牛雪妮，羅 文，呂重寧，路金才

野山參中1個新的聚炔類化合物

牛雪妮，羅 文，呂重寧，路金才*

沈陽藥科大學中藥學院，遼寧 沈陽 110016

研究野山參根與根莖的化學成分。利用HPD-400大孔吸附樹脂和反相硅膠柱色譜以及半制備高效液相色譜等方法進行分離純化，通過質譜、核磁共振波譜（1H- 和13C-NMR以及HSQC、HMBC實驗）等手段鑒定化合物結構。從野山參70%乙醇提取物經HPD-400大孔吸附樹脂90%乙醇洗脫部位分離得到5個化合物，分別鑒定為8-癸烷-4,6-二炔-1β吡喃葡萄糖基-(1→2)-β吡喃葡萄糖苷（1）、三七皂苷Rt（2）、20()-人參皂苷F4（3）、人參皂苷Rg6（4）、20()-人參皂苷Rg9（5）?；衔?為新的聚炔類化合物，命名為人參炔氧苷A；化合物2～5為首次從野山參中分離得到。

野山參；人參；人參炔氧苷A；聚炔類化合物；人參皂苷；三七皂苷Rt；20()-人參皂苷F4；人參皂苷Rg6

人參系五加科（Araliaceae）人參屬植物人參C. A. Meyer的干燥根及根莖[1]。根據其生長環(huán)境與生長模式，人參可分為野生人參、林下山參和園參。自然傳播、生長于深山密林的原生態(tài)人參為“野生人參”。播種在深山密林中自然生長的為“林下山參”，多于播種后10年以上采收。按《野山參鑒定及分等質量》GBT18765-2015規(guī)定，生長年限達15年以上的林下山參稱為“野山參”。栽培者為“園參”，多于播種后3～6年采收[2?4]。目前市場上流通的人參多為林下山參與園參，然而人參相關研究大多集中在園參及其加工品，對林下山參（含野山參）的研究相對較少[5-6]。研究表明人參的化學成分主要為三萜及其苷類[7]、聚炔類[8-10]、倍半萜類[11]以及氨基酸、生物堿、寡糖等其他類型化合物。其中，三萜及其苷類主要是以達瑪烷型、齊墩果烷型為母核的三萜及其苷類化合物，目前分離得到的人參皂苷絕大多數為達瑪烷型和齊墩果烷型，是人參的主要活性成分[12-13]。另外，從人參中分離得到的以人參炔醇、人參環(huán)氧炔醇為代表的聚炔類化合物具有營養(yǎng)及保護神經細胞、抗腫瘤和預防心腦血管系統(tǒng)疾病等藥理作用[14]。因此，林下山參作為目前商品人參的重要來源，對其進行深入研究十分必要，本研究選取野山參對其化學成分進行系統(tǒng)研究。

本研究利用HPD-400大孔吸附樹脂柱色譜、硅膠開放柱色譜、半制備高效液相色譜對野山參的根及根莖進行了系統(tǒng)的分離純化研究，得到5個單體化合物，并通過質譜、核磁共振波譜等手段分別鑒定為8-癸烷-4,6-二炔-1β吡喃葡萄糖基- (1→2)-β吡喃葡萄糖苷[8-decane-4,6-diyn-1βglucopyranosyl-(1→2)-βglucopyranoside，1]、三七皂苷Rt（notoginsenoside Rt，2）、20()-人參皂苷F4[20()-ginsenoside F4，3]、人參皂苷Rg6（ginsenoside Rg6，4）、20()-人參皂苷Rg9[20()-ginsenoside Rg9，5]?；衔?為新的聚炔類化合物，命名為人參炔氧苷A；化合物2～5為首次從野山參中分離得到。

1 儀器與材料

Bruker ARX-600核磁共振波譜儀（Bruker Co.，Billerica，MA，USA）；Shimadzu ftir-8400s紅外光譜儀（Shimadzu Corporation，Tokyo，Japan）；Micro TOF質譜（Bruker Co.，Karlsruhe，Germany）；L5S紫外可見分光光度計（上海棱光科技技術有限公司）；LC-10A制備HPLC（Shimadzu，Kyoto，Japan）配置SPD-10A檢測器（Shimadzu，Kyoto，Japan）；半制備高效液相色譜柱為YMC Pack ODS-A 色譜柱（250 mm×10 mm，5 μm；YMC Co.，Ltd.，Kyoto，Japan）。

薄層色譜用硅膠G和柱色譜用硅膠（100～200、200～300目）購自青島海洋化工有限公司分廠；柱色譜用ODS（20 μm）購自YMC上海代表處；分析級甲醇、乙醇、二氯甲烷購買自天津市永大化學試劑有限公司；色譜級甲醇和乙腈購自天津市富宇精細化工有限公司；純凈水購自杭州娃哈哈集團有限公司；氘代試劑均購買自西格瑪奧德里奇（上海）貿易有限公司。

野山參采自遼寧省桓仁滿族自治縣，經沈陽藥科大學中藥學院路金才教授鑒定為五加科人參屬植物野山參C. A. Meyer的根及根莖。標本（MCG-20190830）存放于沈陽藥科大學中藥學院標本室。

2 提取與分離

取野山參干燥藥材約5 kg，切成約0.5 mm的薄片，水煎煮提取3次，水用量分別為75、60、50 L，提取時間分別為3、3、2 h。提取完畢后，濾過，合并濾液，減壓濃縮至15 L，濃縮液以HPD-400大孔吸附樹脂柱色譜初步純化，再依次以水及60%、90%乙醇溶液洗脫，90%乙醇洗脫液減壓濃縮得浸膏約217.8 g，用于本實驗的分離。

將上述干燥后的粗提物經硅膠柱色譜，以二氯甲烷-甲醇-水系統(tǒng)（15∶1∶0→9∶1∶0.1→5∶1∶0.1→4∶1∶0.1→6∶2∶0.2→6∶4∶0.4→0∶1∶0）梯度洗脫得到15個組分（Fr. 1～15）。Fr.6經ODS開放柱色譜梯度洗脫（18%→30%→40%→ 50%→76%→90%→100%甲醇梯度洗脫）得到6個亞組分（Fr. 6-1～6-6），Fr. 6-2經半制備HPLC（45%甲醇水溶液洗脫）得到化合物1（20 mg，R＝77 min）；Fr. 6-3經半制備HPLC（28%乙腈洗脫）得到化合物2（6 mg，R＝27 min）；Fr. 6-4經半制備HPLC（70%甲醇洗脫）得到化合物3（18 mg，R＝95 min）、4（9 mg，R＝106 min）、5（7 mg，R＝116 min）。

3 結構鑒定

表1 化合物1的1H- 和13C-NMR譜數據(600/150 MHz, DMSO-d6)

圖1 化合物1主要的HMBC相關圖

化合物2：白色粉末；TLC檢測，噴霧10%硫酸乙醇試液顯紫紅色。1H-NMR (600 MHz, Py-5) 譜顯示有9個角甲基的質子信號H0.96 (3H, s), 1.07 (3H, s), 1.24 (3H, s), 1.58 (3H, s), 1.60 (3H, s), 1.60 (3H, s), 1.65 (3H, s), 2.07 (3H, s), 2.09 (3H, s)；2個糖基端基質子信號H5.05 (1H, d,= 7.7 Hz), 5.22 (1H, d,= 7.7 Hz) 及C-3上的質子信號H3.51 (1H, dt,= 11.2, 5.1 Hz)；13C-NMR (150 MHz, Py-5)譜顯示出44個碳信號，其中C61.8 (C-5)為達瑪烷母核取代羥基C-6的特征信號；C98.6和C106.3為兩個糖基端基碳信號；C126.3和131.3為達瑪烷母核側鏈上的2個烯碳（C-24、C-25）信號；C171.3為羰基碳信號。化合物2的1H-NMR譜及13C-NMR譜信號與文獻報道一致[20]，故確定化合物2為三七皂苷Rt，碳信號歸屬見表2。

化合物3：白色粉末，TLC檢測，噴霧10%硫酸乙醇試液顯紫紅色。1H-NMR (600 MHz, Py-5) 譜顯示有9個甲基質子信號H: 0.98 (3H, s), 1.00 (3H, s), 1.27 (3H, s), 1.38 (3H, s), 1.59 (3H, s), 1.64 (3H, s), 1.80 (3H, s), 1.81 (3H, s), 2.14 (3H, s)；2個糖基端基質子信號H4.82 (1H, d,= 3.7 Hz), 5.29 (1H, d,= 6.9 Hz)；2個烯烴質子信號H5.48 (1H, t,= 7.1 Hz), 5.23 (1H, t,= 7.3 Hz) 及C-3上的質子信號H3.50 (1H, dd,= 11.0, 5.1 Hz)。13C-NMR (150 MHz, Py-5) 譜顯示出40個碳信號，其中C61.2 (C-5) 為達瑪烷母核C-6有羥基取代時的特征信號；C102.2與C102.3為2個糖基端基碳信號；C131.6和140.5為達瑪烷母核側鏈上的2個烯碳信號。將化合物3的1H- 和13C-NMR譜信號與文獻報道對比[21]，發(fā)現除化合物3的2個烯碳信號被吡啶溶劑峰所掩蓋外，其余數據基本一致，故鑒定化合物3為20()-人參皂苷F4，碳信號歸屬見表2。

化合物4：白色粉末；TLC檢測，噴霧10%硫酸乙醇試液顯紫紅色。1H-NMR (600 MHz, Py-5) 譜顯示有8個甲基的質子信號H: 0.99 (3H, s), 1.00 (3H, s), 1.27 (3H, s), 1.38 (3H, s), 1.61 (3H, s), 1.69 (3H, s), 1.81 (3H, s), 2.15 (3H, s)；2個糖基端基質子信號H4.82 (1H, d,= 3.7 Hz), 5.29 (1H, d,= 7.1 Hz)；3個烯烴質子峰H4.91 (1H, s), 5.13 (1H, s), 5.32 (1H, tt,= 6.8, 1.4 Hz) 及C-3上的質子信號H3.50 (1H, m)。13C-NMR譜(150 MHz, Py-5) 顯示出42個碳信號，其中C61.2 (C-5) 為達瑪烷母核C-6有羥基取代時的特征信號；C108.4, 125.7, 131.6, 155.8為達瑪烷母核側鏈上的4個烯碳（C-21、C-24、C-25、C-20）信號；C102.2, 102.3為2個端基碳信號。以上波譜信號與文獻報道基本一致[22]，故鑒定化合物4為人參皂苷Rg6，碳信號歸屬見表2。

表2 化合物2～5的13C-NMR譜(150 MHz, Py-d5)數據

a-表示信號峰被溶劑峰掩蓋

a-covered by solvent signal

化合物5：白色粉末；TLC檢測，噴霧10%硫酸乙醇試液顯紫紅色。1H-NMR (600 MHz, Py-5) 譜顯示有8個角甲基的質子信號H: 0.83 (3H, s), 0.99 (3H, s), 1.23 (3H, s), 1.49 (3H, s), 1.59 (3H, s), 1.63 (3H, s), 1.83 (3H, s), 2.10 (3H, s)；2個糖基端基質子信號H4.97 (1H, d,= 7.4 Hz) 和 5.80 (1H, d,= 6.5 Hz)；13C-NMR (150 MHz, Py-5) 譜顯示出39個碳信號, 其中C61.7 (C-5) 為達瑪烷母核C-6有羥基取代時的特征信號；C103.9、105.3為2個糖端基碳信號；C131.6和140.5為達瑪烷母核側鏈上的2個烯碳信號。將化合物5的1H- 和13C-NMR譜信號與文獻報道[23]對比，發(fā)現化合物5的13C- NMR譜中，除有2個烯碳信號峰被溶劑峰所掩蓋外，其余數據基本一致，故確定化合物5為20()-人參皂苷Rg9，碳信號歸屬見表2。

4 討論

本實驗利用各種色譜分離及天然產物結構鑒定方法，對野山參70%乙醇提取物經HPD-400大孔吸附樹脂90%乙醇洗脫部位進行了研究，得到1個新的聚炔類化合物和5個已知的人參皂苷類化合物。該結果對野山參化學成分的深入挖掘及其專屬性成分的發(fā)現具有重要指導意義。

利益沖突 所有作者均聲明不存在利益沖突

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A new polyacetylene from wild ginseng

NIU Xue-ni, LUO Wen, LYU Chong-ning, LU Jin-cai

School of Traditional Chinese Materia Medica, Shenyang Pharmaceutical University, Shenyang 110016, China

To study the chemical constituents from the root and rhizome of wild ginseng ().HPD-400 macroporous resin column chromatography, reversed phase silica gel column chromatography, semi-preparative HPLC methods were used for separation and purification, and mass spectrometry, nuclear magnetic resonance spectroscopy (1H-NMR,13C-NMR, HSQC and HMBC) were analyzed to identify compound structures.Five compounds were isolated from the 90% ethanol fraction of the 70% ethanol extract eluated by HPD-400 macroporous absorption resin from the root and rhizome of wild ginseng, and elucidated as 8-decane-4,6-diyn-1βglucopyranosyl-(1-2)-βglucopyranoside (1), notoginsenoside Rt (2), 20()-ginsenoside F4(3), ginsenoside Rg6(4) and 20()-ginsenoside Rg9(5).Compound 1 is a new polyacetylene, named as panaxyneoside A. Compounds 2—5 are isolated from wild ginseng for the first time.

wild ginseng;C. A. Meyer; panaxyneoside A; polyacetylenes; ginsenosides; notoginsenoside Rt; 20()-ginsenoside F4; ginsenoside Rg6

R284.1

A

0253 - 2670(2021)01 - 0023 - 05

10.7501/j.issn.0253-2670.2021.01.004

2020-08-27

國家重點研發(fā)計劃項目（2017YFC1702302）

牛雪妮，博士研究生在讀，研究方向為生藥學。E-mail: niuxueni@outlook.com

路金才，博士研究生導師，教授，主要研究方向為藥用植物資源開發(fā)及創(chuàng)新藥物研究。E-mail: jincailu@126.com

[責任編輯 王文倩]