劉曉曦，馬云飛，李煥榮，劉鳳華，鮑明隆，張繼東，林紅英，許劍琴*

(1.廣東海洋大學(xué)濱海農(nóng)業(yè)學(xué)院動(dòng)物醫(yī)學(xué)系，湛江 524000； 2.中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院，北京 100193；3.北京農(nóng)學(xué)院動(dòng)物科學(xué)技術(shù)學(xué)院，北京 102200)

新生仔豬的胃腸道疾病是限制全球養(yǎng)豬業(yè)經(jīng)濟(jì)效益的重要因素，仔豬泄瀉是養(yǎng)殖者特別關(guān)注的問(wèn)題。調(diào)查結(jié)果顯示，北京、山東、河北等地區(qū)部分豬場(chǎng)的仔豬腹瀉發(fā)病率約為20%，有的甚至高達(dá)100%[1]?，F(xiàn)代獸醫(yī)學(xué)認(rèn)為，仔豬腹瀉主要分為兩大類(lèi)：一類(lèi)是由營(yíng)養(yǎng)不良、消化功能失調(diào)等生理性因素導(dǎo)致的腹瀉，另一類(lèi)是由產(chǎn)腸毒大腸桿菌、傳染性胃腸炎病毒等引起的病原性腹瀉[2]。中(獸)醫(yī)學(xué)認(rèn)為，以排便次數(shù)增多，糞便稀溏，甚至泄出如水樣為主癥的病證是泄瀉，基本病機(jī)是脾胃受損，濕困脾土，腸道功能失司[3-4]。泄瀉的病證主要分急性暴瀉和慢性久瀉，急性暴瀉分寒濕證、濕熱證、食滯證；慢性久瀉主要包括脾胃虛弱證、腎陽(yáng)虛衰證等[5]。一般來(lái)說(shuō)，生理性因素導(dǎo)致的仔豬泄瀉多由機(jī)體脾胃虛弱所致，而病原性仔豬泄瀉則需要根據(jù)仔豬的口色、脈象、臨床癥狀表現(xiàn)辨證分析確定為寒證或熱證后方可論治。

本試驗(yàn)將圍繞著仔豬濕熱泄瀉展開(kāi)研究。仔豬濕熱泄瀉證的癥狀表現(xiàn)為：煩熱口渴喜飲、糞色黃褐而臭、小便短赤、舌質(zhì)紅、苔黃膩等，治療原則是清熱運(yùn)脾，化濕止瀉[6]。濕熱病邪可破壞大鼠腸道上皮的完整性，使上皮細(xì)胞發(fā)生變性、壞死和脫落等現(xiàn)象[7]，濕熱泄瀉模型中大鼠的血清促炎因子如TNF-α、IL-1β和IL-6的含量均升高，機(jī)體發(fā)生炎癥反應(yīng)[8-9]。此外，濕熱泄瀉還會(huì)減弱仔豬受損小腸的修復(fù)功能[10]。東漢張仲景所著《傷寒論》中的葛根芩連湯，是治療濕熱泄瀉的經(jīng)典組方。葛根芩連湯可用于治療仔豬的細(xì)菌性痢疾和中毒性腸炎[11]，現(xiàn)代臨床運(yùn)用中，可在葛根芩連湯原方基礎(chǔ)上酌情加減運(yùn)用行氣燥濕健脾、清熱解毒類(lèi)藥物[12]。本研究所用的加味葛根芩連湯，以經(jīng)典方葛根芩連湯為基礎(chǔ)方，加金銀花增強(qiáng)葛根的清熱解毒功效，加白術(shù)、茯苓增強(qiáng)健脾利水和止瀉功效，清熱燥濕，健脾止瀉，兼顧解表。葛根芩連湯可通過(guò)抗炎、抗氧化、調(diào)節(jié)腸道微生物等途徑治療泄瀉[13-14]，但葛根芩連湯加金銀花、白術(shù)等藥物后對(duì)濕熱泄瀉仔豬腸道功能的調(diào)控作用尚不清楚?；诖?，本研究將探討加味葛根芩連湯對(duì)濕熱泄瀉仔豬腸道炎癥和損傷修復(fù)的調(diào)控作用。

1 材料與方法

1.1 主要試劑和儀器

葛根、黃芩、黃連、金銀花、白術(shù)、茯苓和甘草均購(gòu)自北京鶴延嶺藥業(yè)發(fā)展有限公司；4%多聚甲醛、蘇木精、伊紅、鹽酸酒精分化液、氯仿、異丙醇等均購(gòu)自美國(guó)Sigma 公司；無(wú)水乙醇、95%乙醇、甲醛、二甲苯等均購(gòu)自中國(guó)國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司；鼠源PCNA抗體(2586)購(gòu)自美國(guó)Cell Signaling Technology公司；生物素標(biāo)記的驢抗鼠IgG(715-065-151)購(gòu)自美國(guó)Jackson公司；Trizol reagent(15596-026) 購(gòu)自美國(guó)Invitrogen公司；反轉(zhuǎn)錄試劑盒(A3500) 購(gòu)自美國(guó)Promega公司；SYBR Green QPCR試劑盒(600828) 購(gòu)自美國(guó)Agilent公司。

石蠟切片機(jī)(美國(guó)Amersham optical公司)；生物顯微鏡(日本Olympus公司，BH2型)；全自動(dòng)熒光免疫分析儀(法國(guó)Biomèrieux MiniVidas公司，VIDAS30型)；病理圖像分析系統(tǒng)(日本Olympus公司，Olympus 6.0型)；超微量核酸蛋白測(cè)定儀(美國(guó)Thermo公司，ND2000型)；實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀(美國(guó)STRATAGENE，MX3005P)。

1.2 葛根芩連湯的制備

加味葛根芩連湯 (Jiawei Gegen Qinlian Decoction, JGQLD)由葛根、黃連、黃芩、金銀花、白術(shù)、茯苓和甘草按一定比例組成。加水沒(méi)過(guò)藥材浸泡30 min， 煎煮2 h。經(jīng)紗布濾取藥液，加水后再煎煮1次，將濾液合并，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀真空抽濾，分別濃縮藥液至生藥量為0.5、1.0和2.0 g·mL-1。4 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.3 試驗(yàn)動(dòng)物及分組

選8～15日齡產(chǎn)房未斷奶仔豬(大白×長(zhǎng)白)30頭, 來(lái)自北京市順義區(qū)某豬場(chǎng)。其中健康仔豬6頭， 為對(duì)照組。選取有糞色黃褐而臭、小便短赤、舌質(zhì)紅等癥狀的泄瀉仔豬24頭，分為濕熱泄瀉組(damp-heat diarrhea group, DHD group)、加味葛根芩連湯低劑量組(low dose of JGQLD group)、加味葛根芩連湯中劑量組(middle dose of JGQLD group)和加味葛根芩連湯高劑量組(high dose of JGQLD group)，每組6頭。仔豬自由采食，飲水。對(duì)照組和濕熱泄瀉組仔豬每天灌服5 mL生理鹽水，加味葛根芩連湯低劑量組每天灌服為0.5 g·mL-1的藥液5 mL(共2.5 g生藥，生藥劑量約為0.625 g·kg-1)，中劑量組每天灌服生藥濃度1.0 g·mL-1的藥液5 mL (共5.0 g生藥，生藥劑量約為1.25 g·kg-1), 高劑量組每天灌服生藥濃度為2.0 g·mL-1的藥液5 mL (共10.0 g生藥，生藥劑量約為2.50 g·kg-1)。每天1次，連續(xù)灌服5 d。

1.4 糞便評(píng)分

根據(jù)Hu等[15]介紹的5分法對(duì)仔豬糞便進(jìn)行主觀視覺(jué)評(píng)分，即根據(jù)仔豬糞便形態(tài)外觀進(jìn)行評(píng)分(1～5分)，糞便評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)見(jiàn)表1。在服用加味葛根芩連湯的第0、3、5 天，記錄仔豬的糞便評(píng)分。

表1 糞便評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)Table 1 Standard of fecal score

1.5 樣品采集、處理與保存

第6天，將對(duì)照組、濕熱泄瀉組和加味葛根芩連湯中劑量組內(nèi)的仔豬全部頸部放血處死，打開(kāi)腹腔，采集各組仔豬的十二指腸、空腸、回腸和結(jié)腸組織的中段，每段約4 cm，置于4%多聚甲醛液中固定備用。取各組仔豬的空腸，剪刀分割成每段1 cm，放入凍存管，液氮速凍后，置于-80 ℃冰箱保存。

1.6 腸道組織石蠟切片和H.E.染色

取出固定的十二指腸、空腸、回腸和結(jié)腸組織，雙蒸水沖洗干凈，然后切成0.5 cm的長(zhǎng)度，乙醇脫水，二甲苯透明，石蠟包埋，切片，常規(guī)方法H.E.染色，生物顯微鏡鏡下觀察，并用病理圖像分析系統(tǒng)拍照。

1.7 十二指腸增殖性細(xì)胞核抗原免疫組織化學(xué)染色

選十二指腸切片經(jīng)PBS洗滌，1% H2O2孵育后PBS洗滌，加增殖性細(xì)胞核抗原(PCNA)一抗(1∶5 000 稀釋)孵育過(guò)夜。PBS洗滌后滴加二抗 1∶100 生物素標(biāo)記的驢抗鼠IgG，室溫孵育2 h，PBS洗滌后滴加1∶100 ABC復(fù)合物，室溫孵育1 h，PBS洗滌后滴加DAB顯色液，逐滴滴入1% H2O2，觀察十二指腸切片顏色變化，顯色3～5 min后終止染色。常規(guī)脫水、透明、封片，室溫保存。生物顯微鏡鏡下觀察，用全自動(dòng)熒光免疫分析儀拍照。

1.8 RNA提取、反轉(zhuǎn)錄及熒光定量PCR

分段的仔豬空腸放入凍存管，液氮速凍后置于-80 ℃冰箱保存。取空腸用TRIzol總RNA提取試劑盒提取仔豬空腸總RNA。用兩步法進(jìn)行RNA逆轉(zhuǎn)錄，總反應(yīng)體系為25 μL。首先配備反應(yīng)體系13 μL(總RNA模板1.0 μg，Oligo (dT) 18為 1.0 μL，DEPC水11 μL)，PCR儀中70 ℃進(jìn)行變性反應(yīng)5 min， 立即冰浴3 min。接著，在反應(yīng)體系中加入以下試劑：1.25 μL的dNTPs (10 mmol·μL-1)，0.5 μL 的RNasin (Ribonuclease Inhibitor, 40 U·μL-1)， 5.0 μL的M-MLV逆轉(zhuǎn)錄酶 5 × Buffer，1.0 μL的M-MLV逆轉(zhuǎn)錄酶 (200 U·L-1)，以及4.25 μL的DEPC水。PCR儀中42 ℃反應(yīng)1 h， 將產(chǎn)物 cDNA立即使用或-20 ℃保存。

用熒光定量PCR (SYBR Green I)方法對(duì)各組內(nèi)空腸TLR4、TNF-α、IL-1β和IL-6 mRNA的表達(dá)量進(jìn)行測(cè)定。目的基因TLR4、TNF-α、IL-1β和IL-6 的引物序列見(jiàn)表2。

表2 熒光定量PCR引物表Table 2 Primers for fluorescence quantitative PCR

按照SYBR Green qPCR試劑盒說(shuō)明書(shū)配制20 μL 反應(yīng)體系：Mix (2 ×) 10 μL，cDNA模板+DEPC 水8.0 μL，上游引物1.0 μL，下游引物1.0 μL。 反應(yīng)體系混勻后立即放入實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀中，反應(yīng)條件：95 ℃預(yù)變性10 min； 95 ℃變性30 s，60 ℃退火30 s，72 ℃延伸60 s，循環(huán)40次；72 ℃再延伸8 min。熔解曲線反應(yīng)條件：95 ℃ 1 min； 58 ℃ 30 s；95 ℃ 30 s?；蛳鄬?duì)表達(dá)量計(jì)算公式：相對(duì)含量=2-[ΔΔCt]， ΔΔCt=處理組ΔCT (目的基因-β-actin)- 對(duì)照組ΔCT (目的基因-β-actin)。

1.9 數(shù)據(jù)分析

試驗(yàn)結(jié)果用“Mean±SEM”表示，應(yīng)用統(tǒng)計(jì)軟件SPSS 20.0進(jìn)行多重比較檢驗(yàn)。其中, PCNA免疫組化結(jié)果用Image J軟件分析，熒光定量PCR檢測(cè)結(jié)果應(yīng)用Mx 3000P (Stratagene, USA) 分析，試驗(yàn)結(jié)果均采用origin 6繪圖軟件制圖。*表示P<0.05，**表示P<0.01。

2 結(jié) 果

2.1 仔豬糞便評(píng)分

各組仔豬的糞便評(píng)分如表3所示。在0 d，健康仔豬的糞便評(píng)分和濕熱泄瀉仔豬的糞便評(píng)分存在顯著差異(P<0.05), 濕熱泄瀉的仔豬發(fā)生了嚴(yán)重的腹瀉。服用加味葛根芩連湯3 d 后，相比于DHD組，JGQLD組仔豬的糞便評(píng)分顯著下降(P<0.05)，且存在劑量依賴(lài)性，表明加味葛根芩連湯初步緩解了濕熱泄瀉仔豬的腹瀉。服用加味葛根芩連湯5 d后，濕熱泄瀉仔豬的糞便評(píng)分均恢復(fù)正常，未發(fā)生腹瀉。

表3 仔豬的糞便評(píng)分Table 3 The fecal score of piglets

2.2 仔豬小腸和結(jié)腸的形態(tài)結(jié)構(gòu)觀察

正常情況下，仔豬小腸和結(jié)腸絨毛結(jié)構(gòu)完整，排列有序(圖1 A1～D1)。濕熱泄瀉仔豬的十二指腸結(jié)構(gòu)受到嚴(yán)重破壞，腸腔內(nèi)分泌大量液體，絨毛排列紊亂，絨毛中下部發(fā)生斷裂現(xiàn)象，嵴斷裂，黏膜固有層受到嚴(yán)重?fù)p傷，血管擴(kuò)張并出現(xiàn)炎性細(xì)胞聚集(圖1 A2)?？漳c結(jié)構(gòu)受到嚴(yán)重破壞，絨毛和隱窩斷裂與嵴分離脫落至腸腔(圖1 B2)?；啬c結(jié)構(gòu)受到損傷，絨毛上皮發(fā)生脫落現(xiàn)象(圖1 C2)。結(jié)腸上皮有脫落現(xiàn)象，固有層下有出血(圖1 D2)。加味葛根芩連湯中劑量組內(nèi)，仔豬十二指腸結(jié)構(gòu)趨于正常，絨毛分布較為整齊，有大量的絨毛包裹成團(tuán)脫落至腸腔，脫落的絨毛團(tuán)中有炎性細(xì)胞聚集(圖1 A3)?？漳c和回腸結(jié)構(gòu)完整，黏膜固有層下發(fā)生輕微出血(圖1 B3和C3)。結(jié)腸結(jié)構(gòu)較完整(圖1 D3)。

1代表分泌的黏液; 2代表?yè)p傷的絨毛上皮; 3代表脫落的絨毛團(tuán); 4代表出血; 5代表炎性細(xì)胞聚集1 represents secreted mucus; 2 represents damaged villus; 3 represents shedding villus; 4 represents bleeding; 5 represents gathered inflammatory cells圖1 仔豬小腸和結(jié)腸形態(tài)結(jié)果變化 (H.E.染色)Fig.1 The morphology section of small intestine and colon in piglets (H.E. staining)

2.3 十二指腸PCNA表達(dá)量變化

如圖2所示，棕黃色所示為增殖性細(xì)胞核抗原(PCNA)免疫反應(yīng)陽(yáng)性產(chǎn)物。免疫組織化學(xué)染色結(jié)果顯示，正常情況下，PCNA在仔豬十二指腸的絨毛和隱窩處呈均一散落分布(圖2A和D)；相比于對(duì)照組，濕熱泄瀉組仔豬十二指腸絨毛中PCNA表達(dá)量極顯著降低(P<0.01)，腸腺隱窩PCNA表達(dá)量顯著升高(P<0.05)(圖2B和E，圖3)；相比于濕熱泄瀉組，加味葛根芩連湯中劑量組仔豬十二指腸絨毛PCNA表達(dá)量極顯著升高(P<0.01)，腸腺隱窩PCNA表達(dá)量顯著降低(P<0.05)(圖2C和F，圖3)。

A、B和C為低倍鏡下觀察結(jié)果，D、E和F為高倍鏡下觀察結(jié)果A, B and C (Low magnification), D, E and F (High magnification)圖2 仔豬十二指腸PCNA表達(dá)變化Fig.2 Changes of PCNA expression in the duodenum of piglets

A.十二指腸絨毛中PCNA染色的百分比； B.十二指腸隱窩中PCNA染色的百分比A. The percentage of PCNA-stained cells in the villus of duodenum; B. The percentage of PCNA-stained cells in the crypt of duodenum圖3 仔豬十二指腸的絨毛和隱窩PCNA表達(dá)量變化Fig.3 Changes of PCNA expression in the villus and crypt of duodenum in piglets

2.4 空腸炎性因子mRNA表達(dá)量變化

由圖4可知，相比于對(duì)照組，濕熱泄瀉組仔豬空腸TLR4 mRNA表達(dá)量顯著升高至1.83倍(P<0.05)，TNF-αmRNA表達(dá)量極顯著升高至4.32倍(P<0.01)，IL-1β mRNA表達(dá)量極顯著升高至6.88倍(P<0.01)，IL-6 mRNA表達(dá)量顯著升高至5.25倍(P<0.05)，表明濕熱泄瀉仔豬空腸激活了TLR4介導(dǎo)的腸道炎癥反應(yīng)。相比于濕熱泄瀉組，加味葛根芩連湯中劑量組仔豬TLR4 mRNA表達(dá)量顯著降低至0.54倍(P<0.05)，TNF-αmRNA 表達(dá)量極顯著降低至0.23倍(P<0.01)，IL-1β mRNA表達(dá)量極顯著降低至0.18倍(P<0.01)，IL-6 mRNA表達(dá)量顯著降低至0.29倍(P<0.05)，表明加味葛根芩連湯阻斷了濕熱泄瀉仔豬空腸TLR4介導(dǎo)的腸道炎癥反應(yīng)。

圖4 仔豬空腸 TLR4、TNF-α、IL-1β and IL-6 mRNA表達(dá)量變化Fig.4 The mRNA expression of TLR4, TNF-α, IL-1β and IL-6 in the jejunum of piglets

3 討 論

葛根芩連湯可解除表證，清解里熱，適用于濕熱泄瀉證。此方的君藥葛根解表清熱，升清止瀉，臣藥黃芩、黃連清熱燥濕，金銀花助其清熱，佐藥白術(shù)、茯苓增強(qiáng)利濕，炙甘草調(diào)和諸藥。各組仔豬的糞便指數(shù)顯示，加味葛根芩連湯顯著改善了仔豬的濕熱泄瀉。葛根芩連湯中，葛根和黃芩都具有抗炎、抗氧化的作用[16], 葛根與黃芩配伍能增加黃芩的藥效[12]；黃連是降低小鼠腹瀉指數(shù)的主要作用藥物，炙甘草與黃連配伍是降低小腸推進(jìn)率的兩個(gè)主要作用藥物，且炙甘草與黃連配伍能增強(qiáng)黃連的藥效[17]。葛根芩連湯可通過(guò)多種方式治療泄瀉，如它可通過(guò)調(diào)節(jié)腸道微生物及其代謝產(chǎn)物短鏈脂肪酸的方式治療仔豬泄瀉[13]，它能在小鼠的潰瘍性結(jié)腸炎模型中降低腸道的炎癥反應(yīng)和氧化應(yīng)激[14]。此外，相比于正常的大鼠，濕熱病邪還促進(jìn)大鼠的腸道對(duì)葛根芩連湯的吸收[18]。

本試驗(yàn)中，濕熱泄瀉致使仔豬的十二指腸、空腸、回腸和結(jié)腸組織結(jié)構(gòu)受到損傷，特別是十二指腸和空腸；濕熱泄瀉仔豬的十二指腸還分泌了大量黏液，結(jié)腸絨毛上皮有出血現(xiàn)象。小腸黏膜的所有上皮細(xì)胞來(lái)源于隱窩干細(xì)胞，隱窩干細(xì)胞的發(fā)生、分化、增殖、分布等過(guò)程，直接影響腸黏膜的完整性和功能特異性。PCNA是一種在增殖細(xì)胞內(nèi)合成或表達(dá)的核內(nèi)多肽，是DNA 合成必不可少的因子，PCNA陽(yáng)性表達(dá)的強(qiáng)弱直接反映了細(xì)胞增殖活動(dòng)的高低[19]，它在斷奶仔豬的損傷小腸表達(dá)顯著增加[20]。本研究中，對(duì)照組仔豬十二指腸的PCNA 主要在隱窩中上部的分裂區(qū)表達(dá)(圖2A和D)；濕熱病邪誘導(dǎo)的仔豬腸道黏膜損傷后，十二指腸腸腺隱窩處PCNA表達(dá)量顯著升高(圖2B和E，圖3B)，所以十二指腸隱窩PCNA的高表達(dá)是由濕熱病邪誘導(dǎo)的腸道損傷引起的。

相比于濕熱泄瀉組，加味葛根芩連湯組的十二指腸、空腸、回腸和結(jié)腸的組織結(jié)構(gòu)得到顯著改善，表明加味葛根芩連湯阻斷了濕邪、熱邪對(duì)腸道的損傷，從而維持腸道結(jié)構(gòu)的完整性。前期研究中，我們發(fā)現(xiàn),葛根的主要活性成分葛根素，黃芩中的黃芩苷，以及黃連中的鹽酸小檗堿預(yù)處理豬腸道上皮細(xì)胞后可顯著改善上皮細(xì)胞的微觀結(jié)構(gòu)[21]，所以，此方中的葛根、黃芩和黃連都起到了維持腸道結(jié)構(gòu)完整性的作用。PCNA可通過(guò)參與小腸細(xì)胞增殖過(guò)程，誘導(dǎo)小腸黏膜上皮細(xì)胞由絨毛底部隱窩處開(kāi)始不斷地分裂增殖，并逐漸向絨毛上方遷移分化成熟[22]。相比于濕熱泄瀉組，加味葛根芩連湯組十二指腸絨毛中的PCNA表達(dá)量顯著升高(圖3A)，腸腔中還有不斷脫落的絨毛上皮細(xì)胞，這表明，濕熱泄瀉仔豬服用加味葛根芩連湯后，隱窩干細(xì)胞不斷向上方遷移分化為成熟的黏膜上皮細(xì)胞，并促進(jìn)了受損的絨毛上皮細(xì)胞的脫落。以上表明，加味葛根芩連湯可以通過(guò)促進(jìn)隱窩干細(xì)胞的增殖和分化為成熟的腸道上皮細(xì)胞以維持腸道結(jié)構(gòu)的完整性。黃芩可對(duì)腸炎模型小鼠受損的空腸發(fā)揮修復(fù)作用[23]，且黃芩苷對(duì)豬的腸道上皮細(xì)胞具有增殖活性[21]，所以，加味葛根芩連湯中的黃芩可能是促進(jìn)腸道損傷修復(fù)的關(guān)鍵藥物。葛根芩連湯還可通過(guò)促進(jìn)腸道緊密連接蛋白的表達(dá)緩解泄瀉仔豬的腸道損傷[13]，這可能是加味葛根芩連湯緩解濕熱泄瀉的潛在作用途徑。

腸道上皮表面的Toll樣受體激活后會(huì)促進(jìn)黏膜免疫系統(tǒng)分泌促炎因子、趨化因子和抗微生物小肽等，激活細(xì)胞的先天性和獲得性免疫反應(yīng)，而腫瘤壞死因子-α (TNF-α)，白介素1β (IL-1β)和白介素6 (IL-6)是炎癥反應(yīng)發(fā)生后的促炎因子[24]。促炎因子是調(diào)節(jié)腸道上皮滲透性的重要因素，可控制腸道上皮緊密連接蛋白的組成和結(jié)構(gòu)[25-26]，如TNF-α可以損害上皮細(xì)胞中緊密連接蛋白的功能，IL-1β可以抑制緊密連接蛋白的表達(dá)[26]。在本試驗(yàn)中，相比于對(duì)照組，濕熱泄瀉組仔豬空腸的TLR4、TNF-α、IL-1β和IL-6 mRNA顯著升高，表明濕熱泄瀉激活了仔豬空腸中TLR4介導(dǎo)的炎癥反應(yīng)。相比于濕熱泄瀉組，加味葛根芩連湯中劑量組內(nèi)仔豬空腸的TLR4、TNF-α、IL-1β和IL-6 mRNA顯著降低。在小鼠潰瘍性結(jié)腸炎模型也發(fā)現(xiàn)，葛根芩連湯抑制了TLR4信號(hào)通路，發(fā)揮抗炎作用[14]。仔豬空腸炎性因子在mRMA水平表達(dá)量下降，表明加味葛根芩連湯了降低濕熱泄瀉仔豬的空腸的炎癥反應(yīng)，進(jìn)而維持了腸道上皮結(jié)構(gòu)的完整性。

4 結(jié) 論

本研究結(jié)果表明，加味葛根芩連湯可通過(guò)促進(jìn)隱窩干細(xì)胞的增殖和降低炎癥反應(yīng)修復(fù)濕熱泄瀉仔豬腸道損傷。