河南省信陽(yáng)市淮濱縣疾病預(yù)防控制中心（464400）李和梅

乙型肝炎作為一種病毒感染性疾病，目前全球約3.5億乙型肝炎病毒感染者[1]。我國(guó)是乙型肝炎病毒感染大國(guó)，長(zhǎng)期感染乙肝病毒可逐步發(fā)展為肝硬化、肝衰竭和肝癌，有研究顯示世界范圍內(nèi)每年有100多萬(wàn)死于HBV感染所導(dǎo)致的疾病[2][3]。HBV病毒本身并不能損傷肝細(xì)胞，乙肝病毒利用肝細(xì)胞攝取的養(yǎng)料賴以生存并在肝細(xì)胞內(nèi)復(fù)制。病毒復(fù)制的乙肝表面抗原、乙肝e抗原和乙肝核心抗原釋放在肝細(xì)胞膜上，激發(fā)人體的免疫系統(tǒng)來(lái)辨認(rèn)，并發(fā)生反應(yīng)從而造成肝細(xì)胞的損傷和破壞[4]。HBV特異性T細(xì)胞免疫及其產(chǎn)生的細(xì)胞因子具有參與免疫應(yīng)答、清除病毒的作用，但其發(fā)生發(fā)展的免疫機(jī)制尚不清楚。ICOS及ICOSL作為T淋巴細(xì)胞活化、增殖及分化的免疫正性共刺激分子，在免疫傳染性疾病及腫瘤方面發(fā)揮著重要作用，但在HBV感染中的作用尚不明確。本研究選取了86例乙肝患者為研究對(duì)象，通過(guò)檢測(cè)ICOS及ICOSL水平，分析其對(duì)乙肝患者病情的影響。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取2015年9月～2018年1月86例在我院接受治療的乙肝患者為實(shí)驗(yàn)組，男性47例，女性39例，年齡23～68歲，平均年齡（43.27±3.31）歲，病程6～17月，平均病程（11.35±2.17）月，輕度40例，中度29例，重度17例。納入標(biāo)準(zhǔn)：①研究對(duì)象乙型肝炎病毒表面抗原陽(yáng)性且符合《慢性乙型肝炎防治指南》的診斷標(biāo)準(zhǔn)；②病程超過(guò)6個(gè)月；③患者均未進(jìn)行免疫調(diào)節(jié)及抗病毒治療。排除標(biāo)準(zhǔn)：①患有肝硬化、肝癌或其他病毒性肝炎的患者；②存在自身免疫性疾病，孕婦、酗酒的患者；③患有精神疾病、認(rèn)知功能障礙、惡性腫瘤或重要臟器病變疾病的患者。選取同期86例健康體檢者作為對(duì)照組，男性45例，女性41例，年齡20～70歲，平均年齡（45.02±3.41）歲。對(duì)照組乙型肝炎標(biāo)志物測(cè)定為陰性，排除標(biāo)準(zhǔn)與實(shí)驗(yàn)組相同。本研究已經(jīng)院倫理委員會(huì)審核同意，患者及家屬均簽署知情協(xié)議書(shū)。

1.2 方法

1.2.1 HBV血清標(biāo)志物檢測(cè) 采用電化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)HBsAg，使用儀器為羅氏cobase601電化學(xué)發(fā)光全自動(dòng)免疫分析系統(tǒng)。陽(yáng)性參考范圍：HBsAg>0.05IU/mL、HBeAg>1.0S/CO。

1.2.2 ALT檢測(cè) 采用Modular DDPP全自動(dòng)生化分析儀操作說(shuō)明書(shū)進(jìn)行檢測(cè)。

1.2.3 HBV DNA檢測(cè) 使用實(shí)時(shí)熒光定量PCR法檢測(cè)HBV DNA定量，試劑又達(dá)安基因有限公司提供。

1.2.4 ICOS及ICOSL水平檢測(cè)。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 本次研究采用SPSS15.0軟件處理數(shù)據(jù)。計(jì)數(shù)資料以頻數(shù)表示，比較采用χ2檢驗(yàn)；計(jì)量資料以（±s）表示，比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，采用非配對(duì)Mann-Whiney rankSumtest檢驗(yàn)，并且進(jìn)行相關(guān)性驗(yàn)證P ＜0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

附表1 檢測(cè)對(duì)象基本情況比較

附表2 各組HBsAg、HBeAg、ALT及HBV-DNA指標(biāo)比較

附表3 PBMC中共刺激分子的mRNA水平

2 結(jié)果

2.1 檢測(cè)對(duì)象基本情況比較 86例實(shí)驗(yàn)組根據(jù)血清標(biāo)志物HBsAg、HBeAg、ALT及HBV DNA檢測(cè)結(jié)果分為免疫耐受期組、免疫活躍期組合免疫低復(fù)制期組。各組基本情況如附表1所示。

2.2 各組HBsAg、HBeAg、ALT及HBVDNA指標(biāo)比較 免疫耐受期HBsAg、HBeAg及HBV-DNA水平高于其余兩組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P ＜0.05），免疫活躍期ALT水平最高，與兩組比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見(jiàn)附表2。

2.3 P

BMC中共刺激分子的mRNA水平 免疫耐受期、免疫活躍期及免疫低復(fù)制期的患者ICOS及ICOSL水平均高于對(duì)照組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P ＜0.05），但三組患者比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。見(jiàn)附表3。

3 討論

乙型肝炎病毒逃避免疫系統(tǒng)的監(jiān)控才能夠存活，因此免疫監(jiān)視和免疫應(yīng)答能有效預(yù)防和消除疾病。系統(tǒng)刺激信號(hào)在機(jī)體產(chǎn)生細(xì)胞免疫效益的過(guò)程中發(fā)揮著重要的作用，ICOS及ICOSL結(jié)合介導(dǎo)協(xié)同刺激信號(hào)能有效提高T細(xì)胞活性，促進(jìn)T細(xì)胞增殖和細(xì)胞因子的分泌。ICOS是由2個(gè)亞單位構(gòu)成的同源二聚體，屬于Ⅰ型跨膜蛋白，相關(guān)研究顯示ICOS/ICOSL與炎性反應(yīng)、自身免疫性疾病相關(guān)。ICOS缺陷會(huì)導(dǎo)致c-Maf轉(zhuǎn)錄降低及細(xì)胞因子IL-21分泌減少，引發(fā)T細(xì)胞功能障礙及記憶性T細(xì)胞減少，破壞效應(yīng)T細(xì)胞及調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的平衡。

濾泡輔助T細(xì)胞的主要作用為參與抗體類別的轉(zhuǎn)換和體液免疫，而ICOS/ICOSL對(duì)濾泡輔助T細(xì)胞的形成也有影響。ICOS/ICOSL信號(hào)通路能促進(jìn)T細(xì)胞CD40配體的表達(dá)，CD40配體復(fù)合物又能促進(jìn)B細(xì)胞成熟和存活，對(duì)B細(xì)胞和T細(xì)胞的免疫應(yīng)答都產(chǎn)生影響，從而在體液免疫和細(xì)胞免疫中發(fā)揮重要的作用。在本研究中，免疫耐受期、免疫活躍期及免疫低復(fù)制期的患者ICOS及ICOSL水平均高于對(duì)照組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P ＜0.05），但三組患者比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），表明乙肝患者ICOS及ICOSL水平的變化影響機(jī)體T細(xì)胞及B細(xì)胞，改變機(jī)體對(duì)HBV的免疫反應(yīng)性。