余豐，張澎怡，陳文芳

（佛山市婦幼保健院，廣東 佛山 528000）

地中海貧血是常染色體隱性遺傳病的一種，發(fā)病率高。地中海貧血的早期確診是地中海貧血發(fā)病預防的主要方式，特別是新生兒地中海貧血篩查工作的開展，可有效避免后期盲目用藥影響兒童正常生長發(fā)育[1]。以往新生兒地中海貧血的主要診斷方法為紅細胞指數(shù)或管定量法紅細胞脆性試驗，但兩種方法的診斷效果均不理想。臍蛋白電泳檢測具有操作簡單，檢查費用較低，結(jié)果準確性高等優(yōu)勢，在臨床新生兒地中海貧血診斷中得到了廣泛應用[2-3]。因此，我院應用臍血蛋白電泳法對新生兒地中海貧血進行篩查，現(xiàn)將研究報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 于2016年1月-2017年12月選取我院活產(chǎn)新生兒臍血標本20000例作為篩查對象，其中男嬰10542例，女嬰9458例，均為足月產(chǎn)兒，無其他血液疾病。

1.2 方法

1.2.1 電泳檢測 儀器選取全自動電泳儀，臍血標本選擇胎兒出生切斷臍帶時，從胎盤端臍帶血，采用一次性真空采血管采集新生兒臍帶血2 mL，采用ACD抗凝處理后，低溫保存送檢。應用全自動毛細血管電泳儀與配合試劑盒開展質(zhì)控品檢測，待送標本合格后，開展血紅蛋白電泳檢測。電泳方法：將離心儀機離心速度設(shè)為3000 r/min，離心時間設(shè)為5 min，離心后將血漿棄除不用。經(jīng)生理鹽水洗滌紅細胞，采用四氯化碳溶血法制備Hb液，溶液加入蒸餾水稀釋至20g/L濃度，開展電泳的血紅蛋白液。取血紅蛋白液15-20 mL，應用全自動電泳儀進行電泳檢測，完成檢測后觀察標本曲線圖進行分析。

1.2.2 基因檢測 將臍血蛋白電泳檢測結(jié)果為陽性樣本開展基因檢測，缺失型α-地中海貧血的三種常見缺失型應用gap-PCR法檢測，包括-SEA、-α3.7、-α-4.2；應用PCR與反向斑點雜交法對非缺失型α-地中海貧血、β-地中海貧血標本樣本進行檢測，主要對三種常見突變進行檢查，包括αCS、αWS、αQS，β序列包括正常序列與17個突變序列。

1.2.3 異常血紅蛋白檢測 將其他正常血紅蛋白樣本排除，留下Hb E，檢索GenBank中的α與β珠蛋白序列，應用Premier5軟件設(shè)置相應引物，擴增PCR應用瓊脂糖電泳檢測。標本應用DNA序列檢測，查找突變點。

1.3 觀察指標 新生兒臍帶血臍帶血參考標準值：Hb無異常區(qū)帶：Hb A約占30%，Hb F約占70%，Hb A2約占0.1%-1%。診斷標準：α-地中海貧血：存在Hb CS區(qū)帶與異常Hb Bart′s區(qū)帶；β-地中海貧血：Hb A＜10%，Hb F＞90%，父母雙方存在1名以上的地中海貧血基因攜帶者。存在異常Hb區(qū)帶即可判斷存在異常血紅蛋白。

2 結(jié)果

2.1 血紅蛋白電泳檢測 20000例新生兒臍帶血標本開展臍血蛋白電泳檢測結(jié)果提示，異常標本共2693例，占比13.48%，其中疑似α-地中海貧血者1678例，占比8.39%，疑似β-地中海貧血者903例，占比4.52%，疑似異常血紅蛋白者117例，占比0.59%。

2.2 與基因檢測結(jié)果相比 臍血蛋白電泳檢測結(jié)果中呈陽性標本再行基因檢測結(jié)果顯示，α-地中海貧血者1594例，與電泳檢查結(jié)果比較，相符率為94.99%；β-地中海貧血者822例，與電泳檢查結(jié)果比較，相符率為91.03%。確診血紅蛋白異常者106例，其中Hb E者35例，Hb Q者19例，Hb D者15例，Hb J者10例，Hb G者13例，Hb New York者14例。

2.3 篩查結(jié)果 確診α-地中海貧血1594例，占總新生兒樣本比例的7.97%，確診為β-地中海貧血者822，占總新生兒樣本比例的4.11%，異常血紅蛋白106例，占總新生兒樣本比例0.53%。

3 討論

血紅蛋白疾病包括異常血紅蛋白與地中海貧血，其中地中海貧血是一種危害性較大的遺傳性疾病，已被WHO列為危害人類健康的6大常見疾病，包括α-地中海貧血與β-地中海貧血兩類。臍血血紅蛋白具有特殊性，新生兒臍血正常情況下無異常Hb區(qū)帶，存在Hb Bart′s特有序列，出生3-12個月后會逐漸消失，可作為新生兒地中海篩查的重要指標。α-地中海貧血是一種遺傳性溶血病，是由于α-珠蛋白基因缺失或非缺失性突變，導致α-珠蛋白肽鏈缺失，或者合成減少所致。胚胎時期已經(jīng)出現(xiàn)α-珠蛋白，直接參與血紅蛋白組成。血紅蛋白是由于珠蛋白鏈分子所組成，珠蛋白一級結(jié)構(gòu)發(fā)生改變，使珠蛋白分子結(jié)構(gòu)出現(xiàn)變化，導致珠蛋白鏈分子結(jié)構(gòu)所組成的血紅蛋白發(fā)生異常。血紅蛋白異常后生理化性質(zhì)均會隨之改變，出現(xiàn)分子遷移率變化，導致電泳檢查時處于非正常位置，進而利用臍血蛋白電泳檢查可對血紅蛋白異常進行判斷。

綜上，新生兒地中海貧血篩查中應用臍血蛋白電泳法，篩查準確性較高，可在臨床廣泛推廣。