徐智凱，楊 彬，李夢(mèng)嬌，仇旭升，譚 磊，孫英杰，劉煒瑋，宋翠萍，廖 瑛，丁 鏟，王金泉*，孟春春*

（1.新疆農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)學(xué)院，新疆 烏魯木齊 830052；2.中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院上海獸醫(yī)研究所，上海 200241）

新城疫病毒（Newcastle diseases virus，NDV）是單股負(fù)鏈不分節(jié)段的RNA 病毒，在分類上屬于副黏病毒科副黏病毒屬（Avulavirus）的禽副黏病毒I 型（Avi?an paramyxovirus-1）。該病毒宿主廣泛，目前可感染超過(guò)250 余種禽類[1]。核糖體大亞基蛋白11（Ribo?somal protein L11，RPL11）是核糖體60S 大亞基的重要組成部分[2]。RPL11 在進(jìn)化上是一種高度保守的蛋白質(zhì)，作為核糖體蛋白，RPL11 在細(xì)胞質(zhì)中合成后，經(jīng)核孔運(yùn)輸至細(xì)胞核中，并在核仁內(nèi)參與核糖體的組裝。組裝成熟的核糖體經(jīng)核孔又進(jìn)入細(xì)胞質(zhì)中，發(fā)揮合成蛋白質(zhì)的功能[3]。核仁為RPL11 在細(xì)胞內(nèi)的富集區(qū)域，細(xì)胞質(zhì)中的RPL11 則隨成熟的核糖體呈彌散性分布[4]。已有研究表明，在NDV 感染細(xì)胞早期，其M 蛋白能夠在細(xì)胞核和核仁中聚集，并且在整個(gè)感染過(guò)程中持續(xù)存在于核仁中[5]。另有研究表明NDV 可通過(guò)PERK/PKR 和GADD34-PP1 信號(hào)通路調(diào)節(jié)宿主的翻譯系統(tǒng)，但具體的作用機(jī)制仍未被解析[6]。RPL11、RPL5 蛋白與5S rRNA 形成5S核糖體蛋白粒子（5S RNP），這對(duì)于成熟核糖體的組裝至關(guān)重要[7]。本研究結(jié)果顯示，當(dāng)NDV 感染后細(xì)胞自身蛋白翻譯受到明顯抑制，而病毒蛋白卻一直在增加，推測(cè)是由于病毒感染后影響了細(xì)胞內(nèi)成熟核糖體的組裝進(jìn)而導(dǎo)致某些蛋白的翻譯效率下降?；诖?，本實(shí)驗(yàn)通過(guò)檢測(cè)NDV 感染后RPL11 蛋白表達(dá)量的變化，來(lái)證實(shí)該推測(cè)的正確性，為深入研究NDV感染后引起宿主細(xì)胞的核糖體應(yīng)激提供了參考，同時(shí)也對(duì)解析NDV 的致病機(jī)制提供了新的切入點(diǎn)。

1 材料與方法

1.1 主要實(shí)驗(yàn)材料NDV SH15 分離株（屬于ClassⅡ分支中的基因Ⅲ型）、成纖維傳代細(xì)胞系DF-1 和pFlag-14 質(zhì)粒由本實(shí)驗(yàn)室保存；鼠Puromycin 單克隆抗體（MAb）、家兔RPL11 MAb 購(gòu)自美國(guó)Abcam 公司；鼠β-actin 多克隆抗體（PAb）、Flag MAb、山羊抗鼠IgG-Cy5、山羊抗鼠IgG-（H+L）、山羊抗兔IgG-FITC、山羊抗鼠IgG-FITC 和DAPI 染料均購(gòu)自美國(guó)Sigma 公司；小鼠抗核衣殼蛋白（NP protein）MAb 由本實(shí)驗(yàn)室制備。TRIzol 試劑購(gòu)自碧云天生物技術(shù)有限公司；SYBR qPCR Master Mix 試劑盒和反轉(zhuǎn)錄試劑盒均購(gòu)自上海東圣生物有限公司：Lipo2000、GIBCO-DMEM 培養(yǎng)基、細(xì)胞用磷酸鹽緩沖液（PBS）、胎牛血清（FBS）、T4 DNA 快速連接酶、限制性內(nèi)切酶購(gòu)自美國(guó)Invitrogen 公司；嘌呤霉素Puromycin 和蛋白酶體抑制劑MG132 均購(gòu)自Selleck 公司。

1.2 Puromycin 標(biāo)記NDV 感染后細(xì)胞新合成蛋白的檢測(cè)Puromycin 具有與tRNA 分子末端類似的結(jié)構(gòu)，能夠與氨基酸結(jié)合，代替氨?；膖RNA 與核糖體的A 位點(diǎn)結(jié)合，并摻入到生長(zhǎng)的肽鏈中，因而其可以用于標(biāo)記新合成的蛋白[8]。將NDV 以MOI 1接種于DF-1 細(xì)胞1 h 后，換維持液（含2%胎牛血清的DMEM）繼續(xù)培養(yǎng)。分別收集NDV感染后8 h、16 h、24 h 和32 h 后的細(xì)胞，并在每個(gè)收樣時(shí)間點(diǎn)前1 h向維持液加入終濃度為20 μmol/mL 的Puromycin 標(biāo)記新合成蛋白。細(xì)胞經(jīng)PBS 漂洗1 次，離心后棄去PBS，加入150 μL RIPA裂解液，100 ℃加熱10 min，-80 ℃保存?zhèn)溆谩⒏鱾€(gè)時(shí)間點(diǎn)收集的細(xì)胞樣品經(jīng)12% SDSPAGE 凝膠電泳，轉(zhuǎn)印至NC 膜，分別用鼠抗Puro?mycin MAb（1:1 000）、鼠抗NP MAb（1:1 000）和鼠抗β-actin PAb（1:1 000）作為一抗，用山羊抗兔IgG-（H+L）（1:10 000）和山羊抗鼠IgG-Cy5（1:10 000）作為二抗，經(jīng)western blot 檢測(cè)NDV 感染后細(xì)胞新合成蛋白、β-actin 和病毒NP 蛋白的表達(dá)情況，并以未感染病毒的DF-1 細(xì)胞作為對(duì)照。

1.3 NDV 感染細(xì)胞后內(nèi)源性RPL11 蛋白表達(dá)的western blot 檢測(cè)參照1.2 所述方法，同時(shí)收集MOI 1 的NDV 感染8 h、16 h、24 h 和32 h 后和分別以MOI 1 和0.1 的NDV 感染16 h 和32 h 后的細(xì)胞樣品，常規(guī)處理經(jīng)SDS-PAGE 后，分別以兔抗RPL11（1:1 000）多克隆抗體、鼠抗NP MAb（1:1 000）為一抗，以山羊抗兔IgG-（H+L）（1:10 000）和山羊抗鼠IgG-Cy5（1:10 000）作為二抗檢測(cè)上述細(xì)胞中RPL11和病毒NP 蛋白的表達(dá)情況，并以每個(gè)時(shí)間點(diǎn)未感染病毒的DF-1 細(xì)胞作為對(duì)照。

1.4 RPL11 基因轉(zhuǎn)錄水平的檢測(cè)分別根據(jù)RPL11（001305188.1）和β-actin（L08165.1）的基因序列設(shè)計(jì)熒光定量PCR 檢測(cè)引物RPL11-F/R、β-actin-F/R（表1），引物由上海生工生物工程技術(shù)服務(wù)有限公司合成。同時(shí)收集MOI 1的NDV 感染8 h、16 h、24 h和32 h 后和分別以MOI 1 和0.1 的NDV 感染16 h 和32 h后的細(xì)胞樣品，經(jīng)TRIzol 提取各時(shí)間點(diǎn)的細(xì)胞總RNA，反轉(zhuǎn)錄合成cDNA，-20 ℃保存?zhèn)溆?。采用SYBR qPCR Master Mix 試劑盒，以引物RPL11-F/R和β-actin-F/R 檢測(cè)RPL11 基因和β-actin 的轉(zhuǎn)錄水平。反應(yīng)條件：95 ℃2 min；95 ℃5 s、60 ℃10 s，72 ℃50 s，40 個(gè)循環(huán)。最后以β-actin 擴(kuò)增值為參照，根據(jù)2-ΔΔCT方法，計(jì)算RPL11 基因mRNA 的相對(duì)轉(zhuǎn)錄水平。以未感染病毒的DF-1 細(xì)胞作為對(duì)照。

1.5 NDV 感染細(xì)胞后RPL11 蛋白分布的激光共聚焦檢測(cè)將DF-1 細(xì)胞鋪于激光共聚焦小皿中，將MOI 1 的NDV 感染DF-1 細(xì)胞，24 h 后使用4%多聚甲醛固定細(xì)胞，0.1%Triton-100 通透處理20 min，5%BSA 封閉1 h，再分別以兔抗RPL11 多克隆抗體（1:200）和鼠抗NP MAb（1:200）為一抗，使用山羊抗兔IgG-FITC（1:500）和山羊抗鼠IgG-FITC（1:500）為二抗，使用DAPI 核染5 min，檢測(cè)RPL11 蛋白在細(xì)胞核與細(xì)胞質(zhì)中的分布，以未感染NDV 的DF-1細(xì)胞作為對(duì)照。通過(guò)Zeiss（蔡司分析軟件）對(duì)熒光點(diǎn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，分析RPL11 蛋白和病毒NP 蛋白表達(dá)量的變化。

表1 熒光定量PCR 以及構(gòu)建重組質(zhì)粒的引物Table 1 Primers used for qRT-PCR and construct plasmids

1.6 重組質(zhì)粒的構(gòu)建、轉(zhuǎn)染及NDV 感染對(duì)外源RPL11 蛋白表達(dá)影響的檢測(cè)提取DF-1 細(xì)胞的總RNA，反轉(zhuǎn)錄為cDNA，以其為模板以引物Flag-RPL11-F/R 經(jīng)PCR 擴(kuò)增RPL11 基因的完整閱讀框，克隆至pFlag-14 中構(gòu)建重組質(zhì)粒pFlag-RPL11 并測(cè)序鑒定。采用Lipo2000 將構(gòu)建的重組質(zhì)粒pFlag-RPL11 和pFlag-14 空質(zhì)粒分別轉(zhuǎn)染DF-1 細(xì)胞，24 h后收集細(xì)胞，常規(guī)處理后經(jīng)SDS-PAGE 電泳，按照1.3 的方法經(jīng)western blot 鑒定外源RPL11 蛋白的表達(dá)。為檢測(cè)NDV 是否影響外源RPL11 蛋白的表達(dá)水平，將重組質(zhì)粒pFlag-RPL11 轉(zhuǎn)染DF-1 細(xì)胞24 h后，再分別使用MOI 0.1 和MOI 1 的NDV 感染，24 h后收集細(xì)胞蛋白樣品，經(jīng)1.3 的western blot 檢測(cè)RPL11 和病毒NP 蛋白表達(dá)水平。以未感染病毒的DF-1 細(xì)胞作為對(duì)照。

1.7 蛋白酶抑制劑對(duì)NDV 感染細(xì)胞后RPL11 蛋白表達(dá)影響的檢測(cè)MG132 是一種具有細(xì)胞通透性的泛素蛋白酶體抑制劑，能夠抑制20s 蛋白酶體ZLLL-MCA的降解活性，從而使蛋白酶體降解蛋白的過(guò)程受到抑制[9]。將DF-1細(xì)胞培養(yǎng)于6 孔板，12 h后，將MOI 1 的NDV 感染細(xì)胞，1 h 后在細(xì)胞維持液中添加終濃度為15 μmol/mL 的MG132。設(shè)正常培養(yǎng)的細(xì)胞為對(duì)照，設(shè)感染后不加MG132 的細(xì)胞為陽(yáng)性對(duì)照。24 h 后同時(shí)收集上述3 組細(xì)胞的培養(yǎng)上清，經(jīng)Reed-Muench 法測(cè)定病毒TCID50。同時(shí)收集細(xì)胞蛋白樣品，參照1.2、1.3的western blot 方法分別檢測(cè)NDV感染后RPL11、β-actin和病毒NP蛋白的表達(dá)情況。

2 結(jié) 果

2.1 NDV 感染后細(xì)胞新合成蛋白的檢測(cè)結(jié)果

NDV 感染細(xì)胞不同時(shí)間后收集經(jīng)Puromycin 標(biāo)記的細(xì)胞，裂解后經(jīng)western blot 檢測(cè)新合成蛋白的含量。結(jié)果顯示，NDV 感染后8 h，Puromycin 標(biāo)記的蛋白無(wú)明顯變化；16 h 后NDV 感染細(xì)胞中新合成蛋白開(kāi)始減少；隨著時(shí)間的延長(zhǎng)感染細(xì)胞中的新合成蛋白逐漸減少直至完全消失；而病毒NP 蛋白的表達(dá)量卻一直增加（圖1A）。通過(guò)灰度掃描分析結(jié)果顯示，與未感染病毒的對(duì)照細(xì)胞相比，感染后8 h、16 h、24 h、32 h 的細(xì)胞中新合成的蛋白量下降至原來(lái)的96%、85%、37%、10%（圖1B）。以上結(jié)果表明NDV 感染了DF-1 細(xì)胞并且在其中正常復(fù)制；NDV 感染后顯著抑制細(xì)胞新合成蛋白的翻譯，并呈時(shí)間依賴性。

圖1 NDV 感染后puromycin 標(biāo)記蛋白含量的檢測(cè)結(jié)果Fig.1 The expression level of puromycin labeled protein after NDV infection

2.2 NDV 感染后RPL11 蛋白表達(dá)及該基因轉(zhuǎn)錄水平的檢測(cè)結(jié)果分別檢測(cè)NDV 感染后不同時(shí)間點(diǎn)RPL11 的蛋白表達(dá)和mRNA 轉(zhuǎn)錄水平。Western blot結(jié)果顯示，NDV 感染DF-1 細(xì)胞16 h 后，細(xì)胞中RPL11蛋白的表達(dá)量開(kāi)始減少，至感染后24 h和32 h后基本檢測(cè)不到RPL11 蛋白，病毒NP 蛋白表達(dá)量卻一直上升（圖2A）。分別以MOI 0.1 和MOI 1 的NDV 感染DF-1 細(xì)胞，收集感染后16 h 和32 h 細(xì)胞，west?ern blot 結(jié)果顯示感染后16 h，MOI 1 NDV 感染的細(xì)胞RPL11 蛋白的表達(dá)量比MOI 0.1 NDV感染的細(xì)胞更少。到感染后32 h 時(shí)，MOI 0.1 組僅能檢測(cè)到少量RPL11 蛋白，而MOI 1 組則幾乎檢測(cè)不到RPL11 的表達(dá)，而病毒NP 蛋白表達(dá)量則顯著上升（圖2B）。采用qRT-PCR 檢測(cè)RPL11 mRNA 的轉(zhuǎn)錄水平，結(jié)果顯示，感染后不同時(shí)間收集的細(xì)胞和感染不同劑量NDV后于不同時(shí)間收集的細(xì)胞與對(duì)照細(xì)胞相比，其mRNA 的轉(zhuǎn)錄水平均無(wú)顯著變化（p>0.05）（圖2C、2D）。上述結(jié)果表明NDV 感染導(dǎo)致RPL11 蛋白的表達(dá)水平下降，且該下降與病毒感染的時(shí)間和劑量呈正相關(guān)，但并不影響RPL11 mRNA 的轉(zhuǎn)錄水平。推測(cè)病毒是在翻譯后修飾環(huán)節(jié)影響了RPL11 的表達(dá)水平。

2.3 NDV 感染后RPL11 蛋白分布的激光共聚焦檢測(cè)結(jié)果NDV 感染細(xì)胞24 h 后，采用激光共聚焦試驗(yàn)分別檢測(cè)RPL11 蛋白在細(xì)胞核與細(xì)胞質(zhì)中的分布。紅色熒光信號(hào)是NDV 的NP 蛋白，綠色熒光信號(hào)是RPL11 蛋白，藍(lán)色熒光是細(xì)胞核。觀察可見(jiàn)，未感染病毒的對(duì)照細(xì)胞中綠色熒光的RPL11 蛋白均勻分布于細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)中且熒光信號(hào)很強(qiáng)烈；NDV 感染的細(xì)胞中RPL11 的綠色熒光強(qiáng)度明顯變?nèi)?，且?xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)中綠色熒光減少的趨勢(shì)相同。雖然組裝為60S 大亞基的核心蛋白R(shí)PL11 的表達(dá)呈明顯下降趨勢(shì)，但病毒NP 蛋白的紅色熒光信號(hào)卻呈顯著增加趨勢(shì)（圖3A）。通過(guò)蔡司軟件對(duì)熒光點(diǎn)的統(tǒng)計(jì)結(jié)果顯示，NDV 感染的細(xì)胞RPL11 的熒光強(qiáng)度與對(duì)照細(xì)胞相比下降了12%，差異極顯著（p<0.01）（圖3B）。結(jié)果表明NDV 感染后可同時(shí)導(dǎo)致細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)中RPL11 蛋白的表達(dá)水平下降，而病毒NP蛋白的表達(dá)卻不受其影響。

2.4 NDV 感染對(duì)外源RPL11 蛋白表達(dá)影響的檢測(cè)結(jié)果構(gòu)建的重組質(zhì)粒pFlag-RPL11 經(jīng)測(cè)序鑒定正確后轉(zhuǎn)染DF-1 細(xì)胞，24 h 后收集細(xì)胞蛋白樣品。western blot 結(jié)果顯示，轉(zhuǎn)染重組質(zhì)粒的細(xì)胞相對(duì)轉(zhuǎn)染空質(zhì)粒的對(duì)照細(xì)胞在20 ku～25 ku 的位置出現(xiàn)了特異性條帶與預(yù)期一致（圖4A），表明重組質(zhì)粒在DF-1 細(xì)胞中表達(dá)了RPL11 蛋白。將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染DF-1 細(xì)胞24 h 后，再分別以不同劑量的NDV 感染24 h，western blot 檢測(cè)結(jié)果顯示與對(duì)照細(xì)胞相比，NDV 感染細(xì)胞的外源RPL11 的表達(dá)量明顯下降，且下降程度隨著感染病毒劑量的增加而更明顯，病毒NP 蛋白的表達(dá)量卻在增加（圖4B）。以上結(jié)果表明NDV 感染細(xì)胞后也可以導(dǎo)致外源RPL11 蛋白表達(dá)水平下降，且該下降程度與病毒的感染劑量呈正相關(guān)。

圖2 NDV 感染后RPL11 的蛋白水平和轉(zhuǎn)錄水平的檢測(cè)Fig.2 Detect of the expression and transcription level of RPL11 after NDV infection

圖3 NDV 感染后RPL11 蛋白分布變化的激光共聚焦檢測(cè)結(jié)果Fig.3 Confocal laser detection results of protein distribution changes after NDV infection

圖4 NDV 感染細(xì)胞后對(duì)外源RPL11 蛋白表達(dá)影響的檢測(cè)結(jié)果Fig.4 Effect of NDV infection on the expression of exogenous RPL11 protein

2.5 蛋白酶抑制劑對(duì)NDV 感染細(xì)胞后RPL11 蛋白表達(dá)影響的檢測(cè)結(jié)果將MOI 1 的NDV 感染DF-1細(xì)胞1 h后，添加MG132，24 h后收集細(xì)胞上清，測(cè)定病毒的TCID50并經(jīng)western blot檢測(cè)RPL11蛋白的表達(dá)。病毒滴度測(cè)定結(jié)果顯示， MG132 處理和不處理的細(xì)胞病毒滴度分別為10-7.4TCID50/mL和10-7.2TCID50/mL，統(tǒng)計(jì)學(xué)分析顯示二者無(wú)明顯差異（p>0.05）（圖5A）。Western blot 結(jié) 果 顯 示，MG132 處 理 的細(xì) 胞RPL11 的表達(dá)量比NDV 感染但未經(jīng)該藥物處理的細(xì)胞有所增加，然而較正常對(duì)照細(xì)胞仍略微下降，且NP 蛋白的表達(dá)量略有下降（圖5B）。上述結(jié)果表明使用MG132 處理細(xì)胞后，可以回補(bǔ)NDV 感染導(dǎo)致的RPL11 蛋白表達(dá)水平的下降，進(jìn)而也表明RPL11 表達(dá)水平的下降是由于蛋白泛素酶體途徑導(dǎo)致蛋白的降解所致。

圖5 蛋白酶抑制劑MG132 對(duì)NDV 感染細(xì)胞后RPL11蛋白表達(dá)影響的檢測(cè)結(jié)果Fig.5 Effect of protease inhibitor MG132 on RPL11 protein expression after NDV infection

3 討 論

完整核糖體（Ribosome）是一個(gè)橢球形的粒狀無(wú)膜細(xì)胞器，由40S 小亞基和60S 大亞基組成。其中60S 大亞基是由47 種大亞基蛋白和5S RNA、28S RNA 以及5.8S RNA 3 種核糖體RNA 包裹而成，RPL11 是核糖體60S 大亞基的重要組成部分，是其起始合成的核心原件[10]。

本研究通過(guò)Puromycin 標(biāo)記NDV 感染細(xì)胞后的胞內(nèi)新生蛋白，發(fā)現(xiàn)宿主新生蛋白的合成受到明顯抑制；使用NDV NP 蛋白MAb 進(jìn)行western blot 檢測(cè)發(fā)現(xiàn)病毒蛋白的合成卻一直呈增加趨勢(shì)。隨后發(fā)現(xiàn)細(xì)胞內(nèi)核糖體蛋白R(shí)PL11 呈明顯減少趨勢(shì)，且與病毒感染劑量和感染時(shí)間成正相關(guān)。但qRT-PCR 結(jié)果卻顯示RPL11 基因mRNA 的轉(zhuǎn)錄水平無(wú)明顯變化。通過(guò)外源轉(zhuǎn)染pFlag-RPL11 再感染NDV，發(fā)現(xiàn)NDV可使外源性RPL11 蛋白的表達(dá)水平下降。隨后使用泛素蛋白酶體抑制劑MG132 處理細(xì)胞，顯示NDV 介導(dǎo)的RPL11 蛋白表達(dá)下降可被特異性阻斷。綜上得出如下結(jié)論：NDV 感染DF-1 后，可導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)的RPL11 蛋白通過(guò)泛素蛋白酶體依賴途徑所降解。

本研究結(jié)果表明NDV 感染細(xì)胞導(dǎo)致RPL11 表達(dá)量降低后僅影響宿主蛋白的合成，而病毒NP 蛋白的含量卻隨感染時(shí)間的延長(zhǎng)呈一直增加的趨勢(shì)。此前有研究報(bào)道表明核糖體大亞基蛋白R(shí)PL13 對(duì)于酵母的蛋白翻譯是必須的，但在人單核細(xì)胞U937 細(xì)胞中敲除RPL13，對(duì)細(xì)胞的多聚核糖體的形成、整體翻譯活性、翻譯保真度和細(xì)胞增殖等均無(wú)顯著影響，而僅對(duì)核糖體RNA 的甲基化水平有影響[11]。基于此，本研究提出一個(gè)假設(shè)，即病毒感染后，由于胞內(nèi)核糖體大亞基蛋白R(shí)PL11 的表達(dá)量明顯下降，導(dǎo)致其形成完整的核糖體受到影響，這對(duì)細(xì)胞自身蛋白合成來(lái)說(shuō)可能是致命的，具體表現(xiàn)為細(xì)胞內(nèi)新合成蛋白顯著下降。由于NP 蛋白的含量一直增加，因此推測(cè)RPL11 對(duì)于病毒蛋白的合成可能是非必須，缺少RPL11 蛋白的不完整核糖體可翻譯一些特定類型的mRNA 進(jìn)而有利于病毒復(fù)制。后續(xù)本研究團(tuán)隊(duì)將進(jìn)一步驗(yàn)證該假說(shuō)是否成立。

泛素蛋白酶體系統(tǒng)（UPS）是細(xì)胞內(nèi)ATP 依賴的非溶酶體蛋白降解系統(tǒng)，可以降解細(xì)胞內(nèi)80%～90%的蛋白[12-13]，包括：細(xì)胞周期調(diào)節(jié)因子、腫瘤抑制因子、轉(zhuǎn)錄激活和抑制因子、細(xì)胞表面受體以及突變或受損的蛋白等[14-15]。據(jù)報(bào)道真核細(xì)胞中核糖體相關(guān)蛋白的質(zhì)量控制（RQC）也是被E3 泛素連接酶Ltn1 所控制，該E3 連接酶可識(shí)別處于“失速”狀態(tài)的核糖體，進(jìn)而將其泛素化和降解[16]，后續(xù)本團(tuán)隊(duì)將對(duì)RPL11 蛋白的降解是否與Ltn1 酶有關(guān)深入探究。此 外RPL11 和RPL5 以 及5S rRNA 形 成的5S RNP 是形成核糖體60S 大亞基的必須單位，并已證實(shí)RPL5與RPL11 的穩(wěn)定性具有高度相互依賴關(guān)系[7]。NDV感染后RPL11 發(fā)生泛素化降解，但本研究未檢測(cè)RPL5 和5S rRNA 的表達(dá)變化。后續(xù)將系統(tǒng)地對(duì)構(gòu)成5S RNP 的組分進(jìn)行檢測(cè)，以整體分析NDV 感染后5S RNP 的表達(dá)變化。本研究為解析NDV 感染后宿主細(xì)胞內(nèi)蛋白翻譯的變化提供了新的著眼點(diǎn)。