多系統(tǒng)萎縮、核上性麻痹等；近期發(fā)生腦卒中或顱腦外傷者；凝血功能異常、全身感染性疾病、惡性腫瘤等嚴(yán)重疾病者。根據(jù)Hoehn-Yohr(H-Y)分級(jí)表將帕金森病組分為早期組(1～2.5級(jí))42例與中晚期組(3～5級(jí))16例，同時(shí)選取性別、年齡與帕金森病患者相匹配的我院同期健康體檢者作為對(duì)照組，共納入42例。所有入選對(duì)象均簽署知情同意書。

1.2 研究方法 抽取所有研究對(duì)象晨間空腹肘正中靜脈血標(biāo)本10 mL，高速恒溫離心機(jī)2～8 ℃條件下2 000 g/min離心10 min，取上清-80 ℃冰箱保存，分別利用酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)檢測(cè)所有受試者血清總α-syn、磷酸化α-syn水平及UCH-L1水平。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 所有數(shù)據(jù)均應(yīng)用SPSS 21.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析，符合正態(tài)分布的計(jì)量資料以表示，計(jì)數(shù)資料以百分比(%)表示。符合正態(tài)分布的計(jì)量資料兩組間比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，非正態(tài)分布資料采用秩和檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)，采用受試者工作特征(receiver operating characteristic,ROC)曲線，計(jì)算相關(guān)參數(shù)對(duì)診斷帕金森病的敏感度和特異度。P＜0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 一般資料比較 帕金森病組男28例，女30例，年齡(64.93±9.88)歲；對(duì)照組男20例，女22例，年齡(62.05±8.76)歲，兩組年齡、性別比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2＝0.01、t＝-1.51,P＝0.95、0.13)。帕金森病早期組與中晚期組年齡、性別、發(fā)病年齡比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P＞0.05)，病程比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)，見表1。

表1 帕金森病早期組與中晚期組一般資料的比較(,n,%)

表1 帕金森病早期組與中晚期組一般資料的比較(,n,%)

2.2 各指標(biāo)水平比較 帕金森病組與對(duì)照組血清總α-syn、磷酸化α-syn、UCH-L1比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P＜0.05)，見表2；早期組與中晚期組血清磷酸化α-syn比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，血清總α-syn、UCH-L1比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，見表3。

表2 帕金森病組與對(duì)照組血清α-syn、UCH-L1比較()

表2 帕金森病組與對(duì)照組血清α-syn、UCH-L1比較()

表3 帕金森病早期組與中晚期組血清α-syn、UCH-L1比較()

表3 帕金森病早期組與中晚期組血清α-syn、UCH-L1比較()

2.3 血清總α-syn、磷酸化α-syn、UCH-L1對(duì)帕金森病的預(yù)測(cè)價(jià)值 對(duì)帕金森病組及對(duì)照組血清總α-syn、磷酸化α-syn、UCH-L1行ROC曲線分析，血清總α-syn、磷酸化α-syn、UCH-L1識(shí)別帕金森病患者的曲線下面積(area under curve,AUC)分別為0.147(95%CI:0.068～0.227)、0.890(95%CI:0.829～0.952)及0.276(95%CI:0.178～0.375)，其中血清磷酸化α-syn識(shí)別帕金森病患者的AUC＞0.5，截?cái)嘀禐?2.33 pg/mL，敏感度為89.7%，特異度為71.4%，對(duì)帕金森病有較高的診斷價(jià)值，見圖1。

3 討論

目前帕金森病臨床診斷主要依靠患者的臨床癥狀及左旋多巴的治療效果等，對(duì)帕金森病早期生物標(biāo)志物的篩選一直是醫(yī)學(xué)界亟待解決的問題。近年來對(duì)帕金森病患者血液α-syn水平的研究較多，但結(jié)果有所差異[5-7]。本研究結(jié)果顯示帕金森病組血清總α-syn水平較對(duì)照組低(P＜0.05)，磷酸化α-syn水平較對(duì)照組高(P＜0.05)；且早期組磷酸化α-syn水平較中晚期組低(P＜0.05)。提示血清總α-syn水平、磷酸化α-syn與帕金森病發(fā)生可能存在相關(guān)性，且磷酸化α-syn可能與帕金森病的病情進(jìn)展密切相關(guān)。本研究結(jié)果與Q.X.LI等[8-9]的研究結(jié)果相符。ROC曲線分析發(fā)現(xiàn)血清磷酸化α-syn對(duì)帕金森病有較高的診斷價(jià)值，提示血清磷酸化α-syn是診斷帕金森病的較好的潛在生物標(biāo)志物。

研究[10-11]提示泛素蛋白酶體系統(tǒng)功能失調(diào)的溶酶體清除機(jī)制也能促進(jìn)可溶性α-syn低聚物的積累，可能是帕金森病進(jìn)展的關(guān)鍵因素之一，一氧化氮可通過損害泛素蛋白酶體系統(tǒng)而導(dǎo)致蛋白質(zhì)異常積累[12]。UCH-L1是泛素蛋白酶體系統(tǒng)中的一種多功能酶，帕金森病模型大鼠中腦黑質(zhì)區(qū)UCH-L1較正常組明顯減少。E.LEROY等[13]在一個(gè)常染色體顯性遺傳的帕金森病家系中發(fā)現(xiàn)UCH-L1基因的錯(cuò)義突變(I93M)；另D.M.MARAGANORE等[14]還發(fā)現(xiàn)UCHL1 S18Y位點(diǎn)基因突變與帕金森病發(fā)病也存在相關(guān)性。有研究[15-16]顯示血清UCH-L1在急性腦卒中、顱腦損傷中有變化，但對(duì)血UCH-L1水平與帕金森病的相關(guān)性研究尚未見報(bào)道，本研究結(jié)果顯示帕金森病血清UCH-L1水平較對(duì)照組低(P＜0.05)，考慮在帕金森病病理狀態(tài)下，泛素-蛋白酶體系統(tǒng)受損，UCHL1水平下降，細(xì)胞內(nèi)異常蛋白質(zhì)的清除能力減弱，細(xì)胞毒性增強(qiáng)，導(dǎo)致神經(jīng)元的壞死、丟失。

但本研究作為一項(xiàng)病例對(duì)照研究，樣本量偏少，可能存在選擇偏倚，有待在今后擴(kuò)大樣本量，進(jìn)一步提高研究質(zhì)量。