安 哲，李思鵬，屈 夢(mèng)，薛 麗，董 煒，孟 昊，張 妮，周 源

(西安交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院第二附屬醫(yī)院檢驗(yàn)科，西安 710004）

乙型肝炎病毒血清標(biāo)記物（hepatitis B virus serum markers，HBV-M）在慢性乙型肝炎（chronic hepatitis B virus infection，CHB)的診斷治療中具有重要臨床價(jià)值[1]。HBeAg 血清學(xué)轉(zhuǎn)換是指HBeAg陽(yáng)性個(gè)例的HBeAg 消失，繼而檢出抗HBe[2]。在HBeAg 血清學(xué)轉(zhuǎn)換過(guò)程中，部分感染者可以出現(xiàn)HBeAg 和抗HBe 共存現(xiàn)象。本次研究旨在分析HBeAg/抗HBe雙陽(yáng)性的血清學(xué)特征及HBeAg/抗HBe雙陽(yáng)性的方法學(xué)影響。

1 材料與方法

1.1 研究對(duì)象 收集2019年1～12月在西安交通大學(xué)第二附屬醫(yī)院感染科就診并接受治療、臨床實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)乙肝病毒血清標(biāo)記物結(jié)果呈HBeAg/抗HBe雙陽(yáng)性的CHB 病例363例。另收集ELISA法檢測(cè)結(jié)果呈HBeAg/抗HBe雙陽(yáng)性樣本87例。

1.2 方法和儀器 血清HBVDNA定量檢測(cè)采用熒光定量PCR法，試劑由達(dá)安基因診斷有限公司提供。HBV-M 五項(xiàng)采用化學(xué)發(fā)光免疫分析法（chemiluminecence microparticle immunoassay，CMIA）和酶聯(lián)免疫吸附法（enzyme-linked immunosoebent assay,ELISA)兩種方法檢測(cè)。HBV-M 五項(xiàng)(CMIA)檢測(cè)試劑盒采用美國(guó)Abbott Laboratories 生產(chǎn)的乙型肝炎病毒血清標(biāo)志物定量檢測(cè)試劑盒（化學(xué)發(fā)光免疫分析法），檢測(cè)儀器采用美國(guó)Architect I 2000自動(dòng)免疫分析儀。HBV-M 五項(xiàng)ELISA法定性檢測(cè)試劑購(gòu)自北京萬(wàn)泰生物藥業(yè)股份有限公司，采用瑞士Tecon 免疫自動(dòng)分析儀。

1.3 判定標(biāo)準(zhǔn) CHB的診斷標(biāo)準(zhǔn)依據(jù)慢性乙型肝炎防治指南（2019版）[2]。以所有樣本經(jīng)CMIA法定量檢測(cè)HBsAg 且HBsAg ≥0.05 IU/ml 判斷為HBsAg 陽(yáng)性，以抗HBs ≥10 mIU/ml 判斷為抗HBs 陽(yáng)性，HBeAg ≥1 S/CO 判斷為HBeAg 陽(yáng)性，以抗HBe ≤1S/CO 判斷為抗-HBe 陽(yáng)性。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析所有數(shù)據(jù)錄入SPSS16.0 進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。構(gòu)成比以百分率（%）表示，均值比較采用t檢驗(yàn)，以P＜0.05 差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 363例HBeAg/抗HBe雙陽(yáng)性樣本的HBV-M分布特征 363例經(jīng)CMIA法檢測(cè)HBeAg/抗HBe雙陽(yáng)性樣本中，抗HBc 陽(yáng)性率99.72%（362/363）；HBsAg 陽(yáng)性率98.62%(358/363)，不同水平HBsAg構(gòu)成比見(jiàn)圖1?？笻Bs 陽(yáng)性率8.82%（32/363）；不同抗HBs 水平下HBeAg，抗HBe 水平的差異以及抗HBs 分布特征見(jiàn)表1，比較不同組HBeAg和抗HBe，抗HBe 在抗HBs ≥100 IU/ml組和抗HBs ≥10 IU/ml組的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

圖1 363例HBeAg/HBe雙陽(yáng)性CHB的HBsAg分布

表1 363例樣本中不同抗HBs 水平下HBeAg，抗HBe 的比較

HBeAg結(jié)果分布區(qū)間1.03～101.00 S/CO,均值5.27 S/CO。不同HBeAg 水平構(gòu)占比分別是：1～9.99 S/CO 占87.88%，10～19.99 S/CO 占9.09%，20～29.99 S/CO 占1.65%，30～49.99 S/CO 占0.55%，≥50 S/CO 占0.83%。HBeAg＜20 IU/ml 占96.97%，結(jié)果見(jiàn)圖2?？笻Be 水平分布區(qū)間0.04～1.00 S/CO，均值0.61 S/CO。不同抗HBe 水平構(gòu)占比分別 是：0.81～1.00 S/CO 占31.68%，0.51～0.80 S/CO占34.44%，0.10～0.50 S/CO 占29.75%，＜0.10 S/CO占4.13%，抗HBe＞0.10 IU/ml占95.87%，結(jié)果見(jiàn)圖2。

圖2 363例HBeAg/抗HBe雙陽(yáng)性CHB的HBeAg 和抗HBe 分布趨勢(shì)

2.2 274例CMIA法檢測(cè)HBeAg/抗HBe雙陽(yáng)性CHB 病例的HBV-DNA 特征 274例樣本進(jìn)行了HBV-DNA 檢測(cè)。HBV-DNA 結(jié)果分布見(jiàn)圖3。不同HBV-DNA水平下HBeAg，抗HBe 水平的差異見(jiàn)表2，HBeAg 和抗HBe 在不同HBV-DNA水平組的差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

圖3 274例HBeAg/抗HBe雙陽(yáng)性CHB的HBV-DNA分布

表2 不同HBV-DNA水平下HBeAg，抗HBe 水平的差異

2.3 HBeAg/抗HBe雙陽(yáng)性結(jié)果的方法學(xué)差異ELISA法初檢HBV-M 呈HBeAg/抗HBe雙陽(yáng)性樣本87例，經(jīng)ELISA法復(fù)檢重復(fù)性54.02%（47/87）。47例復(fù)檢HBeAg/抗HBe雙陽(yáng)性樣本采用CMIA法檢測(cè)，共檢出4種模式：HBeAg(+)/抗HBe(+)（6.38%），HBeAg(+)/抗HBe(-)（80.85%），HBeAg(-)/抗HBe(+)（8.51%），HBeAg(-)/抗HBe(-)（4.26%）。

CMIA法檢測(cè)HBeAg/抗HBe雙陽(yáng)性樣本49例采用ELISA法復(fù)檢，檢出結(jié)果分別是：HBeAg(+)/抗HBe(+) 占4.08%，HBeAg(-)/抗HBe(+) 占10.20%，HBeAg(-)/抗HBe(-) 占85.72%。

3 討論

慢性乙型肝炎患者HBeAg 血清學(xué)轉(zhuǎn)換是指HBeAg 陽(yáng)性個(gè)例的HBeAg 消失，繼而檢出抗HBe，并伴隨血清HBV-DNA 下降至＜103 IU/ml，它是HBeAg 陽(yáng)性CHB 感染過(guò)程中一個(gè)重要轉(zhuǎn)折點(diǎn)。發(fā)生HBeAg 血清學(xué)轉(zhuǎn)換后，機(jī)體免疫耐受逐漸轉(zhuǎn)變?yōu)槊庖呒せ?，病毒?fù)制活躍轉(zhuǎn)為復(fù)制降低，肝臟病變活動(dòng)逐漸穩(wěn)定和靜息。HBeAg 陽(yáng)性慢性HBV感染約有80%可發(fā)生血清學(xué)轉(zhuǎn)換，部分感染者在HBeAg 血清學(xué)轉(zhuǎn)換過(guò)程中可以同時(shí)檢出HBeAg 和抗HBe，表現(xiàn)為抗原抗體共存，但是長(zhǎng)期以來(lái)這一現(xiàn)象在實(shí)驗(yàn)室的檢出又受到方法學(xué)的顯著影響。

CHB 病例出現(xiàn)HBeAg/抗HBe雙陽(yáng)性結(jié)果時(shí)，①患者HBsAg 水平仍相對(duì)較高；②部分病例可能出現(xiàn)HBsAg/抗HBs 雙陽(yáng)性反應(yīng)引起，這可能與S基因的突變或表型變異有關(guān)；③HBeAg 和抗HBe水平總體偏低，接近臨界值；此類患者更容易發(fā)生HBeAg 血清學(xué)轉(zhuǎn)換；④HBV-DNA水平呈現(xiàn)多樣性，陽(yáng)性較多見(jiàn)。

檢測(cè)系統(tǒng)和方法學(xué)差異也是當(dāng)前HBV-M 檢測(cè)結(jié)果不一致的重要原因。研究發(fā)現(xiàn)ELISA法檢出HBeAg(+)/抗HBe(+)樣本中絕大多數(shù)為HBeAg 陽(yáng)性，且HBeAg 呈高水平，HBV 顯現(xiàn)出高復(fù)制狀態(tài)。分析其原因可能與“帶現(xiàn)象”有關(guān)，ELISA法檢測(cè)抗HBe 采用競(jìng)爭(zhēng)法和一步法，當(dāng)待檢血清中存在高水平HBeAg 時(shí)，大量HBeAg 結(jié)合酶標(biāo)記的抗HBe使得酶標(biāo)記物無(wú)法結(jié)合微孔內(nèi)包被的HBeAg，從而造成抗HBe 假陽(yáng)性。對(duì)經(jīng)CMIA法檢出HBeAg(+)/抗HBe(+)病例49例樣本進(jìn)行了ELISA法檢測(cè)，進(jìn)一步提示真實(shí)的HBeAg(+)/抗HBe(+)樣本經(jīng)ELISA法檢測(cè)后，絕大多數(shù)表現(xiàn)為HBeAg(-)/抗HBe(-)，一小部分表現(xiàn)為HBeAg(-)/抗HBe(+)。

提供HBeAg 和抗HBe 準(zhǔn)確檢測(cè)結(jié)果是對(duì)臨床實(shí)驗(yàn)室提出的客觀要求，而準(zhǔn)確判斷慢性HBV感染者HBeAg 血清學(xué)轉(zhuǎn)換也是治療療效監(jiān)測(cè)和評(píng)估的重要依據(jù)。有研究證實(shí)，不同藥物治療后HBeAg血清學(xué)轉(zhuǎn)化發(fā)生的時(shí)間也不一致。本研究小組發(fā)現(xiàn)部分HBeAg 陽(yáng)性CHB 感染者經(jīng)治療后長(zhǎng)期維持HBeAg 極低水平（HBeAg ＜10 S/CO）而難以繼續(xù)發(fā)生血清學(xué)轉(zhuǎn)換，部分慢性HBV感染者的HBeAg 和抗HBe 共存狀態(tài)持續(xù)存在，將繼續(xù)關(guān)注慢性HBV感染者的HBeAg 和抗HBe 共存狀態(tài)以獲得更加深入的研究成果。