邱輝輝，韓瑞婷, 2，盛麗莉，李后開*

四妙方顆粒劑與湯劑防治非酒精性脂肪性肝病的對比研究

邱輝輝1，韓瑞婷1, 2，盛麗莉1，李后開1*

1. 上海中醫(yī)藥大學(xué)交叉科學(xué)研究院，上海 201203 2. 河南中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院 呼吸科，河南 鄭州 450000

明確四妙方防治非酒精性脂肪肝?。╪on-alcoholic fatty liver disease，NAFLD）的作用，并比較四妙方顆粒劑與湯劑中主要成分質(zhì)量分數(shù)與防治NAFLD的藥效差異。HPLC檢測四妙方顆粒劑與湯劑中黃柏堿、木蘭花堿、β-蛻皮甾酮、藥根堿、巴馬汀與小檗堿的質(zhì)量分數(shù)。將C57BL/6小鼠隨機分為對照組，模型組，四妙方顆粒劑低、高劑量（10、20 g/kg）組，四妙方湯劑低、高劑量（10、20 g/kg）組，通過高糖高脂飲食建立NAFLD小鼠模型，給予四妙方顆粒劑與湯劑進行干預(yù)，檢測各組小鼠的體質(zhì)量、肝臟質(zhì)量、附睪脂肪質(zhì)量和血清脂質(zhì)、肝臟脂質(zhì)水平；采用蘇木素-伊紅（HE）染色觀察各組小鼠肝組織病理變化。四妙方湯劑中6種成分的質(zhì)量分數(shù)均高于顆粒劑，四妙方全方的色譜峰主要來源于黃柏，其余藥味的色譜峰較少。與對照組比較，模型組小鼠體質(zhì)量、肝臟質(zhì)量、附睪脂肪質(zhì)量和血清中總膽固醇（total cholesterol，TC）、低密度脂蛋白膽固醇（low density lipoprotein cholesterol，LDL-C）、尿酸水平及丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶（alanine aminotransferase，ALT）、天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶（aspartate aminotransferase，AST）活性及肝臟中三酰甘油（triglycerides，TG）水平均顯著升高（＜0.05、0.01），且脂肪嚴重變性。與模型組比較，四妙方顆粒劑與湯劑均能有效降低小鼠體質(zhì)量、肝臟質(zhì)量、附睪脂肪質(zhì)量及血清中TC、LDL-C、高密度脂蛋白膽固醇（high density lipoprotein cholesterol，HDL-C）、尿酸水平及AST、ALT活性及肝臟中三酰甘油（triglycerides，TG）水平（＜0.05、0.01），且湯劑低劑量組藥效優(yōu)于顆粒劑低劑量組；四妙方顆粒劑與湯劑均能減少脂質(zhì)聚積、脂肪變性，湯劑低劑量組藥效優(yōu)于顆粒劑低劑量組。四妙方湯劑中的化學(xué)成分質(zhì)量分數(shù)高于顆粒劑，低劑量下湯劑藥效優(yōu)于顆粒劑，高劑量下顆粒劑與湯劑差異較小。

四妙方；非酒精性脂肪性肝??；顆粒劑；湯劑；藥效；黃柏堿；木蘭花堿；β-蛻皮甾酮；藥根堿；巴馬汀；小檗堿

四妙方源自清代張秉承的《成方便讀》，由黃柏、蒼術(shù)、薏苡仁、牛膝按質(zhì)量比2∶1∶2∶1組成，具有清熱利濕的功效。四妙方具有治療代謝性疾病的作用，如可顯著降低濕熱困脾型糖尿病小鼠血糖水平，改善糖耐量[1]；可顯著降低高尿酸血癥合并高三酰甘油血癥患者血清中尿酸和三酰甘油水平[2]；可改善濕熱內(nèi)阻、氣郁痰凝證患者的肝臟脂肪病變[3]。中藥傳統(tǒng)湯劑煎煮繁瑣，患者依從性差；中藥配方顆粒易攜帶、易儲存，且取藥方便程度與計量準(zhǔn)確度有所提高[4-5]。配方顆粒劑由藥味單煎后組合，傳統(tǒng)湯劑由藥味配伍后合煎，二者在總化學(xué)成分的一致性上存在疑問。研究發(fā)現(xiàn)，當(dāng)歸補血湯中的指標(biāo)性成分高于配方顆粒，且特征峰的數(shù)目多于配方顆粒，而中藥配方顆粒在治療表虛盜汗患者的療效上優(yōu)于傳統(tǒng)湯劑[6-7]。因此，中藥配方顆粒能否代替?zhèn)鹘y(tǒng)湯劑存有爭議。

為明確四妙方防治非酒精性脂肪肝?。╪on- alcoholic fatty liver disease，NAFLD）的藥理作用，探究顆粒劑與傳統(tǒng)湯劑生物等效性和有效成分的含量差異，本研究通過HPLC測定四妙方顆粒劑與湯劑的主要化學(xué)成分質(zhì)量分數(shù)，并采用小鼠NAFLD模型，比較四妙方顆粒劑與湯劑的生物等效性。本研究從功效和成分兩方面綜合比較顆粒劑與湯劑的差異性，為治療NAFLD的四妙方劑型提供參考。

1 材料

1.1 動物

SPF級雄性C57BL/6小鼠60只，4周齡，體質(zhì)量（18±2）g，購自上海斯萊克實驗動物有限責(zé)任公司，合格證號SCXK（滬）2017-0005。動物飼養(yǎng)于上海中醫(yī)藥大學(xué)實驗動物中心，溫度20～25 ℃，晝夜交替日光燈照明，自由進食飲水，予以正常飼料適應(yīng)性喂養(yǎng)1周。動物實驗經(jīng)上海中醫(yī)藥大學(xué)實驗動物福利與倫理委員會審查批準(zhǔn)（批準(zhǔn)號PZSHUCM190301005）。

1.2 藥材

黃柏飲片（批號17120803）購自上海信德中藥公司飲片廠；蒼術(shù)飲片（批號1803105）、薏苡仁飲片（批號1801114）購自上海雷允上中藥飲片廠有限公司；牛膝飲片（批號2018010303）購自上海余天成中藥飲片有限公司。各飲片經(jīng)上海中醫(yī)藥大學(xué)中藥研究所吳曉俊研究員鑒定分別為蕓香科植物黃皮樹Schneid.的干燥樹皮、菊科植物茅蒼術(shù)(Thunb.) DC.的干燥根莖、禾本科植物薏苡L. var.(Roman.) Stapf的干燥成熟種仁和莧科植物牛膝Blume.的干燥根。

1.3 藥品與試劑

黃柏配方顆粒（批號1706006S，每克相當(dāng)于12 g飲片）、麩炒蒼術(shù)配方顆粒（批號1801001S，每克相當(dāng)于6 g飲片）、薏苡仁配方顆粒（批號1802003S，每克相當(dāng)于5 g飲片）、牛膝配方顆粒（批號1712002S，每克相當(dāng)于2.5 g飲片）均購自華潤三九醫(yī)藥股份有限公司；鹽酸黃柏堿（批號JZ19042402，質(zhì)量分數(shù)≥98%）購自南京卡塞斯醫(yī)藥科技有限公司；木蘭花堿（批號7799，質(zhì)量分數(shù)≥98%）購自上海詩丹德標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)服務(wù)有限公司；β-蛻皮甾酮（批號D1924074，質(zhì)量分數(shù)≥95%）、鹽酸小檗堿（批號F1911238，質(zhì)量分數(shù)≥95%）均購自上海阿拉丁生化科技股份有限公司；鹽酸藥根堿（批號P11A10F85443，質(zhì)量分數(shù)≥98%）、鹽酸巴馬?。ㄅ朲23O6L4910，質(zhì)量分數(shù)≥96%）均購自上海源葉生物科技有限公司；總膽固醇（total cholesterol，TC）檢測試劑盒（批號20181007）、三酰甘油（triglycerides，TG）檢測試劑盒（批號20181007）、低密度脂蛋白膽固醇（low density lipoprotein cholesterol，LDL-C）檢測試劑盒（批號20181007）、高密度脂蛋白膽固醇（high density lipoprotein cholesterol，HDL-C）檢測試劑盒（批號20181007）、丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶（alanine aminotransferase，ALT）檢測試劑盒（批號20181018）、天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶（aspartate aminotransferase，AST）檢測試劑盒（批號20181018）、尿酸檢測試劑盒（批號20181007）均購自南京建成生物工程研究所；色譜級磷酸購自上海安譜實驗科技股份有限公司；色譜級甲醇、乙腈購自Thermo Fisher Scientific公司；普通飼料（批號1010011）購自江蘇省協(xié)同醫(yī)藥生物工程有限責(zé)任公司；高脂飼料（批號D12492）購自Research Diet公司。

1.4 儀器

MS105DU電子天平（瑞士Mettler Toledo公司）；1260高效液相色譜儀（美國Agilent公司）；Milli-Q超純水機（美國Millipore公司）；ZNHW型調(diào)溫電熱套（鞏義市英峪予華儀器廠）；RE2000A型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（上海亞榮生化儀器廠）。

2 方法

2.1 四妙方顆粒劑的制備

稱取黃柏配方顆粒22.5 g、蒼術(shù)配方顆粒22.5 g、薏苡仁配方顆粒54 g、牛膝配方顆粒54 g，加蒸餾水溶解，得到質(zhì)量濃度為1 g/mL（以生藥量計）的四妙方顆粒劑溶液。

2.2 四妙方湯劑的制備

稱取黃柏飲片270 g、蒼術(shù)飲片135 g、薏苡仁飲片270 g、牛膝飲片135 g，加入6.4 L水煎煮1.5 h，濾過；再加入4.8 L水煎煮1.5 h，濾過，合并2次煎液，減壓濃縮得到質(zhì)量濃度為1 g/mL（以生藥量計）的四妙方湯劑溶液。

2.3 四妙方顆粒劑與湯劑的化學(xué)成分分析

2.3.1 四妙方供試品溶液的制備 分別取“2.1”項中四妙方顆粒劑溶液與“2.2”項中四妙方湯劑溶液，加蒸餾水稀釋至50 mg/mL（以生藥量計），12 000 r/min離心5 min，取上清液經(jīng)0.22 μm濾膜濾過，分別得到四妙方顆粒劑和湯劑的供試品溶液。

分別稱取黃柏、蒼術(shù)、薏苡仁和牛膝飲片，加適量水，參照“2.2”項下湯劑的制備方法得到黃柏、蒼術(shù)、薏苡仁、牛膝單味藥水提物（質(zhì)量濃度分別為16.7、8.3、16.7、8.3 mg/mL）。分別稱取黃柏、蒼術(shù)、薏苡仁和牛膝配方顆粒，加水溶解得到黃柏、蒼術(shù)、薏苡仁、牛膝單味藥溶液（質(zhì)量濃度分別為16.7、8.3、16.7、8.3 mg/mL）。12 000 r/min離心5 min，取上清液經(jīng)0.22 μm濾膜濾過，分別得到單味藥水提物的供試品溶液與單味藥顆粒劑的供試品溶液。

2.3.2 混合對照品溶液的制備 分別精密稱定鹽酸黃柏堿、木蘭花堿、β-蛻皮甾酮、鹽酸藥根堿、鹽酸巴馬汀、鹽酸小檗堿對照品，加甲醇制成對照品儲備液。取適量對照品儲備液，加甲醇制成含鹽酸黃柏堿、木蘭花堿、β-蛻皮甾酮、鹽酸藥根堿、鹽酸巴馬汀、鹽酸小檗堿（質(zhì)量濃度分別為64.00、20.00、100.00、0.64、3.60、200.00 μg/mL）的混合對照品溶液。

2.3.3 色譜條件[8-9]Agilent HPLC SB C18色譜柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動相A為乙腈，流動相B為0.1%磷酸水溶液，梯度洗脫：0～10 min，10%～15% A；10～20 min，15%～25% A；20～30 min，25%～55% A；體積流量為1 mL/min；檢測波長為270 nm；柱溫為30 ℃；進樣量為10 μL。

2.3.4 樣品含量測定 分別取供試品溶液與混合對照品溶液，進樣檢測。

2.4 四妙方顆粒劑與湯劑防治NAFLD的作用研究

2.4.1 分組、模型建立與給藥 C57BL/6小鼠隨機分成對照組，模型組，四妙方顆粒劑低、高劑量（10、20 g/kg，以生藥量計）組，四妙方湯劑低、高劑量（10、20 g/kg，以生藥量計）組，每組10只。對照組小鼠給予普通飼料并飲用純凈水，其余各組小鼠給予高脂飼料并飲用30%蔗糖水溶液；造模同時各給藥組小鼠ig相應(yīng)藥物，對照組和模型組ig等體積蒸餾水，1次/d，連續(xù)16周。每周稱定小鼠體質(zhì)量并記錄其攝食量和飲水量。

2.4.2 樣本采集 末次給藥后小鼠禁食過夜，稱定體質(zhì)量，ip 1%戊巴比妥鈉麻醉，摘眼球取血，靜置30 min后，4 ℃、3000 r/min離心10 min，分離上清備用。小鼠脫頸椎處死后打開腹腔，取附睪脂肪、肝臟，稱定質(zhì)量后將脂肪立即放入液氮中，于?80 ℃保存?zhèn)溆?。取肝大葉中部于10%福爾馬林溶液中固定，石蠟包埋，以蘇木素-伊紅（HE）染色。

2.4.3 生化指標(biāo)檢測 按照試劑盒說明書檢測血清中TG、TC、LDL-C、HDL-C、尿酸水平及AST、ALT活性；按照試劑盒說明書檢測肝臟組織中TG和TC水平。

3 結(jié)果

3.1 四妙方顆粒劑與湯劑化學(xué)成分的含量測定

如表1和圖1所示，四妙方顆粒劑中黃柏堿、木蘭花堿、β-蛻皮甾酮、藥根堿、巴馬汀和小檗堿的質(zhì)量分數(shù)分別為0.502、0.218、0.270、0.004、0.023、2.077 mg/g，四妙方湯劑中黃柏堿、木蘭花堿、β-蛻皮甾酮、藥根堿、巴馬汀和小檗堿的質(zhì)量分數(shù)分別為1.115、0.372、2.464、0.010、0.088、4.037 mg/g；四妙方湯劑中黃柏堿、木蘭花堿、β-蛻皮甾酮、藥根堿、巴馬汀和小檗堿的質(zhì)量分數(shù)分別為顆粒劑的2.22、1.71、9.13、2.50、3.83、1.94倍。對比四妙方顆粒劑與各單味藥配方顆粒圖譜，發(fā)現(xiàn)四妙方顆粒劑色譜圖中的主要成分峰來自于黃柏配方顆粒，其余3種配方顆粒的色譜峰極少。對比四妙方湯劑與各單味藥水提物圖譜，發(fā)現(xiàn)四妙方湯劑色譜圖中的主要成分峰來自于黃柏水提物，其他3種水提物的色譜峰較少。

表1 四妙方顆粒劑與湯劑中6種化學(xué)成分的質(zhì)量分數(shù)

1-鹽酸黃柏堿 2-木蘭花堿 3-β-蛻皮甾酮 4-鹽酸藥根堿 5-鹽酸巴馬汀 6-鹽酸小檗堿

A-混合對照品溶液 B-四妙方顆粒劑 C-四妙方湯劑 D-四妙方顆粒劑 (a) 與各單味藥配方顆粒 (b-黃柏、c-蒼術(shù)、d-薏苡仁、e-牛膝) 疊加圖 E-四妙方湯劑 (f) 與各單味藥水提物 (g-黃柏、h-蒼術(shù)、i-薏苡仁、j-牛膝) 疊加圖

1-phellodendrine chloride 2-magnoflorine 3-β-ecdysone 4-jatrorrhizine hydrochloride 5-palmatine hydrochloride 6-berberine chloride

A-mixed reference substance solution B-Simiao Formula Granules C-Simiao Formula Decoction D-Overlay chart of Simiaofang Formula Granules (a) and each single medicine formula granule (b-, c-, d-, e-) E-Overlay chart of Simiao Formula Decoction (f) and each single medicine (g-, h-, i-, j-)

圖1 四妙方顆粒劑與湯劑的HPLC圖

Fig. 1 HPLC of Simiao Formula Granules and Decoction

3.2 四妙方顆粒劑與湯劑對NAFLD小鼠體質(zhì)量與臟器質(zhì)量的影響

如表2所示，與對照組比較，模型組小鼠體質(zhì)量、肝臟質(zhì)量、附睪脂肪質(zhì)量均顯著升高（＜0.05、0.01），附睪脂肪指數(shù)顯著升高（＜0.01）。與模型組比較，各治療組小鼠的體質(zhì)量、附睪脂肪質(zhì)量均顯著降低（＜0.05、0.01），其中四妙方顆粒劑和湯劑高劑量組均優(yōu)于低劑量組；四妙方顆粒劑高劑量組和湯劑低、高劑量組小鼠的肝臟質(zhì)量均顯著降低（＜0.05、0.01）；四妙方顆粒劑和湯劑高劑量組小鼠的附睪脂肪指數(shù)顯著降低（＜0.05、0.01）。

3.3 四妙方顆粒劑與湯劑對NAFLD小鼠血清中血脂和尿酸的影響

如表3所示，與對照組比較，模型組小鼠血清中TC、LDL-C、尿酸水平均顯著升高（＜0.01）。與模型組比較，四妙方顆粒劑高劑量組和湯劑低劑量組小鼠血清中TC、LDL-C、HDL-C、尿酸水平均顯著降低（＜0.05、0.01），四妙方湯劑高劑量組小鼠血清中TC、LDL-C水平顯著降低（＜0.01）。

3.4 四妙方顆粒劑與湯劑對NAFLD小鼠肝臟脂質(zhì)和肝功能的影響

如表4所示，與對照組比較，模型組小鼠肝臟中TG水平和AST、ALT活性顯著升高（＜0.05、0.01）。與模型組比較，各給藥組小鼠肝臟TG水平和AST、ALT活性均顯著降低（＜0.05、0.01）。

表2 四妙方顆粒劑與湯劑對小鼠體質(zhì)量與各組織質(zhì)量的影響()

與對照組比較：*＜0.05**＜0.01；與模型組相比：#＜0.05##＜0.01，下表同

*< 0.05**< 0.01control group;#< 0.05##< 0.01model group, same as tables

表3 四妙方顆粒劑與湯劑對小鼠血清血脂和尿酸水平的影響()

表4 四妙方顆粒劑與湯劑對小鼠肝臟脂質(zhì)和肝功能的影響()

3.5 四妙方顆粒劑與湯劑對NAFLD小鼠肝臟病理變化的影響

如圖2所示，對照組小鼠肝大葉結(jié)構(gòu)清晰可見，肝細胞排列正常、形態(tài)正常，無脂肪變性；模型組小鼠肝臟組織病變嚴重，肝細胞水腫、脂肪變性明顯，細胞排列雜亂，可見大量脂肪空泡；與模型組相比，四妙方顆粒劑低劑量組小鼠肝臟脂滴減少，肝細胞排列仍雜亂但稍有改善；四妙方顆粒劑高劑量組及四妙方湯劑低、高劑量組小鼠肝臟組織脂質(zhì)空泡大幅度減少，僅有少量脂肪變性且脂滴較小，肝細胞排列明顯整齊，肝臟結(jié)構(gòu)更加清晰。在低劑量下，四妙方湯劑優(yōu)于顆粒劑；在高劑量下，四妙方顆粒劑與湯劑無明顯區(qū)別。

4 討論

中醫(yī)辨證將NAFLD分為濕濁內(nèi)停證、肝郁脾虛證、濕熱蘊結(jié)證等[10]。根據(jù)臨床組方規(guī)律，中醫(yī)藥在治療NAFLD時以活血化瘀、清熱祛濕見長[11]。本研究以高糖、高脂飼喂小鼠，膏粱厚味易化生痰濕、滋膩礙胃，蘊結(jié)日久成為濕熱，宜采用清熱利濕法治療。四妙方中君藥黃柏清熱燥濕，臣藥蒼術(shù)燥濕健脾，佐藥薏苡仁利水滲濕、健脾，使藥懷牛膝活血通經(jīng)，并可引藥下行；全方具有清熱利濕的功效，臨床上主要用于濕熱下注所致的痹癥，以治療痛風(fēng)見長[12-13]。高尿酸為痛風(fēng)患者的重要特征，四妙方可顯著降低痛風(fēng)患者血清尿酸水平[14-15]。流行病學(xué)調(diào)查發(fā)現(xiàn)，血清中尿酸水平與NAFLD的發(fā)生呈正相關(guān)[16-17]。研究認為，尿酸可作為預(yù)測NAFLD發(fā)生的風(fēng)險因素[18]。肝臟中黃嘌呤氧化酶（xanthine oxidase，XO）作為尿酸生成的限速酶可誘導(dǎo)NOD樣受體蛋白3（NOD-like receptor protein3，NLRP3）炎性小體活化以促進白細胞介素-1β分泌[19-20]。另外，尿酸促進固醇調(diào)節(jié)元件結(jié)合蛋白1c（sterol-regulatory element binding protein-1c，SREBP-1c）表達，從而增加乙酰輔酶A羧化酶、脂肪酸合成酶、硬脂酰輔酶A去飽和酶1的表達，增加肝臟脂質(zhì)積累[21-22]。盡管NAFLD與痛風(fēng)分屬不同疾病，但四妙方也能減少血清中尿酸水平，體現(xiàn)了中醫(yī)異病同治的觀點。

圖2 四妙方顆粒劑與湯劑對非酒精性脂肪性肝病小鼠病理組織學(xué)的影響(×200)

中藥配方顆粒能否替代傳統(tǒng)湯劑一直存在爭議。甘草配方顆粒和甘草飲片入藥四逆湯對附子的解毒作用差異較大，甘草配方顆粒解毒能力較差，表明甘草在傳統(tǒng)湯劑中更有利于解毒物質(zhì)的溶出[23]。四物湯傳統(tǒng)湯劑與配方顆粒中沒食子酸等6種成分的含量差異較大，僅沒食子酸在四物湯配方顆粒中含量更高，其余5種成分均在傳統(tǒng)湯劑中含量更高[24]。歸脾湯的配方顆粒劑在貧血女性患者中的顯效率、總有效率均優(yōu)于其湯劑[25]。不同醫(yī)院生產(chǎn)的葛根芩連湯配方顆粒，指紋圖譜中特征峰的數(shù)目均多于傳統(tǒng)湯劑[26]。半夏瀉心湯的傳統(tǒng)湯劑與配方顆粒對慢性胃炎患者的療效無明顯差異；麻黃湯配方顆粒與傳統(tǒng)湯劑在小鼠模型上均能祛痰、發(fā)汗，其藥理作用無明顯差異[27-28]。吳茱萸湯配方顆粒劑中吳茱萸堿等成分含量與傳統(tǒng)湯劑基本一致，四逆湯配方顆粒中甘草苷的含量與傳統(tǒng)湯劑無明顯區(qū)別[29-30]。配方顆粒與傳統(tǒng)湯劑最大的區(qū)別在于單煎與合煎。合煎對藥物的溶出有一定影響，如白虎加桂枝湯合煎液中新芒果苷等3種成分的含量高于單煎液，佛手散合煎藥液中綠原酸等5種成分的含量均高于單煎藥液，人參、白術(shù)藥對的合煎液中人參皂苷Rg1等5種成分含量明顯高于單煎液，提示合煎能促進該類藥味的藥效物質(zhì)溶出，此類藥味可能不適用于配方顆粒[31-33]。因此，單煎與合煎導(dǎo)致有效成分的含量差異可能是傳統(tǒng)湯劑與配方顆粒藥效差異的重要原因。

四妙方中黃柏的主要成分為生物堿類，如小檗堿、黃柏堿、木蘭花堿等，其中含量最高的為小檗堿[34-35]。小檗堿具有改善胰島素抵抗、緩解脂肪肝的藥理作用，黃柏堿具有抗炎、抗氧化作用[36-39]。因此，生物堿類成分可能為四妙方防治NAFLD的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)之一。本研究發(fā)現(xiàn)，四妙方顆粒劑和湯劑中含有黃柏堿、木蘭花堿、藥根堿、巴馬汀和小檗堿5種生物堿。蒼術(shù)的主要成分為揮發(fā)油類，如蒼術(shù)素、β-桉葉醇、蒼術(shù)酮等，多以氣相色譜法檢測[40-41]。本研究以HPLC-DAD檢測蒼術(shù)素，未在四妙方顆粒劑和湯劑中找到對應(yīng)色譜峰。薏苡仁的主要成分為脂肪酸類和三酰甘油類，如1,3-二油酸-2-亞油酸甘油酯、1-棕櫚酸-2-亞油酸-3-油酸甘油酯等，常用蒸發(fā)光散射檢測器，不適用于紫外檢測器[42-43]。牛膝的主要成分為甾酮類和皂苷類，如β-蛻皮甾酮、竹節(jié)參皂苷Iva，其中β-蛻皮甾酮具有抑制脂肪堆積、減輕胰島素抵抗的作用，可能為四妙方防治NAFLD的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)之一[44-45]。本研究結(jié)果顯示，四妙方湯劑中黃柏堿、木蘭花堿、β-蛻皮甾酮、藥根堿、巴馬汀和小檗堿的質(zhì)量分數(shù)高于四妙方顆粒劑，可能是低劑量下的四妙方湯劑藥效優(yōu)于顆粒劑的原因?；诋?dāng)前檢測方法，不論湯劑或顆粒劑，四妙方全方中的成分均來自于君藥黃柏，而黃柏的主要成分為生物堿類，表明生物堿類成分可能是四妙方的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)。中藥的產(chǎn)地、炮制、貯存等均為影響品質(zhì)或成分含量的重要因素，本研究所檢測的湯劑樣本與配方顆粒樣本并非取自同一批次、同一來源的中藥飲片，因此對檢測結(jié)果有一定影響。課題組后續(xù)將進行更系統(tǒng)的檢測，如納入不同基原的中藥飲片、不同提取批次的中藥湯劑、不同廠家與批次的配方顆粒等。此外，本研究發(fā)現(xiàn)，四妙方顆粒劑與傳統(tǒng)湯劑均能有效降低NAFLD小鼠的體質(zhì)量、白色脂肪與肝臟質(zhì)量，同等劑量下的四妙方湯劑優(yōu)于顆粒劑；四妙方顆粒劑與湯劑均能降低NAFLD小鼠的血脂和尿酸水平，低劑量下四妙方湯劑優(yōu)于顆粒劑，高劑量下顆粒劑藥效更佳。

綜上所述，四妙方顆粒劑與傳統(tǒng)湯劑均能有效防治NAFLD，低劑量下四妙方湯劑藥效優(yōu)于顆粒劑，高劑量下二者無差別，這可能與四妙方湯劑的化學(xué)成分含量較配方顆粒劑高有關(guān)。

利益沖突 所有作者均聲明不存在利益沖突

[1] 程旸, 許立, 許波華, 等. 四妙顆粒對濕熱困脾型糖尿病模型小鼠血糖及糖耐量的影響 [J]. 中南藥學(xué), 2011, 9(4): 245-248.

[2] 管向華. 四妙丸治療高尿酸血癥合并高三酰甘油血癥效果觀察 [J]. 實用中醫(yī)藥雜志, 2019, 35(11): 1319-1320.

[3] 李佳, 金春鋒. 四妙散臨床運用 [J]. 山東中醫(yī)雜志, 2009, 28(10): 735-736.

[4] 穆桂榮. 中藥配方顆粒和傳統(tǒng)中藥飲片調(diào)劑方式的應(yīng)用對比分析 [J]. 湖南中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報, 2016, 36(12): 96-98.

[5] 蘇燕, 李慧. 中藥配方顆粒與傳統(tǒng)中藥飲片的應(yīng)用對策研究 [J]. 中醫(yī)臨床研究, 2020, 12(1): 129-130.

[6] 姚靜, 施鈞瀚, 桂新景, 等. 基于HPLC指紋圖譜評價的當(dāng)歸補血湯傳統(tǒng)湯劑與配方顆粒湯劑的成分差異分析 [J]. 中草藥, 2019, 50(11): 2567-2574.

[7] 高云華, 張峰. 中藥配方顆粒與傳統(tǒng)中藥飲片臨床療效比較 [J]. 中國繼續(xù)醫(yī)學(xué)教育, 2017, 9(21): 200-201.

[8] 黃群蓮, 羅穎, 李芹, 等. “一測多評”含量測定法對黃柏配方顆粒與黃柏飲片適用性研究 [J]. 中國醫(yī)院藥學(xué)雜志, 2015, 35(16): 1470-1474.

[9] 肖娟, 蔡萍, 萬丹, 等. 不同粉體三、四妙丸HPLC指紋圖譜對比研究 [J]. 亞太傳統(tǒng)醫(yī)藥, 2015, 11(23): 27-31.

[10] 趙紅, 謝雯. 非酒精性脂肪性肝病的中西醫(yī)結(jié)合治療現(xiàn)狀 [J]. 中國臨床醫(yī)生雜志, 2020, 48(1): 16-18.

[11] 丁靜, 張斌, 王培劼, 等. 基于數(shù)據(jù)挖掘和生物信息分析探討非酒精性脂肪肝用藥規(guī)律及作用機制 [J]. 中國中藥雜志, 2019, 44(8): 1689-1695.

[12] 程智玲, 周莎, 易童, 等. 急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎的中醫(yī)診療進展 [J]. 中國中醫(yī)急癥, 2019, 28(12): 2250-2252.

[13] 李慶梅. 四妙丸臨床驗案舉隅 [J]. 浙江中西醫(yī)結(jié)合雜志, 2020, 30(6): 500-501.

[14] 陳偉, 江文杰, 盧景宜. 加味四妙散治療急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎對患者關(guān)節(jié)腫痛及CRP、UA的影響 [J]. 中國實用醫(yī)藥, 2020, 15(22): 156-158.

[15] 許曉彤, 謝心軍, 張雄. 四妙丸加味治療早期濕熱蘊阻型膝骨關(guān)節(jié)炎臨床觀察 [J]. 廣西中醫(yī)藥, 2020, 43(1): 17-19.

[16] Kanbay M, Jensen T, Solak Y,. Uric acid in metabolic syndrome: From an innocent bystander to a central player [J]., 2016, 29: 3-8.

[17] Shih M H, Lazo M, Liu S H,. Association between serum uric acid and nonalcoholic fatty liver disease in the US population [J]., 2015, 114(4): 314-320.

[18] Xu C, Yu C, Xu L,. High serum uric acid increases the risk for nonalcoholic Fatty liver disease: A prospective observational study [J]., 2010, 5(7): e11578.

[19] Xu C, Wan X, Xu L,. Xanthine oxidase in non-alcoholic fatty liver disease and hyperuricemia: One stone hits two birds [J]., 2015, 62(6): 1412-1419.

[20] Gicquel T, Robert S, Loyer P,. IL-1β production is dependent on the activation of purinergic receptors and NLRP3 pathway in human macrophages [J]., 2015, 29(10): 4162-4173.

[21] Choi Y J, Shin H S, Choi H S,. Uric acid induces fat accumulation via generation of endoplasmic reticulum stress and SREBP-1c activation in hepatocytes [J]., 2014, 94(10): 1114-1125.

[22] 劉靜, 孫蓉. 小柴胡湯對非酒精性脂肪性肝炎模型小鼠的保護作用研究[J].中草藥, 2020, 51(14): 3708-3716.

[23] 曾歡, 何翠敏, 蘇慧琳, 等. 甘草飲片與甘草配方顆粒在四逆湯中減毒作用比較 [J]. 廣東藥科大學(xué)學(xué)報, 2020, 36(2): 231-235.

[24] 孟璐, 丁琮洋, 徐帥師, 等. 四物湯傳統(tǒng)飲片湯劑與配方顆粒湯劑有效成分比較 [J]. 中成藥, 2020, 42(2): 397-401.

[25] 崔夢茹, 康風(fēng)嬌. 歸脾湯中藥配方顆粒劑與傳統(tǒng)飲片煎劑治療女性缺鐵性貧血臨床療效對比 [J]. 臨床醫(yī)藥文獻電子雜志, 2020, 7(33): 132-133.

[26] 李紅, 李妍, 田杰, 等. 葛根芩連湯配方顆粒和傳統(tǒng)湯劑的HPLC的指紋圖譜對比研究 [J]. 世界中醫(yī)藥, 2018, 13(9): 2304-2307.

[27] 張紅霞, 姬艷蘇, 趙榕慧. 半夏瀉心湯中藥飲片與顆粒劑治療慢性胃炎臨床效果研究 [J]. 武警后勤學(xué)院學(xué)報: 醫(yī)學(xué)版, 2019, 28(5): 22-25.

[28] 胡耶芳, 顏劍. 麻黃湯配方顆粒劑與傳統(tǒng)湯劑的療效比較研究 [J]. 實用藥物與臨床, 2017, 20(12): 1365-1367.

[29] 林偉雄, 樂智勇, 車海燕, 等. 吳茱萸湯顆粒劑、配方顆粒劑及傳統(tǒng)湯劑中指標(biāo)成分的含量比較 [J]. 中國實驗方劑學(xué)雜志, 2017, 23(13): 30-34.

[30] 楊玉琴, 梁光義, 秦利芬, 等. 不同制法四逆湯中甘草苷含量比較 [J]. 中國實驗方劑學(xué)雜志, 2011, 17(24): 40-42.

[31] 彭平, 田瑞華, 杜菁, 等. 白虎加桂枝湯單煎與合煎提取物質(zhì)量表征特性分析 [J]. 中國中藥雜志, 2018, 43(16): 3263-3269.

[32] 賈智若, 陳明偉, 甄丹丹, 等. 佛手散分煎液與合煎液的有效成分對比分析 [J]. 廣西中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報, 2020, 23(2): 90-93.

[33] 李孟璇, 孫林, 孟兆青, 等. 人參白術(shù)藥對配伍前后化學(xué)成分變化研究 [J]. 中草藥, 2014, 45(24): 3549-3552.

[34] Kim Y J, Lim H S, Kim Y,. Phytochemical quantification and theacetylcholinesterase inhibitory activity ofand its components [J]., 2017, 22(6): 925.

[35] Liu Y, Chen J, Li X H,. Simultaneous determination of seven alkaloids inSchneid by high-performance liquid chromatography [J]., 2010, 93(5): 1416-1421.

[36] Yue S J, Liu J, Wang A T,. Berberine alleviates insulin resistance by reducing peripheral branched-chain amino acids [J]., 2019, 316(1): 73-85.

[37] Zhu X, Bian H, Wang L,. Berberine attenuates nonalcoholic hepatic steatosis through the AMPK- SREBP-1c-SCD1 pathway [J]., 2019, 141: 192-204.

[38] Mai C T, Wu M M, Wang C L,. Palmatine attenuated dextran sulfate sodium (DSS)-induced colitis via promoting mitophagy-mediated NLRP3 inflammasome inactivation [J]., 2019, 105: 76-85.

[39] Li L, Huang T, Tian C,. The defensive effect of phellodendrine against AAPH-induced oxidative stress through regulating the AKT/NF-κB pathway in zebrafish embryos [J]., 2016, 157: 97-106.

[40] 陳文婷, 陳陽, 崔波, 等. 氣相色譜“一測多評”用于蒼術(shù)多成分含量測定的可行性研究 [J]. 中國中藥雜志, 2018, 43(3): 551-556.

[41] 朱思敏, 崔波, 歐陽麗敏, 等. 一測多評法結(jié)合Q型聚類分析對蒼術(shù)中3個聚炔類成分的比較研究 [J]. 藥物分析雜志, 2020, 40(4): 597-606.

[42] 許平翠, 壽旦, 吳人杰, 等. 基于HPLC指紋圖譜聚類分析和主成分分析的麩炒薏苡仁飲片質(zhì)量評價方法 [J]. 中華中醫(yī)藥雜志, 2019, 34(12): 5683-5686.

[43] 王青霞. 薏苡仁標(biāo)志性成分檢測及即食薏仁粉制備 [D]. 無錫: 江南大學(xué), 2018.

[44] 張歡, 楊中林, 鄭琢, 等. β-蛻皮甾酮對油酸誘導(dǎo)HepG2細胞內(nèi)脂肪堆積的抑制作用 [J]. 海峽藥學(xué), 2015, 27(4): 227-229.

[45] 朱玉霞, 孫麗莎, 楊矯, 等. 蛻皮甾酮對2型糖尿病大鼠肝細胞IRS-2蛋白表達的影響 [J]. 山東醫(yī)藥, 2014, 54(33): 10-12.

Comparative study on prevention of Simiao Formula Granules and Decoction on non-alcoholic fatty liver disease

QIU Hui-hui1, HAN Rui-ting1, 2, SHENG Li-li1, LI Hou-kai1

1. Institute of Interdisciplinary Integrative Medicine Research, Shanghai University of Traditional Chinese Medicine, Shanghai 201203, China 2. Respiratory department, The First Affiliated Hospital of Henan University of CM, Zhengzhou 450000, China

To verify the effect of Simiao Formula (四妙方) on non-alcoholic fatty liver disease (NAFLD), and study the difference of ingredients and efficacy between Simiao Formula Granules (四妙方顆粒) and Decoction on NAFLD.The contents of phellodendrine, magnoflorine, 20-hydroxyecdysone, jatrorrhizine, palmatine, and berberine in Simiao Formula Granules and Simiao Decoction were detected by HPLC. Male C57BL/6 mice were randomly divided into control group, model group, low-, high-dose Simiao Granules (10, 20 g/kg), low-, high-dose Simiao Decoction (10, 20 g/kg). Mice received a high fat/high sucrose diet to induce NAFLD. The body weight, liver weight, epididymal white adipose tissue (eWAT) weight, serum lipids, and liver lipids of each group were detected. HE staining was used to observe the pathology of liver tissue.The results of HPLC showed that the contents of six components in decoction were higher than those in granules. The main chromatographic peaks of Simiao Formula came from, few peaks come from the rest of the medicine. The results of pharmacodynamics showed that the body weight, liver weight, eWAT weight, serum total cholesterol (TC), low density lipoprotein cholesterol (LDL-C), uric acid, aspartate aminotransferase (AST), alanine aminotransferase (ALT), and liver triglycerides (TG) of the model group were significantly increased compared with the control group (< 0.05, 0.01). HE showed severe steatosis in model group. Compared with model group, both Simiao Formula Granules and Decoction effectively reduced the body weight, liver weight, eWAT weight, serum TC, LDL-C, HDL-C, uric acid, AST, ALT and liver TG of the mice (< 0.05, 0.01). The efficacy in the low dosage decoction group were better than that in the low dosage granules. Liver pathology showed that both Simiao Formula Granules and the Decoction significantly reduced lipid accumulation and steatosis, but the low dosage decoction group was significantly better than the low dosage granule group.The content of chemical components in Simiao Formula Decoction was higher than that in Granules. The efficacy of Simiao Formula Decoction was better than that of Simiao Formula Granules at low dosage, but the difference was small at high dosage.

Simiao Formula; non-alcoholic fatty liver disease; granules; decoction; pharmaceutical effect; phellodendrine; magnoflorine; 20-hydroxyecdysone; jatrorrhizine; palmatine; berberine

R285.5

A

0253 - 2670(2021)04 - 1031 - 08

10.7501/j.issn.0253-2670.2021.04.016

2020-10-24

國家重點研發(fā)計劃項目（2017YFC1700200）；上海市衛(wèi)健委中醫(yī)藥科研項目（2020JP016）

邱輝輝（1992—），男，博士研究生，研究方向為中藥防治非酒精性脂肪肝的藥效評價與機制研究。E-mail: qhhhello@sina.com

李后開（1976—），男，研究員，博士生導(dǎo)師，研究方向為功能代謝與腸道微生物組學(xué)以及肥胖、非酒精性脂肪肝發(fā)病機制的系統(tǒng)生物學(xué)研究。Tel: (021)51322729 E-mail: houkai1976@126.com

[責(zé)任編輯 李亞楠]