王菊英， 蘇 明

（寧夏醫(yī)科大學(xué)總醫(yī)院醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)中心，銀川 750004）

根據(jù)檢驗(yàn)?zāi)康暮鸵蟮牟煌?，人類免疫缺陷病毒（HIV）檢測(cè)方法有抗原抗體檢測(cè)、病毒分離培養(yǎng)檢測(cè)、病毒核酸定性定量、病毒基因分型、病毒耐藥檢測(cè)等[1]。在這些檢測(cè)技術(shù)中，抗體檢測(cè)是應(yīng)用時(shí)間最長(zhǎng)、方法成熟、操作簡(jiǎn)便、特異性和敏感性均較高的一類檢測(cè)方法，被廣泛應(yīng)用于HIV感染的篩查和確認(rèn)工作中[2]。我國HIV 抗體篩查實(shí)行先初篩、復(fù)檢再確證的策略。有報(bào)道[3]表明，我國HIV 抗體檢測(cè)試劑診斷效能存在一定的差異。WHO 調(diào)查數(shù)據(jù)表明[4]，155 個(gè)國家執(zhí)行100%的HIV 篩查，僅71 個(gè)國家使用質(zhì)量有保證的HIV篩查方法。本研究以免疫印跡實(shí)驗(yàn)（WB）為金標(biāo)準(zhǔn)，分析評(píng)價(jià)了化學(xué)發(fā)光法（CLIA）、膠體金及酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)（ELISA）檢測(cè)HIV 抗體的準(zhǔn)確性，結(jié)合各自方法學(xué)的特點(diǎn)，確立并驗(yàn)證了本室HIV 抗體初篩、復(fù)檢及確證等篩查策略的可行性，為避免因試劑敏感性差異導(dǎo)致漏送，針對(duì)經(jīng)復(fù)檢驗(yàn)證無須做確證實(shí)驗(yàn)的樣本，其檢測(cè)報(bào)告中添加備注，匯報(bào)如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

131例研究對(duì)象來自寧夏醫(yī)科大學(xué)總醫(yī)院2018年5—11月的門診及住院患者，其中男性79例，女性52例，年齡1～77 歲，平均年齡（42.49±18.3）歲。

1.2 儀器與試劑

HIV 抗體CLIA 檢測(cè)使用奧森多VITROS3600全自動(dòng)免疫分析儀及其配套試劑；膠體金試劑由英科新創(chuàng)（廈門）科技有限公司提供；ELISA 試劑由北京萬泰生物藥業(yè)股份有限公司提供。

1.3 方法

將131例采用CLIA 初篩的HIV 抗體有反應(yīng)血清樣本，采用CLIA 法、膠體金及ELISA 復(fù)檢，同時(shí)將所有樣本送寧夏回族自治區(qū)疾病預(yù)防控制中心（CDC）WB 確證。檢測(cè)和送檢程序及質(zhì)量保證措施嚴(yán)格執(zhí)行科室相關(guān)文件。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 25.0 軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。CLIA 檢測(cè)95%陽性預(yù)測(cè)S/CO 值采用受試者工作特征曲線（ROC）確立，樣本率比較采用χ2檢驗(yàn)，均數(shù)比較采用獨(dú)立樣本t 檢驗(yàn)，P≤0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 CLIA 檢測(cè)HIV 抗體的準(zhǔn)確性

131例CLIA 初篩有反應(yīng)血清樣本，經(jīng)CLIA復(fù)檢符合率為100%（131/131）；經(jīng)WB 確認(rèn)陽性55例、陰性73例、不確定3例；排除3例不確定結(jié)果，其檢測(cè)敏感性為100%（55/55）；128例經(jīng)WB 明確確證病例結(jié)果經(jīng)ROC 確立，其95%陽性預(yù)測(cè)S/CO 值為7.0025，曲線下面積（AUC）=0.999，標(biāo)準(zhǔn)誤差（SD）=0.997，P＜0.001。

2.2 膠體金及ELISA 的準(zhǔn)確性

128例經(jīng)WB 明確確證病例中，膠體金檢測(cè)55例陽性、61例陰性，敏感度100%（55/55）、特異性91.78%（67/73）；ELISA 檢測(cè)60例陽性、68例陰性，敏感度98.18%（54/55）、特異度93.15%（68/73）；膠體金與ELISA 敏感度差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=1.01，P=0.32）、特異度差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=0.10，P=0.75）；63例膠體金及ELISA 同時(shí)陰性者WB 均為陰性。

2.3 CLIA

HIV 抗體檢測(cè)結(jié)果的S/CO 值與WB、膠體金及ELISA 一致性比較，本研究54例WB、膠體金及ELISA 均陽性者CLIA 的S/CO 值均＞7.0025，54例均陽性者S/CO 值高于63例均陰性者和11例不一致模式者（P均＜0.01），見表1。

表1 CLIA HIV 抗體檢測(cè)結(jié)果S/CO 值與WB、膠體金及ELISA 一致性的比較

3 討論

在檢測(cè)病原體時(shí)，應(yīng)首先進(jìn)行篩查實(shí)驗(yàn)或診斷實(shí)驗(yàn)。通常應(yīng)選擇靈敏度高的試劑，以最大可能地提高檢出率，避免漏檢[5]。本室應(yīng)用的CLIA、膠體金及ELISA 等HIV 抗體篩查實(shí)驗(yàn)均為定性實(shí)驗(yàn)。依據(jù)《臨床定性免疫檢驗(yàn)重要常規(guī)項(xiàng)目分析質(zhì)量要求》，篩查定性實(shí)驗(yàn)的檢測(cè)敏感性應(yīng)＞95%[6]。本研究CLIA、膠體金及ELISA 的敏感性分別為100%（55/55）、100%（55/55）、98.21%（54/55），都滿足篩查實(shí)驗(yàn)要求，均可用于HIV 抗體篩查。段美婷等[7]研究發(fā)現(xiàn)，CLIA 法檢測(cè)HIV 早期感染陽性率及敏感性均高于ELISA，與本研究CLIA 敏感性與ELISA 相一致。師毅等[8]研究證實(shí)，膠體金檢測(cè)HIV 的敏感度低于CLIA 等方法，與本研究?jī)烧叩拿舾行砸恢掠谐鋈?，可能與本研究納入樣本量有限相關(guān)。由此看來，CLIA 檢測(cè)HIV 抗體的敏感性高于膠體金和ELISA。另外，與膠體金及ELISA 相比，CLIA 在自動(dòng)化分析儀上完成，具有高通量、操作簡(jiǎn)便、易于標(biāo)準(zhǔn)化等優(yōu)點(diǎn)，更適宜作HIV 抗體初篩。由于窗口期的存在，不可避免出現(xiàn)窗口期漏檢的情況[9-12]，此種情況實(shí)驗(yàn)室無法知曉，但臨床醫(yī)生可根據(jù)對(duì)患者自述高危行為來評(píng)估，實(shí)驗(yàn)室得知后應(yīng)建議窗口期過后復(fù)檢。

2015年版《全國艾滋病檢測(cè)技術(shù)規(guī)范》中對(duì)HIV 抗體初篩有反應(yīng)的樣品復(fù)檢的規(guī)定，“對(duì)初篩有反應(yīng)的樣本，用原有試劑雙份或雙孔進(jìn)行復(fù)檢實(shí)驗(yàn)（或者兩種試劑復(fù)檢）”。本研究131例CLIA 有反應(yīng)樣本復(fù)檢符合率為100%，如果依據(jù)技術(shù)規(guī)范采用CLIA 雙份復(fù)檢，一陰一陽或兩陽均做確證實(shí)驗(yàn)，那么131例均應(yīng)送CDC。本研究63例膠體金及ELISA 復(fù)檢均陰性者，經(jīng)WB 確證亦皆為陰性。依據(jù)技術(shù)規(guī)范，如果復(fù)檢兩次檢測(cè)均陰性報(bào)告為“HIV 抗體陰性”，由此看來這63例陰性樣本就不用送檢。由于CDC 確證實(shí)驗(yàn)報(bào)告周期為1周，而艾滋病至今仍與歧視相關(guān)聯(lián)，患者一旦被冠以艾滋病相關(guān)的診斷都會(huì)對(duì)其造成極大的心理負(fù)擔(dān)[13-14]。文獻(xiàn)報(bào)道[15]及本研究都證實(shí)了，通過膠體金及ELISA 兩種試劑復(fù)檢，有利于降低初篩假陽性率，提高HIV 感染的檢出率，減少對(duì)臨床診療的困擾。

本文ROC 曲線結(jié)果顯示，CLIA 檢測(cè)HIV 抗體95%陽性預(yù)測(cè)S/CO 值為7.0025，54例WB、膠體金及ELISA 均陽性者CLIA 的S/CO 值均＞7.0025，54例均陽性者S/CO 值高于63例均陰性者和11例不一致模式者。由此說明，HIV 抗體CLIA 結(jié)果S/CO 值＞7.0025 且兩種復(fù)檢結(jié)果均為有反應(yīng)者，預(yù)示HIV 感染的可能性＞95%。由于確證實(shí)驗(yàn)報(bào)告滯后，遇到此類病例要盡快告知臨床加強(qiáng)個(gè)人防護(hù)，注意消毒。鑒于納入研究的樣本量有限，為了防止因復(fù)檢試劑敏感性低造成漏送，本室將膠體金及ELISA 復(fù)檢均陰性，S/CO 值在1～7.0025 的CLIA 有反應(yīng)樣本，采取了報(bào)告“HIV抗體陰性”、添加備注“建議一月后復(fù)檢”，并將此類患者信息做了詳細(xì)記錄，以便追蹤驗(yàn)證。在后續(xù)的工作中發(fā)現(xiàn)有6例經(jīng)追蹤監(jiān)測(cè)能轉(zhuǎn)為陰性，不過，也發(fā)現(xiàn)2例孕婦1 個(gè)月后復(fù)檢CLIA S/CO值均升高，且膠體金復(fù)檢有1例出現(xiàn)了弱陽性，但CDC 的確證結(jié)果均為陰性。文獻(xiàn)報(bào)道[16-17]，HIV抗體初篩檢測(cè)假陽性還與惡性腫瘤、心血管病、透析、自身免疫性肝病、妊娠等有關(guān)，本研究轉(zhuǎn)陰病例中4例為腫瘤患者、2例為心血管病，與之相符。這些疾病可使患者體內(nèi)含有某些治療性抗體，類脂異嗜性抗體、類風(fēng)濕因子等。這些物質(zhì)與試劑中的抗原成分非特異性結(jié)合，從而出現(xiàn)假陽性。因此，通過追蹤監(jiān)測(cè)分析總結(jié)HIV 抗體篩查實(shí)驗(yàn)出現(xiàn)假陽性的原因，在遇到CLIA S/CO 值在1～7.0025 時(shí)，能結(jié)合臨床診斷及復(fù)檢結(jié)果作出初步判斷，以便與臨床更加有效溝通。

綜上，本室確立的HIV 抗體初篩采用CLIA，有反應(yīng)樣本采用膠體金及ELISA 復(fù)檢，復(fù)檢后有反應(yīng)樣本送CDC 確證；經(jīng)復(fù)檢驗(yàn)證無須做確證實(shí)驗(yàn)的CLIA 有反應(yīng)樣本，其檢測(cè)報(bào)告中添加備注。此檢測(cè)及報(bào)告策略適用于HIV 臨床篩查。