杜文龍，傅力行，何健，葉益峰

（納愛斯集團(tuán)有限公司，浙江麗水 323000）

水楊酸為植物柳樹皮提取物，是一種天然的消炎藥，具有殺菌功效；對(duì)氯間二甲苯酚是一種低毒性抗菌劑，對(duì)多數(shù)革蘭氏陽性、陰性菌、真菌、霉菌都有殺滅功效，兩種成分均可用于生產(chǎn)洗手液中［1］。對(duì)于洗手液中水楊酸和對(duì)氯間二甲苯酚含量的測定，目前使用的測定標(biāo)準(zhǔn)是消毒衛(wèi)生規(guī)范中甲酸、水楊酸和山梨酸含量的測定［2］以及GB 27947-2011 酚類消毒劑衛(wèi)生要求中對(duì)氯間二甲苯酚含量的測定［3］， 兩種方法中的液相色譜測定條件不同，要先用一種液相測定條件測定水楊酸含量，再用另一種液相測定條件測定對(duì)氯間二甲苯酚含量，操作繁瑣，因此研究用一種液相條件同時(shí)測定水楊酸和對(duì)氯間二甲苯酚兩種成分的含量很有必要。

目前對(duì)水楊酸和對(duì)氯間二甲苯酚含量的測定主要有高效液相法［2-14］、紫外分光光度法［15］，但是還沒有哪一種方法是針對(duì)洗手液中同時(shí)測定水楊酸和對(duì)氯間二甲苯酚含量的，而紫外分光光度法比高效液相法準(zhǔn)確度低。筆者采用高效液相色譜儀同時(shí)測定洗手液中水楊酸和對(duì)氯間二甲苯酚，該方法能很好地分離水楊酸和對(duì)氯間二甲苯酚，而且峰型良好，測定結(jié)果準(zhǔn)確可靠，不需要單獨(dú)使用兩種方法分別測定水楊酸和對(duì)氯間二甲苯酚含量［2-3］，節(jié)約了時(shí)間，減少了試劑儀器損耗，不需要進(jìn)行繁瑣的梯度洗脫［4］。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 主要儀器與試劑

高效液相色譜儀：LC-20AT 型，配備手動(dòng)進(jìn)樣閥(20 μL 定量環(huán))和SPD-M20A 型二極管陣列檢測器，日本島津公司。

電子天平：LE204E 型，分度值為0.000 1 g，瑞士梅特勒-托利多集團(tuán)。

水楊酸：純度為99.0%，西格瑪奧德里奇(上海)貿(mào)易有限公司。

對(duì)氯間二甲苯酚：純度為99.0%，西格瑪奧德里奇(上海)貿(mào)易有限公司。

甲醇、磷酸：色譜純。

實(shí)驗(yàn)用水：超純水。

1.2 儀器工作條件

色譜柱：Shim-pack Scepter C18柱(250 mm×4.6 mm，5 μm，日本島津公司)；檢測器：SPD-M20A型二極管陣列檢測器；檢測波長：280 nm；流量：1.0 mL／min；柱溫：室溫；流動(dòng)相：甲醇-0.1%磷酸水溶液(體積比為70∶30)；進(jìn)樣體積：20 μL。

1.3 對(duì)照品溶液配制

水楊酸與對(duì)氯間二甲苯酚混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液：稱取水楊酸標(biāo)準(zhǔn)品0.2 g 與對(duì)氯間二甲苯酚標(biāo)準(zhǔn)品0.1 g 至100 mL 容量瓶中，用流動(dòng)相溶解定容至標(biāo)線，混勻。得到水楊酸與對(duì)氯間二甲苯酚混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液，濃度分別為2 000、1 000 μg／mL。

水楊酸與對(duì)氯間二甲苯酚系列混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶 液：分 別 移 取2.00、5.00、10.00、15.00、20.00 mL上述溶液至5 只100 mL 容量瓶中，得到水楊酸質(zhì)量濃度分別為40、100、200、300、400 μg／mL 與對(duì)氯間二甲苯酚質(zhì)量濃度分別為20、50、100、150、200 μg／mL 的系列混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液。

1.4 樣品處理

稱取洗手液樣品2.5 g，用流動(dòng)相甲醇-0.1%磷酸水溶液(體積比為70∶30)溶解，并定容至50 mL 容量瓶中，混勻，超聲溶解去除氣泡后定容。溶液經(jīng)0.45 μm 有機(jī)濾膜過濾，所得濾液按色譜條件1.2 進(jìn)行測定，記錄色譜峰的保留時(shí)間和峰面積，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上求出相應(yīng)的被測物濃度。水楊酸和對(duì)氯間二甲苯酚混合標(biāo)準(zhǔn)溶液色譜圖見圖1。

圖1 水楊酸和對(duì)氯間二甲苯酚混合標(biāo)準(zhǔn)溶液色譜圖

2 結(jié)果與討論

2.1 色譜條件的確定

從參考文獻(xiàn)［2-14］來看，使用C18柱可以分離水楊酸和對(duì)氯間二甲苯酚，因此選擇C18色譜柱作為分離柱。

消毒衛(wèi)生規(guī)范中甲酸、水楊酸和山梨酸含量的測定液相條件是強(qiáng)酸性條件，對(duì)氯間二甲苯酚不出峰、峰型不好或峰值較低；GB 27947 酚類消毒劑衛(wèi)生要求中對(duì)氯間二甲苯酚含量測定的液相色譜條件為中性條件，得到的水楊酸峰型化為雙峰，峰型不好。使用多種流動(dòng)相進(jìn)行試驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)要想水楊酸峰型好，必須是在酸性的流動(dòng)相條件抓，所以對(duì)酸性的流動(dòng)相條件嘗試，最終發(fā)現(xiàn)流動(dòng)相為甲醇-0.1%磷酸溶液(70∶30)時(shí)，水楊酸和對(duì)氯間二甲苯酚均得到很好的分離效果，峰型較好，色譜圖見圖1。

為方便在測定試驗(yàn)過程中對(duì)多個(gè)檢測波長對(duì)比，選出合適的檢測波長，故使用SPD-M20A 型二極管陣列檢測器。上述兩種標(biāo)準(zhǔn)方法中，檢測的波長不相同［2-3］，水楊酸的檢測波長為280 nm，對(duì)氯間二甲苯酚的檢測波長為220 nm。當(dāng)檢測波長為220 nm 時(shí)，樣品中有干擾峰，且峰面積比較大；當(dāng)檢測波長為280 nm 時(shí)，無干擾峰，故選擇檢測波長為280 nm。從諸多參考文獻(xiàn)來看，流動(dòng)相流量均為1.0 mL／min，柱溫一般為室溫，所以本實(shí)驗(yàn)也選擇此條件，經(jīng)試驗(yàn)，水楊酸和對(duì)氯間二甲苯酚可以得到有效的分離。

2.2 樣品前處理方法的確定

因?yàn)闃悠菲行?，所以要想得到良好的水楊酸色譜峰型，必須要對(duì)樣品進(jìn)行酸化處理。實(shí)驗(yàn)使用的流動(dòng)相為酸性溶劑，且洗手液中可能含有難溶解于流動(dòng)相的物質(zhì)，如硫等，為避免在流動(dòng)相運(yùn)行中難溶解的物質(zhì)析出，故選擇樣品前處理方法為使用流動(dòng)相溶解并定容樣品。

2.3 線性關(guān)系與檢出限

按1.2 色譜條件測定1.3 中配制的水楊酸與對(duì)氯間二甲苯酚系列混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，以質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，以其對(duì)應(yīng)的色譜峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)工作曲線，計(jì)算得水楊酸線性方程為y=14 395x-12 168，對(duì)氯間二甲苯酚線性方程為y=13 522x-7 538，相關(guān)系數(shù)均為0.999 9，水楊酸的線性范圍為40～400 μg／mL，對(duì)氯間二甲苯酚的線性范圍為20～200 μg／mL。

按儀器的3 倍信噪比(S／N=3)計(jì)算檢出限，水楊酸與對(duì)氯間二甲苯酚的檢出限均為0.1 μg／mL。

2.4 方法對(duì)比

選取3 組洗手液樣品，分別按照消毒衛(wèi)生規(guī)范中水楊酸含量的測定方法［2］與GB 27947-2011 酚類消毒劑衛(wèi)生要求中對(duì)氯間二甲苯酚含量的測定方法［3］測定水楊酸和對(duì)氯間二甲苯酚含量，與本實(shí)驗(yàn)方法進(jìn)行比對(duì)，結(jié)果見表1。

表1 對(duì)比試驗(yàn)結(jié)果

從表1 可以看出，3 種方法測得的數(shù)據(jù)基本一致，說明本方法準(zhǔn)確可靠，可以替代標(biāo)準(zhǔn)消毒衛(wèi)生規(guī)范中甲酸、水楊酸和山梨酸含量的測定以及GB 27947-2011 酚類消毒劑衛(wèi)生要求中對(duì)氯間二甲苯酚含量的測定方法。

2.5 精密度試驗(yàn)

按本實(shí)驗(yàn)方法測定同一個(gè)洗手液樣品中水楊酸和對(duì)氯間二甲苯酚含量，平行測定5 次，結(jié)果見表2。洗手液樣品色譜圖見圖2。

表2 精密度試驗(yàn)結(jié)果

從表2 可以看出，水楊酸和對(duì)氯間二甲苯酚測定結(jié)果的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差分別為0.79%，1.39%，說明本方法測得的數(shù)據(jù)精密度良好。計(jì)算得測定結(jié)果的平均值分別為0.400%與0.154%，生產(chǎn)的洗手液中添加的水楊酸和對(duì)氯間二甲苯酚含量分別為0.40%和0.15%，測定結(jié)果與添加量基本一致。

圖2 洗手液樣本色譜圖

2.6 加標(biāo)回收試驗(yàn)

在已知水楊酸和對(duì)氯間二甲苯酚含量的洗手液中加入不同濃度的水楊酸和對(duì)氯間二甲苯酚，按本實(shí)驗(yàn)方法測定，進(jìn)行加標(biāo)回收試驗(yàn)，結(jié)果見表3。由表3 可知，水楊酸的加標(biāo)回收率為97.9%～99.5%，對(duì)氯間二甲苯酚的加標(biāo)回收率為96.9%～99.8%，說明該方法具有較高的準(zhǔn)確度，能準(zhǔn)確測定洗手液中的水楊酸和對(duì)氯間二甲苯酚含量。

表3 水楊酸回收試驗(yàn)結(jié)果

3 結(jié)語

建立了高效液相色譜儀同時(shí)測定洗手液中水楊酸和對(duì)氯間二甲苯酚含量的方法。該方法簡便、快速、靈敏度高、重現(xiàn)性好，減少了儀器、試劑損耗，可用于洗手液中水楊酸和對(duì)氯間二甲苯酚含量的測定。