周麗 李軍娥 童要聰

[摘要]目的 探討全血保存溫度和時間對冷沉淀凝血因子質(zhì)量的影響。方法 選取2020年1～6月佛山市中心血站采集的120袋（200 ml/袋）全血作為研究對象，平均分成室溫組和低溫組，每組各60袋，每組平均分為3份（20袋/份），分別于室溫（20～24℃）和低溫（2～6℃）條件下保存8、12、24 h，離心得到新鮮冰凍血漿，并于1周內(nèi)制備出冷沉淀凝血因子，測定冷沉淀凝血因子中的凝血因子Ⅷ（FⅧ）含量、纖維蛋白原（FIB）含量、FⅧ合格率及FIB合格率，比較不同保存溫度、不同保存時間對全血冷沉淀凝血因子中FⅧ含量、FIB含量、FⅧ合格率及FIB合格率的影響。結(jié)果 保存8、12、24 h，兩組的FⅧ、FIB含量比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。兩組保存12 h的FⅧ、FIB含量與保存8 h比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）;兩組保存24 h的FⅧ、FIB含量均低于保存8 h，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。低溫組保存8、12、24 h的FⅧ合格率分別為100.00%、95.00%、90.00%，與室溫組的100.00%、95.00%、85.00%比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）;低溫組保存8、12、24 h的FIB合格率分別為100.00%、100.00%、95.00%，與室溫組的100.00%、100.00%、95.00%比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。兩組保存12、24 h的FⅧ、FIB合格率與保存8 h比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。結(jié)論 在24 h內(nèi)全血室溫保存與低溫保存對冷沉淀凝血因子活性的影響無明顯差異。

[關(guān)鍵詞]冷沉淀;凝血因子Ⅷ;纖維蛋白原;室溫;低溫

[中圖分類號] R457.1 ? ? ? ? ?[文獻(xiàn)標(biāo)識碼] A ? ? ? ? ?[文章編號] 1674-4721（2020）9（c）-0161-04

[Abstract] Objective To investigate the effect of whole blood storage temperature and time on quality of cryoprecipitate coagulation factor. Methods A total of 120 bags （200 ml/bag） of whole blood collected in Central Blood Station of Foshan City from January to June in 2020 were selected as research objects and divided into room temperature group and low temperature group with 60 bags in each group. Each group was divided into three parts on average， 20 bags per part， and stored at room temperature （20-24℃） and low temperature （2-6℃） for 8， 12 and 24 h. Fresh frozen plasma was obtained by centrifugation， and cryoprecipitated coagulation factor was prepared within one week. The content of coagulation factor Ⅷ （FⅧ）， the content of fibrinogen （FIB）， the qualified rate of FⅧ and the qualified rate of FIB in cryoprecipitated coagulation factor were determined. The content of FⅧ， the content of FIB， the qualified rate of FⅧ and the qualified rate of FIB were compared between the two groups at different storage temperature and time. Results There were no statistically significant differences in the contents of FⅧ and FIB stored for 8， 12， 24 h between the two groups （P>0.05）. There were no statistically significant differences in the contents of FⅧ and FIB stored for 8 h and 12 h （P>0.05）. The contents of FⅧ and FIB stored for 24 h in the two groups were higher than those stored for 8 h， and the differences were statistically significant （P<0.05）. In the low temperature group stored for 8， 12， 24 h， the FⅧ qualified rate was 100.00%， 95.00% and 90.00% respectively， compared with room temperature group of 100.00%， 95.00%， 85.00%， there were no statistically significant differences （P>0.05）. In the low temperature group stored for 8， 12， 24 h， the qualified rates of FIB were 100.00%， 100.00%， and 95.00%， respectively， which showed no statistically significant differences compared with 100.00%， 100.00%， and 95.00% in the room temperature group （P>0.05）. The FIB qualified rates of the two groups stored for 12， 24 h were compared with stored for 8 h， and the differences were not statistically significant （P>0.05）. Conclusion There is no significant difference in the activity of cryoprecipitated coagulation factor between whole blood stored at room temperature and at low temperature within 24 h.

[Key words] Cryoprecipitate; Coagulation factor Ⅷ; Fibrinogen; Room temperature; Low temperature

輸血是現(xiàn)代醫(yī)學(xué)不可或缺的療法，成分血輸注為輸血治療的主要類型。冷沉淀制備是成分血制備的常規(guī)項目，以新鮮冰凍血漿為原料血漿，其中包含豐富的凝血因子，在凝血障礙相關(guān)疾病或大量失血治療中應(yīng)用廣泛[1-2]。凝血因子Ⅷ（FⅧ）為冷沉淀的主要成分，因其穩(wěn)定性較差，制備過程中極易失活，導(dǎo)致冷沉淀制備質(zhì)量不合格，增加醫(yī)療資源的浪費[3]。臨床多要求血液采集后于冷藏環(huán)境中保存，最好在6～8 h內(nèi)將血漿分離，速凍成固態(tài)成分血。然而在站外采血時難以對其保存時間及溫度進(jìn)行有效管控，這些因素對冷沉淀制備質(zhì)量的影響一直是關(guān)注的重點問題。本研究分別在室溫和低溫環(huán)境下進(jìn)行全血保存，分析貯存環(huán)境及不同的原料血漿制備時間對冷沉淀凝血因子質(zhì)量的影響，旨在為優(yōu)化冷沉淀凝血因子制備流程提供參考依據(jù)，現(xiàn)報道如下。

1資料與方法

1.1一般資料

選取2020年1～6月佛山市中心血站采集的120袋（200 ml/袋）全血進(jìn)行研究。全血納入標(biāo)準(zhǔn)：①所有獻(xiàn)血者均符合《獻(xiàn)血者健康檢查要求》[4];②采集全血每袋均為200 ml，符合《血站技術(shù)操作規(guī)程（2015版）》[5]相關(guān)要求。全血排除標(biāo)準(zhǔn)：①采集操作不規(guī)范的血液;②全血保存、制備過程中出現(xiàn)器械質(zhì)量問題的血液。

血站工作人員18名，其中女12名，男6名;年齡26～42歲，平均（32.05±5.19）歲。工作人員納入標(biāo)準(zhǔn)：工作人員對研究內(nèi)容知曉，并簽署知情同意書。排除標(biāo)準(zhǔn)：①在研究期間離職者;②研究期間長期休假者。本研究經(jīng)佛山市中心血站醫(yī)學(xué)倫理委員會批準(zhǔn)。

1.2方法

1.2.1分組方法 ?將120袋全血（200 ml/袋）平均分成室溫組和低溫組，每組各60袋，每組平均分為3份（20袋/份），分別于室溫（20～24℃）和低溫（2～6℃）條件下保存8、12、24 h。

1.2.2冷沉淀制備方法 ?將不同保存時間的全血進(jìn)行離心及血漿分離，應(yīng)用MBF21L型全自動水平接觸式平板速凍機（盧森堡多美達(dá)責(zé)任有限公司）-50℃速凍，速凍完畢后于-25℃以下冰箱中保存，并于1周內(nèi)應(yīng)用WT-CⅡ型全自動冷沉淀制備儀（佛山沃塘醫(yī)療科技有限公司）進(jìn)行冷沉淀制備。

1.3觀察指標(biāo)及評價標(biāo)準(zhǔn)

比較不同保存時間兩組的FⅧ、纖維蛋白原（FIB）含量及合格率。

①將不同時間段待檢測冷沉淀產(chǎn)品置于恒溫水浴箱（37℃），充分融化混勻后進(jìn)行熱合，采集樣品5 ml左右，檢測FⅧ和FIB含量。②按照《全血及成分血質(zhì)量要求》[6]，要求每袋200 ml全血制成的冷沉淀中FⅧ>40 U/袋為FⅧ合格，F(xiàn)IB>75 mg/袋為FIB合格，分別統(tǒng)計兩組的FⅧ、FIB合格情況。

1.4統(tǒng)計學(xué)方法

采用SPSS 20.0統(tǒng)計學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，兩組間比較采用t檢驗;計數(shù)資料用率表示，組間比較采用χ2檢驗，以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1兩組不同保存時間FⅧ、FIB含量的比較

保存8、12、24 h，兩組的FⅧ、FIB含量比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。兩組保存12 h的FⅧ、FIB含量與保存8 h比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）;兩組保存24 h的FⅧ、FIB含量均低于保存8 h，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）（表1）。

2.2兩組不同保存時間FⅧ、FIB合格率的比較

保存8、12、24 h，兩組的FⅧ、FIB合格率比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。兩組保存12 h的FⅧ、FIB合格率與保存8 h比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）;兩組保存24 h的FⅧ、FIB合格率與保存8 h比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）（表2）。

3討論

冷沉淀的制備主要通過冷凍提取血漿冷沉淀物，主要包含F(xiàn)Ⅷ、FIB，而不穩(wěn)定FⅧ是影響冷沉淀質(zhì)量的最主要原因[7-8]。研究發(fā)現(xiàn)，冷沉淀中凝血因子的含量不僅受制備過程中速凍效率、融化時間、制備完成后貯存時間和溫度的影響，也與制備前全血的保存有關(guān)[9-10]。

傳統(tǒng)冷沉淀制備前，全血保存要求是在2～6℃低溫條件下，于8 h內(nèi)進(jìn)行冷沉淀制備，符合有效冷沉淀制備質(zhì)量要求[11]。但冷沉淀的制備來源主要為醫(yī)院獻(xiàn)血、獻(xiàn)血車等，受環(huán)境限制，多難以在短時間內(nèi)進(jìn)行低溫保存，因此全血室溫保存可能性得到廣泛關(guān)注[11-12]。歐洲委員會第19版《血液成分的制備、使用和質(zhì)量保證指南》[13]中指出，血液在20～24℃中保存是可行的，在24 h內(nèi)進(jìn)行分離制備對其質(zhì)量影響較小，證明了全血室溫保存的可行性。本研究結(jié)果顯示，保存8、12、24 h，兩組的FⅧ、FIB含量比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）;保存8、12、24 h，兩組的FⅧ、FIB合格率比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05），提示全血室溫保存24 h對冷沉淀凝血因子影響較小。劉根斌等[14]的研究結(jié)果證實，F(xiàn)IB水平在室溫與低溫環(huán)境下保存0～24 h無明顯差異，此結(jié)果與本研究結(jié)果相似，說明室溫保存24 h對FIB活性影響較小，這與其穩(wěn)定性較好相關(guān)。但冷沉淀制備質(zhì)量需共同參考冷沉淀FⅧ、FIB含量，F(xiàn)IB含量不能作為決定性因素。本研究結(jié)果還顯示，兩組保存12 h的FⅧ、FIB含量與保存8 h比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）;兩組保存12 h的FⅧ、FIB含量與保存8 h比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）;兩組保存24 h的FⅧ、FIB含量均低于保存8 h，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）;但兩組保存12、24 h的冷沉淀FⅧ、FIB合格率與保存8 h比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。提示全血低溫、室溫保存至24 h冷沉淀凝血因子含量會明顯降低，但其含量仍符合《全血及成分血質(zhì)量要求》[6]，合格率較高，對冷沉淀凝血因子活性影響較小。王宗奎等[15]分析保存條件對部分凝血因子影響，發(fā)現(xiàn)FⅧ活性會隨著保存時間延長而喪失，但在24 h內(nèi)4℃左右溫度及室溫保存對FⅧ影響較小，仍能夠滿足冷沉淀制備要求。此結(jié)果與本研究具有高度相似性，進(jìn)一步證明全血室溫保存24 h后再進(jìn)行冷沉淀制備是可行的。本研究結(jié)果顯示，兩組保存8、12、24 h的FⅧ、FIB合格率比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。雖然本研究結(jié)果顯示，低溫組保存8、12、24 h的FⅧ、FIB含量略高于室溫保存，但兩組的FⅧ、FIB含量比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05），提示2～6℃低溫條件下進(jìn)行全血保存的確具有一定優(yōu)越性，但優(yōu)勢并不明顯。本研究所選擇室溫為25℃，而在獻(xiàn)血車進(jìn)行血液采集時，外界溫度調(diào)節(jié)難以準(zhǔn)確維持在25℃，故臨床建議在血液采集后迅速降溫至25℃，以保障冷沉淀制備質(zhì)量。

綜上所述，在24 h內(nèi)全血室溫保存及低溫保存對冷沉淀凝血因子影響基本無差異，全血24 h內(nèi)25℃室溫保存是可行的。

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（收稿日期：2020-07-17）