河南省漯河市源匯區(qū)疾病預(yù)防控制中心（462000）張真真 謝明慧

突發(fā)公共衛(wèi)生事件為突然發(fā)生，造成或者可能造成社會(huì)公眾健康嚴(yán)重?fù)p害的重大傳染病疫情、群體性不明原因疾病、重大食物和職業(yè)中毒以及其他嚴(yán)重影響公眾健康的事件，為盡量降低突發(fā)公共事件的危害性，在其發(fā)生后需要及時(shí)做出有效的處理[1]。近年來(lái)隨著我國(guó)環(huán)境的不斷惡化，各種傳染性疾病的發(fā)病率越來(lái)越高，由于其發(fā)展迅速、波及范圍較廣，在對(duì)其進(jìn)行處理時(shí)要格外注重時(shí)效性[2]。微生物快速檢測(cè)技術(shù)的應(yīng)用不僅可以有效幫助醫(yī)務(wù)人員快速了解病情發(fā)生根源以及各類病原微生物變異情況等，而且還可以為其控制措施的制定帶來(lái)一定指導(dǎo)[3]。面對(duì)不同的突發(fā)公共衛(wèi)生事件，微生物快速檢驗(yàn)技術(shù)的應(yīng)用以及要求也不同，為此本文將圍繞如何在突發(fā)公共衛(wèi)生事件中有效應(yīng)用各種微生物快速檢驗(yàn)技術(shù)作詳細(xì)綜述，以望為后期突發(fā)公共衛(wèi)生事件微生物快速檢驗(yàn)技術(shù)的選擇以及應(yīng)用開(kāi)展帶來(lái)一定參考指導(dǎo)作用。

1 微生物快速檢驗(yàn)技術(shù)

微生物是個(gè)體無(wú)法用肉眼觀察到的極小生物的統(tǒng)稱，主要包括細(xì)菌、病毒等，涉及藥品、食品、環(huán)境等諸多領(lǐng)域。其對(duì)人類的影響包括有益和有害兩個(gè)方面，其中有害方面對(duì)人類影響最大的是傳染病的流行，人類有50%的疾病是由病毒引起的，但人類在對(duì)抗病毒的同時(shí)也取得了巨大進(jìn)步，比如青霉素的發(fā)現(xiàn)，這在二戰(zhàn)中挽救了無(wú)數(shù)人的性命[4]。

由于微生個(gè)體較小且生長(zhǎng)繁衍非常迅速，這對(duì)微生物的檢驗(yàn)提出了挑戰(zhàn)。傳統(tǒng)的檢驗(yàn)技術(shù)主要是采用試管法、培養(yǎng)膜法和濾膜法進(jìn)行檢驗(yàn)，這種方法步驟較繁瑣、檢驗(yàn)數(shù)量有限以及技術(shù)的限制，一般經(jīng)過(guò)反復(fù)試驗(yàn)才能做出判斷?？焖贆z驗(yàn)方法主要包括聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)檢測(cè)技術(shù)以及膠體金免疫技術(shù)，這些技術(shù)可以減少成本、縮短庫(kù)存時(shí)間、培養(yǎng)時(shí)間，提高檢驗(yàn)的靈敏度[5]。

國(guó)家現(xiàn)使用微生物快速檢驗(yàn)技術(shù)是國(guó)內(nèi)外安全的需要，是現(xiàn)在日益嚴(yán)重的安全局勢(shì)的需要，比如2003年的SARS和2019年的新冠狀病毒的流行。使用這類技術(shù)可以快速得到檢驗(yàn)結(jié)果，節(jié)省人力物力，保障國(guó)家和人們生命安全。因此從長(zhǎng)遠(yuǎn)發(fā)展趨勢(shì)來(lái)說(shuō)，微生物快速檢驗(yàn)方法是應(yīng)對(duì)突發(fā)公共衛(wèi)生事件的一大方向。

2 微生物快速檢驗(yàn)技術(shù)在各類突發(fā)公共衛(wèi)生事件中的應(yīng)用

2.1 鼠疫 鼠疫是由鼠疫耶爾森菌感染引起的烈性傳染病，主要傳播途徑為鼠蚤叮咬，除此之外通過(guò)病獸或者是直接接觸患者體液等也可以傳染。鼠疫屬于我國(guó)法定傳染疾病中的甲類傳染病，不僅傳播速度快，而且致死率高，暴發(fā)后容易發(fā)生大面積傳染發(fā)病，會(huì)對(duì)人們的健康以及生命安全帶來(lái)嚴(yán)重威脅。以往細(xì)菌培養(yǎng)是鼠疫的傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)方式，不足之處在于檢驗(yàn)耗時(shí)長(zhǎng)。近年來(lái)鼠疫的檢驗(yàn)水平隨著我國(guó)醫(yī)學(xué)技術(shù)的不斷提高而發(fā)生了明顯上升，其中雙重聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)具有良好的醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)效果。既往有相關(guān)研究[6]在對(duì)66例鼠疫患者的研究中，通過(guò)雙重聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)對(duì)其淋巴液進(jìn)行了檢查，結(jié)果顯示陽(yáng)性例數(shù)共計(jì)61例，陽(yáng)性檢出率為92.42%，認(rèn)為雙重聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)可以有效提高鼠疫檢出效果，能夠有效幫助臨床診療工作的開(kāi)展。除此之外，也有學(xué)者[7]表示，在鼠疫細(xì)菌檢驗(yàn)中，膠體金免疫滲濾實(shí)驗(yàn)由于不會(huì)和其他類型細(xì)菌發(fā)生交叉影響，加之其檢驗(yàn)耗時(shí)短，通?？梢栽谑昼娭畠?nèi)完成檢驗(yàn)，因此在鼠疫細(xì)菌檢驗(yàn)中具有良好的檢驗(yàn)應(yīng)用價(jià)值。膠體金免疫滲濾實(shí)驗(yàn)和反向間接血凝實(shí)驗(yàn)比較相似，但是二者檢驗(yàn)效果比較，前者要更優(yōu)。

2.2 SARS 它是一種由于SARS冠狀病毒引起的重癥急性呼吸綜合征，于2002年在我國(guó)廣東發(fā)生，同時(shí)迅速擴(kuò)散至東南亞乃至全球，為全球性傳染病疫潮之一。聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)、病毒管分離檢測(cè)、間接免疫熒光法抗體檢測(cè)以及酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定等均為SARS常見(jiàn)檢驗(yàn)方法[8]。其中間接免疫熒光法抗體檢測(cè)在SARS檢驗(yàn)中，患者發(fā)病10小時(shí)后是其最有效的應(yīng)用時(shí)間，檢測(cè)結(jié)果具有較高的可靠性以及客觀性。反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)已經(jīng)普遍應(yīng)用于SARS檢驗(yàn)中。而對(duì)于酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法，目前較多研究均表示其在SARS發(fā)病21天后具有更為良好的檢測(cè)效果。除此之外，也有學(xué)者[7]表示，通過(guò)在SARS病毒診斷期間制作基因芯片進(jìn)行檢驗(yàn)，可以獲取更高的檢測(cè)準(zhǔn)確性，通常患者檢測(cè)準(zhǔn)確性可以超過(guò)90%，同時(shí)還具有較高的檢測(cè)靈敏度。

2.3 霍亂 霍亂主要是攝入被霍亂弧菌污染的食物或水而導(dǎo)致發(fā)生的一種急性腹瀉性傳染病，以腹瀉以及嘔吐等為常見(jiàn)臨床表現(xiàn)。據(jù)相關(guān)統(tǒng)計(jì)資料顯示[9]，每年大約有四百萬(wàn)的霍亂病例，每年因霍亂死亡的患者例數(shù)大約有十萬(wàn)左右，以夏季為高發(fā)季節(jié)?；魜y作為烈性腸道傳染病，病情發(fā)展迅速，不及時(shí)治療可能會(huì)導(dǎo)致患者發(fā)生脫水以及水電解質(zhì)絮亂等情況，影響體內(nèi)循環(huán)質(zhì)量，嚴(yán)重可導(dǎo)致患者發(fā)生循環(huán)衰竭，對(duì)其生命安全帶來(lái)嚴(yán)重威脅。分離培養(yǎng)聯(lián)合血清凝集試驗(yàn)為霍亂常見(jiàn)的一種傳統(tǒng)微生物檢驗(yàn)技術(shù)方法，檢測(cè)耗時(shí)一般需要24小時(shí)以上，檢驗(yàn)時(shí)間長(zhǎng)[10]。通過(guò)對(duì)水樣便分離進(jìn)行4號(hào)瓊脂培養(yǎng)可以對(duì)檢測(cè)時(shí)間進(jìn)行縮短，一般檢驗(yàn)結(jié)果可以在7小時(shí)左右出具。近年來(lái)，在霍亂檢驗(yàn)中，聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)得到越來(lái)越廣泛的應(yīng)用，檢驗(yàn)耗時(shí)短，其整個(gè)檢驗(yàn)過(guò)程一般2小時(shí)即可完成。除此之外，聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)不會(huì)和副溶血性弧菌發(fā)生交叉反應(yīng)，不僅更有利于提高霍亂檢驗(yàn)效果，而且還可以進(jìn)一步縮短檢驗(yàn)時(shí)間。在霍亂檢驗(yàn)中，膠體金免疫技術(shù)也有一定應(yīng)用，有學(xué)者[11]在對(duì)霍亂患者的肛拭子標(biāo)本中，通過(guò)為期6小時(shí)的堿性胨水增菌培養(yǎng)后，再選擇膠體金免疫技術(shù)開(kāi)展檢測(cè)，結(jié)果顯示其檢測(cè)敏感度為105CFU/mL。此外，也有一些研究報(bào)道表明，基因芯片技術(shù)在本病中應(yīng)用日趨成熟。

2.4 病毒性肝炎 甲型病毒性肝炎以及戊型病毒性肝炎均為臨床常見(jiàn)的兩種病毒性肝炎類型，以口鼻和糞便為主要傳播途徑，是一種嚴(yán)重的傳染性疾病，發(fā)病后患者病情發(fā)展相對(duì)較快，可在短時(shí)間內(nèi)廣泛傳播，容易流行暴發(fā)。如何進(jìn)一步提高病毒性肝炎的防控效果一直以來(lái)都是我國(guó)公共衛(wèi)生研究中的一個(gè)重要研究課題，目前有學(xué)者[12]針對(duì)病毒性肝炎建立了一個(gè)能夠同時(shí)檢測(cè)甲型病毒性肝炎以及戊型病毒性肝炎的模型，根據(jù)此模型的相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)以及要求進(jìn)行檢測(cè)，其對(duì)甲型病毒性肝炎和戊型病毒性肝炎檢測(cè)的準(zhǔn)確率分別為96%和98%，在病毒性肝炎檢測(cè)中具有良好的檢測(cè)應(yīng)用價(jià)值。另外也有相關(guān)研究報(bào)道指出，對(duì)于病毒性肝炎患者，通過(guò)酶免疫測(cè)試技術(shù)對(duì)其血清進(jìn)行檢驗(yàn)，無(wú)論檢驗(yàn)特異度還是檢驗(yàn)靈敏度，均可以達(dá)到90%以上。

2.5 傷寒以及副傷寒 傷寒以及副傷寒均為腸道傳染病，前者是由腸沙門菌腸亞種傷寒血清型引起的腸道傳染病，后者是由腸沙門菌腸亞種副傷寒甲或乙或丙血清型引起的急性傳染病，和前者比較相似。沙門菌種類多達(dá)兩千多種，在我國(guó)已被發(fā)現(xiàn)的種類就已經(jīng)超過(guò)兩百多種，不僅會(huì)嚴(yán)重傷害患者腸道，影響其身體健康，而且還具有較高的傳染性。在對(duì)傷寒以及副傷寒的檢查中，傳統(tǒng)常規(guī)培養(yǎng)方法檢查需要（4±1）天才可以得出檢查結(jié)果，容易延誤患者的最佳治療時(shí)機(jī)[13]。隨著近年來(lái)臨床對(duì)傷寒以及副傷寒檢查的不斷深入研究，近年來(lái)也有學(xué)者[14]指出，金標(biāo)免疫斑點(diǎn)法在傷寒以及副傷寒檢查中具有良好的檢查效果，通過(guò)對(duì)其開(kāi)展血清抗傷寒抗體檢驗(yàn)，傷寒患者的陽(yáng)性檢出率為82%；對(duì)于非傷寒患者，金標(biāo)免疫斑點(diǎn)法檢測(cè)的假陽(yáng)性率為4%，提示金標(biāo)免疫斑點(diǎn)法在傷寒中的良好檢測(cè)效果。另外也有研究報(bào)道指出，傷寒抗體檢驗(yàn)傷寒初期患者的陽(yáng)性率為93%，非傷寒患者陽(yáng)性率為9%。有學(xué)者指出，在副傷寒檢驗(yàn)中，PHA檢測(cè)方法具有操作簡(jiǎn)便、檢測(cè)效果好以及檢驗(yàn)速度快等優(yōu)點(diǎn)。

2.6 出血性腸炎 出血性腸炎是一種好發(fā)于小腸的局限性急性出血壞死性炎癥，在春秋季節(jié)具有較高發(fā)病率，具體病因還不清楚，但是多數(shù)學(xué)者均認(rèn)為其和腸道缺血感染等因素存在密切關(guān)系。在各種細(xì)菌類型中，H7大腸桿菌是出血性腸炎常見(jiàn)的主要致病菌，由于其具有相對(duì)較強(qiáng)的爆發(fā)性，因此也是導(dǎo)致多次暴發(fā)公共衛(wèi)生事件的主要原因之一。對(duì)于H7大腸桿菌，從其分離出來(lái)至今已經(jīng)帶來(lái)了較大的負(fù)面影響，飽受社會(huì)爭(zhēng)議。有相關(guān)研究[15]指出，在出血性腸炎檢測(cè)中，聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)技術(shù)檢出率較高，且不必耗費(fèi)較長(zhǎng)的檢測(cè)時(shí)間，具有較高的檢測(cè)準(zhǔn)確性，基本上可以排除沒(méi)有感染H7大腸桿菌的患者。

2.7 人感染高致病性禽流感 人感染高致病性禽流感是由禽流感病毒引起的急性呼吸道傳染病，其中H9N2、H5N1以及H7N7為目前常見(jiàn)的幾種感染類型。目前聚合酶鏈反應(yīng)技術(shù)為人感染高致病性禽流感常見(jiàn)的檢驗(yàn)方法之一，其在實(shí)際應(yīng)用中，不僅不會(huì)和H1以及H3發(fā)生交叉反應(yīng)，而且還具有較高的檢驗(yàn)準(zhǔn)確性以及檢驗(yàn)特異度。

2.8 登革熱 登革熱屬于急性蟲(chóng)媒傳染病之一，主要是由登革病毒引起的，以突起高熱、淋巴結(jié)腫大以及頭痛等為主要常見(jiàn)臨床表現(xiàn)。登革病毒感染后，可以導(dǎo)致登革出血熱，但是我國(guó)比較少見(jiàn)。據(jù)相關(guān)研究報(bào)道指出，登革熱患者最早可以在發(fā)病1d后出現(xiàn)抗體。通過(guò)酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)檢驗(yàn)登革熱患者的免疫球蛋白M，其陽(yáng)性檢出率會(huì)隨著其發(fā)病后的時(shí)間長(zhǎng)短發(fā)生顯著差異，發(fā)病時(shí)間低于3天者，其陽(yáng)性檢出率相對(duì)較低，僅為35%，而在發(fā)病4天后以及5天以上，其陽(yáng)性檢出率分別為80%和91%，因此登革熱患者發(fā)病時(shí)間越長(zhǎng)，其酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)檢驗(yàn)結(jié)果的陽(yáng)性率會(huì)越高。除此之外，逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)技術(shù)也具有良好的檢測(cè)應(yīng)用價(jià)值，登革熱病毒檢驗(yàn)效果理想。

3 結(jié)語(yǔ)

由于我國(guó)經(jīng)濟(jì)的快速發(fā)展，人們生活方式以及飲食習(xí)慣發(fā)生了巨大變化，同時(shí)環(huán)境也日益惡化，各種微生物突發(fā)公共衛(wèi)生事件不斷頻發(fā)，無(wú)論是對(duì)我們正常的生產(chǎn)生活還是對(duì)我們的身心健康以及生命安全，均會(huì)帶來(lái)嚴(yán)重影響。面對(duì)各類突發(fā)公共衛(wèi)生事件，其檢驗(yàn)方法也各不相同，需要廣大醫(yī)務(wù)工作者不斷進(jìn)行大量研究實(shí)驗(yàn)，以進(jìn)一步完善各種微生物快速檢驗(yàn)技術(shù)，尋求最佳檢驗(yàn)方法技術(shù)，以使其可以更好地應(yīng)用于各類突發(fā)公共衛(wèi)生事件中，從而在最大程度上降低其發(fā)展速度及其所致的經(jīng)濟(jì)損失，減少其對(duì)民眾造成的傷害。目前聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)檢測(cè)技術(shù)以及膠體金免疫技術(shù)均為近年來(lái)應(yīng)用相對(duì)廣泛的兩種微生物快速檢驗(yàn)技術(shù)，均具有其各自的優(yōu)勢(shì)及特點(diǎn)。雖然基因芯片檢測(cè)技術(shù)還處于研究階段，但是相信未來(lái)的不斷深入研究，其一定可以在突發(fā)公共衛(wèi)生事件應(yīng)用中發(fā)揮更大價(jià)值。