龍 云,麻夢遠,石維宏 ,龍 婷 ,羅 嬋 ,瞿 吉 ,李劍波

（1.湖南德農(nóng)牧業(yè)集團有限公司,湖南湘西416000；2.湖南潤康農(nóng)牧科技有限公司，湖南湘西416000；3.湖南省畜牧獸醫(yī)研究所，湖南長沙410131）

隨著中國肉牛產(chǎn)業(yè)的快速發(fā)展，大型養(yǎng)殖場不斷涌現(xiàn)，食肉牲畜的來源越來越緊張，牛是單胎動物，繁殖周期長，牛育種成為阻礙牛肉產(chǎn)業(yè)發(fā)展的瓶頸。通過及時對青年和成年牛進行配種來縮短產(chǎn)犢間隔是加快母牛育種的關(guān)鍵。目前，人工授精技術(shù)已被廣泛使用，并且在優(yōu)良種公牛的品種改良、群體選擇和快速推廣中發(fā)揮了重要作用。母牛的正常生殖功能和及時、準(zhǔn)確地確定發(fā)情是母牛人工受精的基礎(chǔ)，但生產(chǎn)過程中也會發(fā)生異常狀況，例如安靜發(fā)情、卵巢靜止、卵巢囊腫和持久黃體，從而影響母牛正常的發(fā)情期和生殖胎兒，延長了產(chǎn)犢間隔、增加了淘汰率、提高了飼養(yǎng)成本，給牛的繁殖帶來巨大損失[1,2]。定時輸精技術(shù)是將同期發(fā)情技術(shù)和人工授精技術(shù)兩者結(jié)合使用發(fā)展而來，近幾年來在肉牛規(guī)模養(yǎng)殖場中使用的比較廣泛。此技術(shù)通過注射外源激素，控制和誘導(dǎo)母牛的發(fā)情時間，從而使母牛在某一時間段發(fā)情并且排卵，同時在特定的時間內(nèi)進行人工授精，這樣可以不用進行發(fā)情鑒定，能有效提高配種的效率，還可以解決母牛安靜發(fā)情、持久性黃體等問題，從而提高母牛繁殖效率，便于肉牛繁育場進行集中繁殖、集中飼養(yǎng)管理和集中育肥出欄[3]。

1 材料與方法

1.1 試驗時間地點

試驗地點為湖南德農(nóng)牧業(yè)集團有限公司國家級湘西黃牛保種場，收集整理場內(nèi)近3 年來的配種孕檢記錄，時間從2017 年5 月至2020 年2 月，孕檢記錄延續(xù)至2020 年5 月。

1.2 試驗牛及分組

試驗牛群為膘情中等、空懷的湘西黃牛母牛，年齡在1.5～6.5 歲左右，產(chǎn)后60 天以上，均有正常的發(fā)情周期。適配青年母牛出現(xiàn)自然發(fā)情表現(xiàn)后，采用常規(guī)人工授精；滿24 月齡的青年母牛未觀察到自然發(fā)情者，采用同期發(fā)情定時輸精處理。經(jīng)產(chǎn)母牛在產(chǎn)后60d 內(nèi)有自然發(fā)情表現(xiàn)，可常規(guī)授精；產(chǎn)后60d 未觀察到發(fā)情表現(xiàn)的母牛，可采用同期發(fā)情定時輸精處理。

1.3 試劑耗材

GnRH、PGF2α、CIDR、LRH-A3 均購自寧波市三生藥業(yè)有限公司。

1.4 發(fā)情鑒定

通過觀察母牛外部癥狀表現(xiàn)，如陰道充血腫脹,陰道粘膜潮紅,有黏液流出并相互爬跨時，疑似發(fā)情。

1.5 常規(guī)人工授精

觀察到母牛發(fā)情時，經(jīng)直腸檢查卵巢上的卵泡情況進行適時人工授精。

1.6 同期發(fā)情程序

1.6.1 兩次 PGF2a 法

對空懷母牛第0d 注射PGF2a，第9d 再次注射PGF2a，36h-48h 小時觀察發(fā)情適時配種。

1.6.2 定時輸精配種方法

兩次GnRH 法：對空懷母牛第0d 埋置CIDR并注射GnRH，第10d 撤栓并注射PGF2a（0.4mg/頭），11d 進行第 2 次 GnRH 注射，第 12d 早上和下午分別人工輸精1 次。

一次GnRH 法：對空懷母牛第0d 埋置CIDR并注射GnRH，第10d 撤栓并注射PGF2a（0.4mg/頭），第12d 早上和下午分別人工輸精1 次。

一次GnRH+促排法：對空懷母牛第0d 埋置CIDR 并注射GnRH，第10d 撤栓并注射PGF2α（0.4mg/ 頭），第12d 早上和下午分別人工輸精1次。第一次人工授精時注射LRH-A3。

1.7 妊娠檢查

在人工授精后60d 后，通過直腸檢查法確認受胎情況。

1.8 統(tǒng)計分析

對所有試驗牛只的情期受胎率、發(fā)情率、妊娠率進行統(tǒng)計分析，數(shù)據(jù)采用spss20.0 軟件進行t 檢驗。

2 結(jié)果

2.1 不同定時輸精方法對湘西黃牛情期受胎率、發(fā)情率與妊娠率的影響

共收集了保種場2017 年至2019 年的常規(guī)配種記錄和同期發(fā)情處理記錄（表1）。其中常規(guī)輸精的受胎率為60.1%，高于同期發(fā)情的50.7%，但兩種方法對受胎率的影響差異不顯著（p＞0.05）。

表1 不同配種方式對湘西黃牛受胎率的影響

2.2 不同同期發(fā)情定時輸精方法對湘西黃牛情期受胎率、發(fā)情率與妊娠率的影響

對傳統(tǒng)的兩次PGF2a 法和定時輸精法進行比較后發(fā)現(xiàn)（表2），定時輸精法的發(fā)情率達到了97.5%，極顯著高于兩次 PGF2a 法的 63.2%（p＜0.01）。定時輸精法的受胎率為55.3%，顯著高于兩次PGF2a 法的 37.5%（p＜0.05）。

表2 不同同期發(fā)情方法對湘西黃牛發(fā)情率、受胎率的影響

2.3 不同定時輸精配種方法對湘西黃牛情期受胎率、發(fā)情率與妊娠率的影響

對3 種定時輸精法進行比較后發(fā)現(xiàn)（表3），不同的定時輸精方法在受胎率和發(fā)情率指標(biāo)上差異都不顯著達（p＞0.05）。但是采用“一次 GnRH+ 促排”方法后，母牛發(fā)情率達到了98.1%，受胎率達到了58.3%。

表3 不同定時輸精方法對湘西黃牛發(fā)情率、受胎率的影響

2.4 不同同期發(fā)情配種方法成本效益分析

對所采用的所有同期發(fā)情方法進行成本效益分析后結(jié)果顯示（表4），未做同期發(fā)情處理、兩次PGF2a 法、兩次GnRH 法、一次GnRH 法和一次GnRH+促排法對母牛群進行處理后，空懷牛群實際每頭牛的經(jīng)濟損失分別為900 元、707.8 元、562.5 元、565.7 元和 501.4 元。

表4 同期發(fā)情處理期內(nèi)的成本計算

3 討論與分析

3.1 不同配種方法對湘西黃牛發(fā)情率、情期受胎率與妊娠率的影響

在本研究中，常規(guī)輸精的受胎率為60.1%，要高于同期發(fā)情處理后50.7%的受胎率（p＞0.05）。雖然未達到顯著差異水平，但說明湘西黃牛母牛采用常規(guī)輸精的配種方式受胎率還是要高于同期發(fā)情處理。主要原因可能是進行常規(guī)輸精的牛群繁殖性能較為正常，沒有繁殖障礙疾病現(xiàn)象，每次發(fā)情時激素分泌水平、外部表現(xiàn)和排卵情況都較為正常，所以配種受胎率較高。而進行同期發(fā)情的牛只多為連續(xù)2 個情期未發(fā)情或發(fā)情癥狀不明顯的母牛，這些母?？赡艽嬖谝恍┥诚到y(tǒng)的疾病，直接影響正常繁殖機能，如卵巢疾病導(dǎo)致不能排卵或排卵不正常。而生殖道炎癥直接影響精子與卵子的結(jié)合或結(jié)合后不能正常著床等[4]。

3.2 不同同期發(fā)情配種方法對湘西黃牛發(fā)情率、情期受胎率與妊娠率的影響

在本研究中，采用了傳統(tǒng)的兩次PGF2a 法和定時輸精法進行比較。結(jié)果發(fā)現(xiàn)定時輸精的發(fā)情率和受胎率都要顯著高于兩次PGF2a 法。在定時輸精法中應(yīng)用了CIDR 栓。CIDR 栓的原理是當(dāng)CIDR埋植進母牛陰道內(nèi)后，持續(xù)釋放促黃體素，從而抑制促卵泡素的生成。當(dāng)撤出陰道栓后，在母牛體內(nèi)的促黃體素急劇下降，這時候卵泡素加速分泌，促進卵泡發(fā)育成熟。因此，撤栓后母牛在外源激素的作用下使其體內(nèi)孕酮水平，從而使處于不同發(fā)情周期的母牛達到同期發(fā)情的目的[5]。所以定時輸精發(fā)的發(fā)情率要顯著高于傳統(tǒng)的兩次PGF2a 法。在定時輸精法中同時應(yīng)用了GnRH。GnRH 的同期發(fā)情應(yīng)用主要歸因于GnRH 的黃體或卵泡功能的變化，這些變化間接受到LH 和FSH 釋放調(diào)節(jié)的影響，并在發(fā)情周期的中間促進卵泡發(fā)育和促黃體素分化，從而提高受胎率[6]。

3.3 不同定時輸精方法對湘西黃牛發(fā)情率、受胎率的影響

在經(jīng)典的定時輸精發(fā)中，PG 注射后2 天注射GnRH 時，內(nèi)源性LH 之前的排卵峰提前出現(xiàn)，這導(dǎo)致黃體退縮繼續(xù)成熟并促進排卵后主要卵泡的發(fā)育。同時，它促進了黃體的發(fā)育并形成了上等黃體的黃體，從而減少了由于接受時黃體的發(fā)育所引起的不育，從而提高了懷孕期間的妊娠率[7]。但在本研究中，一次GnRH 法和兩次GnRH 法在發(fā)情率和受胎率不顯著。說明增加外源性激素的劑量，并不一定能提高湘西黃牛同期發(fā)情效果。而且多次進行激素注射，可能會加大母牛的應(yīng)激，對母牛以后繁殖性能造成影響。但在一次GnRH+促排法中，在第一次輸精的同時注射了促排素，受胎率有所提高。說明前期注射的GnRH 的劑量已間接促進了卵泡的發(fā)育。后期再注射促排素后，受胎率就會提高。

3.4 不同同期發(fā)情配種方法成本效益分析

如果母牛長期不發(fā)情或不受孕，其飼養(yǎng)成本就會大大增加，養(yǎng)殖經(jīng)濟效益就會降低。因此，對于發(fā)情異常的母牛和分娩后50 天內(nèi)發(fā)情的母牛，應(yīng)及時檢查生殖系統(tǒng)，并應(yīng)及時處理診斷為生殖功能障礙的牛。在采用治療的同時，需要對治療成本、治療效果進行綜合評價，篩選出最適合牛場的一種處理方式。在本研究中，采用一次GnRH+促排法后的綜合經(jīng)濟效益好。按淘汰一頭種牛直接虧損900 元計算，采用一次GnRH+促排法后，可降低近400 元的經(jīng)濟損失。 □