李石化，楊建龍

（長春市食品藥品檢驗(yàn)中心，吉林 長春 130000）

雙黃連注射液是由金銀花、黃芩、連翹等經(jīng)現(xiàn)代制藥技術(shù)制成的中藥制劑[1-2]。其功效在于清熱解毒、清宣風(fēng)熱，在肺炎、咽炎等呼吸道病原菌感染中取得了良好的應(yīng)用效果[3-4]。作為雙黃連注射液的有效成分之一，黃芩苷含量是雙黃連注射液質(zhì)量控制的重要指標(biāo)之一[5]。黃芩苷含量多采用紫外分光光度法進(jìn)行測(cè)定，但是雙黃連注射液中其他有效成分會(huì)對(duì)其測(cè)定造成干擾。本次研究應(yīng)用反相高效液相色譜法（RP-HPLC）進(jìn)行測(cè)定其在雙黃連注射液中的含量，取得較好的效果。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

選擇德國KNAUER的高效液相色譜儀，G1314A檢測(cè)器，Ee-rchrom2000BasiEdition（v2.05）色譜工作軟件以及梅特勒-托利多公司的AB135s電子天平。

1.2 試藥

雙黃連注射液(黑龍江烏蘇里江制藥有限公司,批號(hào):19031609、19040813、19032215)。黃芩苷對(duì)照品由中國藥品生物制品鑒定所提供（批號(hào):110715-200514）。甲醇為色譜純，冰醋酸為分析純，水為蒸餾水。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

選擇Kromasil C18(150×4.6mm,5μm)的色譜，以甲醇：1%冰醋酸(50:50)作為流動(dòng)相,流速設(shè)定1ml/min,,檢測(cè)波長設(shè)定為280nm，柱溫設(shè)定30℃。進(jìn)樣量2l

2.2 溶液制備

2.2.1 供試品溶液制備

精密量取0.1 mL雙黃連注射液樣品加入適量甲醇溶液，經(jīng)超聲振蕩20 min后再稀釋至50ml定容并搖勻。再經(jīng)0.45 m過濾膜過濾，即得供試品溶液。

2.2.2 陰性對(duì)照品溶液的制備

根據(jù)處方配制不含黃芩苷的陰性制劑，根據(jù)2.2.1的方法制成陰性對(duì)照溶液。

2.2.3 對(duì)照品儲(chǔ)備液的制備

精密稱取3.21 mg干燥的黃芩苷標(biāo)準(zhǔn)品，加入50 mL量瓶,加入50%甲醇溶后進(jìn)行水浴加熱30 min，再加以適量50%甲醇進(jìn)行定容。振蕩搖勻即得對(duì)照品儲(chǔ)備液。

3 方法學(xué)考察

3.1 系統(tǒng)適應(yīng)性考察

分別取10 μL的陰性對(duì)照品溶液、供試品溶液，按照2.1的色譜條件進(jìn)行進(jìn)樣，結(jié)果顯示，黃芩苷的保留時(shí)間在5.36min，對(duì)于供試品溶液和陰性對(duì)照品溶液的色譜圖進(jìn)行比對(duì)分析，可見后者中在黃芩苷相應(yīng)位置無干擾，可見黃芩苷與雙黃連注射液的其它組分能很好的分離。

3.2 線性關(guān)系考察

精密量取0.2、0.4、0.8、1.6、2.0、3.0、4.0、5.0 mL的黃芩苷對(duì)照品儲(chǔ)備液，分別加入10ml的量瓶以50%甲醇進(jìn)行稀釋定容。然后量取10 μL，按2.1條件注入色譜儀依次進(jìn)行進(jìn)樣測(cè)定。以峰面積(Y)為縱坐標(biāo),濃度(Z)為橫坐標(biāo),繪制黃芩苷標(biāo)準(zhǔn)溶液的線性回歸方程為:Y=-1.72906+490.8078Z，可見其在3.71～91.26μg/ml濃度內(nèi)呈良好的線性關(guān)系（r=0.9994）

3.3 精密度實(shí)驗(yàn)

精密量取1.6 mL的對(duì)照品溶液，加入10 ml的量瓶稀釋后，按2.1條件,連續(xù)進(jìn)樣測(cè)定5次。結(jié)果可見5次測(cè)定的黃芩苷峰面積無明顯波動(dòng)，RSD為1.27%。

3.4 重復(fù)性試驗(yàn)

重復(fù)量取19031609批號(hào)的雙黃連注射液供試品溶液6份，10 mL/份，按照2.2.方法制成6份供試品溶液，依次進(jìn)行進(jìn)樣測(cè)定黃芩苷的峰面積，計(jì)算得到RSD為1.12%，重復(fù)性佳。

3.5 穩(wěn)定性試驗(yàn)

將19031609批號(hào)的供試品制備成供試品溶液，將其在室溫下放置0、2、4、6、8、12 h后，分別加樣測(cè)定，計(jì)算黃芩苷的峰面積?？梢婞S芩苷峰面積變化范圍小，計(jì)算得到RSD為1.39%，12 h內(nèi)較為穩(wěn)定。

3.6 加樣回收實(shí)驗(yàn)

量取19031609批號(hào)的雙黃連注射液供試品溶液3份，10mL//份，分別加入供試品已知含量的0.80、1.0、1.2的黃芩苷對(duì)照品，制備成加樣回收供試品溶液。依次加樣測(cè)定計(jì)算其加樣回收率為96.77%，RSD為0.93%。見表1。

3.7 樣品含量測(cè)定

對(duì)于三個(gè)不同批號(hào)的雙黃連注射液分別按2.2.1法制備供試品溶液，依次取樣進(jìn)樣測(cè)定，結(jié)果可見三批的黃芩苷含量分別為11.23、11.18、11.32mg/mL。見表2。

表1 加樣回收實(shí)驗(yàn)

表2 雙黃連注射液樣品的黃芩苷含量測(cè)定

3 討 論

黃芩苷含量對(duì)于雙黃連注射液的質(zhì)量控制有重要意義。本次研究建立了RP-HPLC法測(cè)定雙黃連注射液中黃芩苷的含量，經(jīng)考察不同種類的酸及酸度的流動(dòng)相對(duì)于黃芩苷分離的效果，最終選定了甲醇：1%冰醋酸(50:50)作為流動(dòng)相，在這種配比下，黃芩苷與其他組分分離良好。結(jié)果中黃芩苷加樣回收率平均為96.77%，結(jié)果提示以RP-HPLC法測(cè)定雙黃連注射液中黃芩苷的含量，方法簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確、靈敏度高，可作為黃芩苷的質(zhì)量控制。