韋春逢

（河池市人民醫(yī)院，廣西 河池 547000）

目前，較為嚴重的染色體異常情況是21、18、13三體綜合征，臨床上對此方面情況的產(chǎn)前篩查工作亦非常關(guān)注，旨在產(chǎn)前對胎兒的染色體進行科學合理的診斷，再根據(jù)檢查結(jié)果給予孕婦專業(yè)的指導。近年無創(chuàng)產(chǎn)前檢測被廣泛用于產(chǎn)前基因篩查工作中，亦獲得顯著的篩查效果，對染色體異常的檢出率高。為了解無創(chuàng)產(chǎn)前檢測胎兒游離DNA對21、18、13三體綜合征的篩查效果，本次對我院接收的1000例產(chǎn)檢孕婦實際情況進行分析，旨在探析胎兒游離DNA用于無創(chuàng)產(chǎn)前檢測21、18、13三體綜合征的臨床效果與應(yīng)用價值。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇2018年1月-2019年12月在我院產(chǎn)檢的孕婦1000例為對象，B超證實單活胎妊娠，年齡21-38歲，中位年齡為32.9歲，平均（32.9±4.2）歲，孕周10-32周，中位孕周為14.8周，平均（14.8±2.3）周。由專業(yè)人員為孕婦及其家屬講解研究內(nèi)容，征得其同意，并簽署知情同意書，依從性良好，可以配合隨訪。

1.2 方法

取孕婦的外周血5ml，裝于EDTA-k2抗凝管，保存于4℃的環(huán)境中，用每分鐘4000轉(zhuǎn)的離心率離心10min，取血漿再放于4℃的環(huán)境內(nèi)，用每分鐘1200轉(zhuǎn)的離心率離心10min，將殘留的細胞去掉，取血漿放在零下20℃的環(huán)境里保存，之后再做平行測序。

按照QIAamp DNA Micro Kit試劑盒上的說明書對樣本中的胎兒游離DNA進行提取，再用T4DNA聚合酶及T4多聚核苷酸激酶對提取的胎兒DNA片段進行修復，使其形成平末端，隨即將Klenow聚合酶添加在DNA3＇端，并加堿基A與5＇端T堿基連接；對PCR進行適當?shù)臄U增，使胎兒DNA分子片段有效富集，并用Illumina HiSeq 2000測序平臺進行DNA測序。

1.3 觀察指標

記錄胎兒的DNA測序結(jié)果，根據(jù)《常見染色體病產(chǎn)前篩查與診斷》[1]對無創(chuàng)檢測的21、18、13三體綜合征高風險孕婦的具體情況進行分析，取孕婦的羊水/臍血培養(yǎng)細胞染色體核型并做分析，對檢測低風險的孕婦進行隨訪，持續(xù)隨訪到分娩。

2 結(jié) 果

1000例產(chǎn)前無創(chuàng)檢測的孕婦中，21例（2.1%）孕婦為21、18、13三體綜合征高風險，13例（1.3%）孕婦為21三體，2例（0.2%）孕婦為18三體，4例（0.4%）孕婦為13三體，2例（0.2%）孕婦為Turner綜合征。21例孕婦的羊水/臍血培養(yǎng)細胞染色體核型分析顯示，7例（33.3%）胎兒的染色體核型為47，xy，+21；3例（14.3%）胎兒的染色體核型為47，xx，+21；2例（9.5%）胎兒的染色體核型為46，xy，der（13；21）（q9；q9），+21；4例（19.0%）胎兒的染色體核型為47，xx，+18；2例（9.5%）胎兒的染色體核型為47，xx，+13；3例（14.3%）胎兒的染色體核型為45，x，21ps+。

隨訪產(chǎn)前無創(chuàng)檢測低風險的979例（97.9%）孕婦，11例（1.1%）孕婦由于其他原因選擇終止妊娠，968例（98.9%）孕婦成功分娩，根據(jù)嬰幼兒智能發(fā)育測驗手冊檢查結(jié)果顯示，無創(chuàng)產(chǎn)前檢測胎兒游離DNA的21、18、13三體綜合征高風險情況均符合。

3 討 論

胎兒染色體異常是染色體疾病發(fā)生和胎兒發(fā)育畸形的關(guān)鍵，由于染色體是遺傳物質(zhì)，所以關(guān)系著人的生長發(fā)育[2]。一般胎兒染色體異常時，則不能保留胎兒，這是我國目前控制及預防出生缺陷的重要手段，所以孕婦的產(chǎn)前檢查工作十分關(guān)鍵。

孕婦血漿中存在胎兒的細胞游離DNA的結(jié)果在1997年被Lo等人提出，其濃度與孕周的延長密切相關(guān)，且在胎兒娩出2-3h內(nèi)，產(chǎn)婦血漿中的胎兒細胞游離DNA會發(fā)生降解。胎兒游離DNA無創(chuàng)產(chǎn)前檢測技術(shù)是近年廣泛應(yīng)用的一種產(chǎn)前篩查手段，該檢測技術(shù)可以通過對孕婦靜脈血的分析，基于DNA測序技術(shù)測序血液樣本中的游離DNA片段，隨即對得到的結(jié)果做生物信息分析，根據(jù)得到的結(jié)果總結(jié)胎兒的遺傳信息，王佳燕等[3]指出游離的細胞DNA能有效檢測21、18和13-三體綜合征。

無創(chuàng)產(chǎn)前胎兒游離DNA檢測技術(shù)屬于胎兒染色體非整倍體篩查方法，無需對孕婦進行產(chǎn)前有創(chuàng)DNA測試，僅需用孕婦的血漿檢測即可。耿勁松等[4]指出孕婦血漿中的胎兒細胞游離DNA濃度大約是3-13%，由胎盤中釋放到孕婦的體內(nèi)，可對胎兒21三體綜合征進行準確篩查。本次篩查結(jié)果顯示，2.1%的孕婦呈21、18、13三體綜合征高風險，各占1.5%，0.2%，0.4%，2例胎兒為Turner綜合征，羊水/臍血培養(yǎng)細胞染色體核型分析和隨訪結(jié)果均證實檢測結(jié)果準確，與上述研究差異不大。

綜上所述，胎兒游離DNA用于無創(chuàng)產(chǎn)前檢測21、18、13三體綜合征的臨床應(yīng)用價值顯著，具有準確的檢測結(jié)果，對出生缺陷胎兒的防控作用顯著。