關(guān) 麗，黃興雨

（西安醫(yī)學(xué)院 藥學(xué)院，陜西 西安710021）

骨碎補(bǔ)為水龍骨科植物槲蕨Drynariafortunei（Kunze）J.Sm 的干燥根莖，是一種骨科常用中藥。具有療傷止痛，補(bǔ)腎強(qiáng)骨的功效。外可用于消風(fēng)祛斑，筋骨痿軟，耳鳴耳聾，牙齒松動(dòng)；外治斑禿，白癜風(fēng)[1]。骨碎補(bǔ)的化學(xué)成分以黃酮類為主，同時(shí)也有其藥效活性成分。本文通過介紹骨碎補(bǔ)總黃酮提取方法、化學(xué)成分研究和藥理作用，對(duì)近幾年的研究成果進(jìn)行綜述。

1 骨碎補(bǔ)總黃酮的提取方法

1.1 醇提法

全紅等[2]以骨碎補(bǔ)中提取的總黃酮含量為指標(biāo)，研究骨碎補(bǔ)的提取條件，得出最佳工藝條件為乙醇濃度45%，用量為14 倍，提取時(shí)間2h，提取次數(shù)3次,得到總黃酮14.7170mg·mL-1。

1.2 水煎煮法

張晉等[3]以測(cè)定骨碎補(bǔ)中的總黃酮為指標(biāo)，研究水煎煮過程中的提取動(dòng)力學(xué)方程，建立了動(dòng)力模型并進(jìn)行了檢驗(yàn)，此模型對(duì)水煎煮法提取骨碎補(bǔ)中的總黃酮有一定指導(dǎo)意義，并且在多次完善后有望指導(dǎo)實(shí)際生產(chǎn)。

1.3 水浸提法

聶健等人通過正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)對(duì)影響總黃酮提取率的提取時(shí)間、料液比和提取次數(shù)進(jìn)行優(yōu)化，得到最佳工藝為提取時(shí)間1h、料液比1∶10，提取次數(shù)3 次，總黃酮提取率為1.04%[4]。

1.4 微波提取法

祁小妮等[5]以骨碎補(bǔ)黃酮提取率為指標(biāo)，使用微波輔助結(jié)合響應(yīng)曲面優(yōu)化法，得出最佳提取工藝條件為提取液中骨碎補(bǔ)黃酮質(zhì)量濃度0.03g·L-1，微波功率400W，微波時(shí)間10min，骨碎補(bǔ)黃酮提取率高達(dá)5.57%。

1.5 超聲提取法

超聲提取與常規(guī)的提取方法相比，具有提取時(shí)間短、簡單且收率高的優(yōu)點(diǎn)。李景等[6]以骨碎補(bǔ)總黃酮提取率為指標(biāo)，采用Box-Behnken 中心組合設(shè)計(jì)，得出最佳工藝條件為超聲時(shí)間30min，提取溫度66℃，乙醇體積分?jǐn)?shù)64%，料液比1∶92g·mL-1，總黃酮提取率達(dá)4.86%。黃艷萍等人采用正交實(shí)驗(yàn)法，考察浸泡時(shí)間、溶劑量、提取次數(shù)、超聲時(shí)間對(duì)提取率的影響，發(fā)現(xiàn)提取影響程度為：溶劑倍量＞提取次數(shù)＞浸泡時(shí)間＞超聲時(shí)間，最佳因素水平為加60 倍量的水，浸泡4h，超聲提取4 次，每次20min[7]。

1.6 不同提取方法比較

張琳等[8]分別采用超聲提取法、索氏提取法、回流提取法對(duì)骨碎補(bǔ)生品和砂燙品進(jìn)行提取研究，以骨碎補(bǔ)總黃酮為指標(biāo)，得出3 種提取方法中回流法提取率最高，超聲提取法提取率最低。在另一實(shí)驗(yàn)中，張琳等[9]對(duì)生品骨碎補(bǔ)和砂燙骨碎補(bǔ)分別采用水提法和醇提法提取總黃酮，實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，兩種方法得到的總黃酮含量相差無幾，但水提法更加經(jīng)濟(jì)、環(huán)保。黃艷萍等[10]使用醇提法和超聲法，得到總黃酮含量分別為3.10%和4.67%，所以超聲法提取效率較醇提法高，且沒有溶劑對(duì)環(huán)境的污染。

2 化學(xué)成分

骨碎補(bǔ)中總黃酮以二氫黃酮和兒茶素[11]及其衍生物為主，代表有柚皮苷和新北美圣草苷。Chang等[12]在其醇提物中得到石蓮姜素、表阿夫兒茶精-3-O-（6"-O-乙酰基）-β-D-吡喃阿洛糖苷、4β-羧甲基-表阿夫兒茶精甲酯、4β-羧甲基-表阿夫兒茶精鈉等六種化合物。Wang 等[13]在骨碎補(bǔ)中分離得到兩個(gè)黃酮糖苷類化合物，為山柰酚3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷-7-O-α-L-阿拉伯呋喃糖苷和（R）-5,7,3′,5′-四羥基-二氫黃酮7-O-新橙皮糖苷。

梁永紅等從骨碎補(bǔ)中分離得到8 個(gè)黃酮類化合物，為北美圣草素、eriodictyol 7-O-β-D-glucopyranoside、木犀草素、木犀草素7-O-β-D-葡萄糖苷、木犀草素8-Cβ-D-葡萄糖苷和2',4'-二羥基二氫查爾酮等[14]。

2015 年，越南學(xué)者Pham ThiNhat Trinh 等人從骨碎補(bǔ)中分離得到一個(gè)新的黃酮類化合物，命名為Drynaether A，它的亞類歸屬于黃烷類，C 環(huán)沒有1號(hào)位氧和4 位羰基[15]。

3 藥理作用

3.1 神經(jīng)保護(hù)作用

王鳳嬌等[16]對(duì)骨碎補(bǔ)中提取分離出的黃酮類化合物進(jìn)行了細(xì)胞實(shí)驗(yàn)，結(jié)果顯示這些化合物可促進(jìn)Aβ25-35 誘導(dǎo)損傷的PC12 細(xì)胞增殖，可能與保護(hù)神經(jīng)功能有關(guān)。劉婷婷等[17]采用四甲基氮唑藍(lán)法檢測(cè)細(xì)胞活力，證明了骨碎補(bǔ)總黃酮對(duì)損傷的PC12細(xì)胞有明顯的保護(hù)作用。

崔悅考察了骨碎補(bǔ)總黃酮對(duì)兩種記憶障礙模型小鼠和Aβ 損傷的PC12 細(xì)胞的保護(hù)作用，發(fā)現(xiàn)骨碎補(bǔ)總黃酮能夠通過ER-P38/MAPK 信號(hào)通路調(diào)節(jié)兩種記憶障礙小鼠的Aβ 代謝系統(tǒng)、Tau 蛋白磷酸化系統(tǒng)、乙酰膽堿系統(tǒng)、氧化應(yīng)激系統(tǒng)、凋亡系統(tǒng)發(fā)揮神經(jīng)保護(hù)作用；兩個(gè)代表性黃酮紫云英苷和圣草酚通過ER-P38/MAPK 信號(hào)通路對(duì)Aβ25-35 誘導(dǎo)損傷的PC12 細(xì)胞具有保護(hù)作用[18]。

3.2 抗氧化能力

祁小妮等[5]通過考察骨碎補(bǔ)總黃酮對(duì)羥基自由基和過氧負(fù)離子自由基的清除能力，得到結(jié)果對(duì)二者的清除率分別為10.12%和35.71%，且黃酮質(zhì)量濃度與自由基的清除能力存在明顯量效關(guān)系，可作為一種天然的抗氧化劑使用。韋國蘭等發(fā)現(xiàn)骨碎補(bǔ)總黃酮的1,1-二苯-2-苦基肼自由基（DPPH）清除能力遠(yuǎn)高于其他常見中草藥[19]。

3.3 對(duì)骨質(zhì)疏松作用

宋雙紅以相關(guān)骨轉(zhuǎn)化為指標(biāo)對(duì)大鼠進(jìn)行試驗(yàn)，結(jié)果表明，骨碎補(bǔ)總黃酮能有效防止失重性骨丟失[20]，還具有較好植物雌激素的作用，能防止雌激素分泌缺少所致骨質(zhì)疏松[21]。

章軼立等[22]從整合藥理學(xué)視角出發(fā)，研究了骨碎補(bǔ)總黃酮治療骨質(zhì)疏松的多種通路，為進(jìn)一步探究其治療骨質(zhì)疏松靶點(diǎn)、通路提供了理論基礎(chǔ)。林適等人基于網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)，發(fā)現(xiàn)骨碎補(bǔ)治療骨質(zhì)疏松癥的作用機(jī)制呈現(xiàn)多靶點(diǎn)、多系統(tǒng)的特征，除了影響骨代謝相關(guān)途徑還可以影響體內(nèi)多種代謝途徑[23]。

3.4 促進(jìn)骨折愈合

郭松等人通過對(duì)牽張效果、影像學(xué)評(píng)分和骨密度考察,檢測(cè)大鼠骨髓基質(zhì)細(xì)胞Hes-1、Notch-1mRNA 及蛋白表達(dá)水平，發(fā)現(xiàn)其可以通過抑制Notch 通路，促進(jìn)成骨細(xì)胞增殖，明顯提高脛骨牽張成骨區(qū)成骨質(zhì)量[24]。

李定等人通過誘導(dǎo)膜技術(shù)（Masquelet）造模發(fā)現(xiàn)骨碎補(bǔ)總黃酮中對(duì)骨缺損區(qū)域的成骨質(zhì)量和血管形成具有良好的促進(jìn)作用[25]。李晉玉等發(fā)現(xiàn)，骨碎補(bǔ)總黃酮可促進(jìn)納米骨材料表面MC3T3-E1 細(xì)胞的成骨分化，機(jī)制研究表明，骨碎補(bǔ)總黃酮通過激活經(jīng)典Wnt/β-catenin 信號(hào)通路促進(jìn)成骨細(xì)胞增殖分化，且骨碎補(bǔ)總黃酮誘導(dǎo)的基因活化呈劑量依賴性，促進(jìn)β-catenin、LRP5、RUNX2 的表達(dá), 下調(diào)GSK-3β的表達(dá)[26]。

3.5 治療關(guān)節(jié)炎

陳昌紅[27]對(duì)兔膝關(guān)節(jié)炎模型的相關(guān)細(xì)胞因子表達(dá)作用表明，骨碎補(bǔ)總黃酮可明顯改善關(guān)節(jié)炎兔的軟骨形態(tài)，進(jìn)一步對(duì)關(guān)節(jié)炎患者為期12 周的觀察測(cè)定發(fā)現(xiàn)，患者們血清中的炎癥因子均有明顯下降，證明了骨碎補(bǔ)總黃酮對(duì)關(guān)節(jié)炎的治療作用。李明等[28]對(duì)關(guān)節(jié)炎模型兔的研究表明，骨碎補(bǔ)總黃酮可明顯減少其滑膜、軟骨損傷，作用機(jī)制可能是下調(diào)了生長因子HIF-1α 和VEGF 的表達(dá)。陳元良等[29]運(yùn)用兔關(guān)節(jié)炎模型，對(duì)家兔進(jìn)行四周的骨碎補(bǔ)提取液灌胃，四周后家兔血清中的白介素水平明顯降低，證明骨碎補(bǔ)總黃酮確實(shí)能改善關(guān)節(jié)炎。

3.6 調(diào)節(jié)免疫

趙趕等[30]對(duì)免疫功能低下的小鼠測(cè)定其巨噬細(xì)胞功能和免疫器官重量，結(jié)果表明，骨碎補(bǔ)總黃酮對(duì)兩項(xiàng)指標(biāo)均有明顯的提高作用，為骨碎補(bǔ)在免疫方面的運(yùn)用提供了一定的基礎(chǔ)。何冠蘭[31]使用ELISA檢測(cè)表明，骨碎補(bǔ)總黃酮可明顯提高免疫低下小鼠的巨噬細(xì)胞吞噬功能，提高免疫能力機(jī)制與增強(qiáng)小鼠非特異性免疫、體液免疫和細(xì)胞免疫的功能有關(guān)。

4 結(jié)語

骨碎補(bǔ)是用途廣泛的一種傳統(tǒng)藥材，近些年來，人們對(duì)其的不斷深入研究，使其在不同領(lǐng)域發(fā)揮了多種多樣的作用。尤其是對(duì)于一些醫(yī)學(xué)難題，比如阿爾茨海默癥、免疫相關(guān)疾病的治療。隨著科學(xué)的不斷進(jìn)步，有望發(fā)揮更大的作用。