吳超，郭芙蓉，蘇桂華

(喀什地區(qū)第一人民醫(yī)院傳染科，新疆 喀什 844000)

乙肝是目前我國臨床上較為常見的慢性疾病，在青壯年人群中具有較高的感染率，但由于慢性乙肝病程長、癥狀輕，許多患者在感染乙肝后未及時采取治療，也未合理調(diào)整生活習(xí)慣，進(jìn)而導(dǎo)致肝功能進(jìn)一步出現(xiàn)損傷，隨時間推移漸漸發(fā)展成彌散性病變和肝硬化[1]。肝硬化患者其免疫功能在患病后會出現(xiàn)顯著下降，長時間的炎性狀態(tài)也會進(jìn)一步引發(fā)肝纖維化和其他病癥，嚴(yán)重影響患者的生活質(zhì)量[2-3]。因此，及時對慢性乙肝肝硬化患者開展治療對于患者的康復(fù)和預(yù)后具有重要意義。研究[4]發(fā)現(xiàn)，益生菌療法對于酒精性肝硬化患者具有較好的療效，但對于肝硬化并發(fā)感染的相關(guān)研究較少。本研究探討分析益生菌對慢性乙肝肝硬化患者免疫功能及腸道菌群的影響。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇2018年1月至2020年3月在喀什地區(qū)第一人民醫(yī)院進(jìn)行診治的100例慢性乙肝肝硬化患者作為本次研究對象，按照隨機(jī)數(shù)表法分為兩組，每組各50例。納入標(biāo)準(zhǔn)[5]：(1)經(jīng)診斷符合2015版中華醫(yī)學(xué)會肝病學(xué)會制定的慢性乙肝肝硬化的診斷標(biāo)準(zhǔn)；(2)有肝功能異常病史；(3)具有慢性乙肝肝硬化的典型癥狀；(4)臨床資料完整；(5)自愿參與并簽署知情同意書。排除標(biāo)準(zhǔn)[5]：(1)近期消化道出血者；(2)合并惡性腫瘤者；(3)同時患有可能引起腸道功能損失的其他疾病者，如糖尿??；(4)近期有明顯感染病史者；(5)病例資料不完整；(6)依從性差。觀察組患者28～65歲，平均年齡(44.32±6.50)歲；病程9個月～5年，平均(2.27±0.85)年；男性31例，女性19例。對照組患者26～69歲，平均年齡(43.63±6.82)歲；病程10個月～6年，平均(2.66±0.87)年；男性32例，女性18例。兩組患者的年齡、病程等一般資料比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。本次研究經(jīng)本院倫理委員會審核批準(zhǔn)同意，患者及家屬知情同意。

1.2 方法

1.2.1 治療方式 兩組患者均連續(xù)治療14 d。對照組患者進(jìn)行常規(guī)治療，即常規(guī)保肝、營養(yǎng)支持、護(hù)理等綜合治療。觀察組在對照組基礎(chǔ)上給予益生菌治療，選擇的藥物為雙歧桿菌乳桿菌三聯(lián)活菌片(內(nèi)蒙古雙奇藥業(yè)股份有限公司)，3次/d，3片/次。

1.2.2 測定腸道菌群 將兩組患者治療前后的新鮮糞便留存在糞便盒中，在-70 ℃的低溫中保存待測。檢測時，在0.5 g的新鮮糞便中加入1.5 mL的無菌NaCl溶液，按照10倍稀釋法分別稀釋為10-1、10-3、10-5、10-7和10-9溶液，在上述溶液中各取50 μL在選擇培養(yǎng)基中進(jìn)行接種。厭氧菌(雙歧桿菌、嗜酸桿菌、梭菌)采用抽氣換氣培養(yǎng)法進(jìn)行培養(yǎng)，時長48 h；需氧菌(腸桿菌、腸球菌)則在35 ℃的孵育器中進(jìn)行培養(yǎng)，時長24 h。選擇VITEK-AMS全自動微生物鑒定系統(tǒng)(法國生物梅里埃公司)對腸道菌群進(jìn)行鑒定，鑒定結(jié)果單位表示為每克糞便濕重中菌形成單位的對數(shù)值。

1.2.3 測定肝功能、炎癥因子、NK細(xì)胞、外周血T細(xì)胞以及血清內(nèi)毒素 治療前后，在兩組患者空腹時采集其肘部的外周靜脈血5 mL，設(shè)置3 000 rpm的轉(zhuǎn)速離心10 min，分離出上清液，并放置于-40 ℃的冰箱中保存。所有的測定操作均由專業(yè)人員嚴(yán)格按照操作過程進(jìn)行，丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)、天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)以及總膽紅素(TBIL)水平使用全自動生化分析儀進(jìn)行測定；炎癥因子水平(IL-10、TNF-α)使用酶聯(lián)免疫吸附法進(jìn)行測定；使用上海伊華臨床醫(yī)學(xué)科技公司的試劑盒，用改良鱟試驗(yàn)法對血清內(nèi)毒素水平進(jìn)行檢測；采用FACScan流式細(xì)胞技術(shù)檢測CD3、CD4和NK細(xì)胞水平。

1.3 觀察指標(biāo)

比較兩組患者治療后的腸道菌群(包括雙歧桿菌、嗜酸桿菌、梭菌、腸桿菌和腸球菌)；比較兩組患者治療前后的肝功能(ALT、AST和TBIL)；比較兩組患者治療前后的炎癥因子水平(IL-10和TNF-α)及血清內(nèi)毒素水平；比較兩組患者治療前后的NK細(xì)胞和外周血T細(xì)胞水平(CD3和CD4細(xì)胞)。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

2 結(jié)果

2.1 兩組患者治療后的腸道菌群比較

治療后，觀察組患者的雙歧桿菌、嗜酸桿菌及梭菌含量顯著高于對照組，腸桿菌和腸球菌含量顯著低于對照組(均P<0.05)。見表1。

表1 兩組患者治療后的腸道菌群比較

2.2 兩組患者治療前后的肝功能比較

治療前，兩組患者的ALT、AST及TBIL比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；治療后，兩組患者的ALT、AST及TBIL均顯著下降，但觀察組患者低于對照組(P<0.05)。見表2。

2.3 兩組患者治療前后的炎癥因子及血清內(nèi)毒素水平比較

治療前，兩組患者的IL-10、TNF-α及內(nèi)毒素水平比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；治療后，兩組患者的IL-10、TNF-α及內(nèi)毒素水平均顯著下降，但觀察組患者低于對照組(P<0.05)。見表3。

2.4 兩組患者治療前后的NK細(xì)胞和外周血T細(xì)胞水平比較

治療前，兩組患者的NK、CD3及CD4水平比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；治療后，兩組患者的NK、CD3及CD4水平均顯著上升，但觀察組患者高于對照組(P<0.05)。見表4。

表2 兩組患者治療前后的肝功能比較

表3 兩組患者治療前后的炎癥因子及血清內(nèi)毒素水平比較

表4 兩組患者治療前后的NK細(xì)胞和外周血T細(xì)胞水平比較

3 討論

健康人的肝臟能夠清除來自腸道的內(nèi)毒素、酚類、假性神經(jīng)遞質(zhì)前體以及真菌等各種毒素和病原菌，但慢性乙肝肝硬化患者由于肝臟功能受損，腸道屏障功能破壞，腸道微生態(tài)發(fā)生變化，通過細(xì)菌易位，腸道細(xì)菌及代謝物會進(jìn)入腸外器官[6-7]。有研究[8-9]顯示，慢性乙肝肝硬化患者的腸道菌群存在顯著紊亂，且與肝硬化嚴(yán)重程度呈正相關(guān)，腸道屏障受損會促進(jìn)炎癥因子釋放，破壞機(jī)體免疫功能，給患者帶來痛苦，降低生活質(zhì)量。

慢性乙肝肝硬化患者的腸道菌群特點(diǎn)表現(xiàn)為需氧菌增多，厭氧菌減少，即有益菌含量降低使得有害菌比例上升，促進(jìn)患者體內(nèi)生成內(nèi)毒素，毒素代謝能力降低，導(dǎo)致患者肝功能受損[10-11]。益生菌中含有多樣菌群，本次研究使用的雙歧桿菌乳桿菌三聯(lián)活菌片的主要成分是雙歧桿菌、乳桿菌、蠟樣芽胞桿菌及糞腸球菌，可與腸道黏膜上皮細(xì)胞緊密結(jié)合，不僅可以促進(jìn)機(jī)體消化吸收營養(yǎng)物質(zhì)，還可調(diào)整腸道菌群，幫助腸道穩(wěn)定，實(shí)現(xiàn)腸道菌群的平衡[12-13]，達(dá)到改善肝功能的目的，與本次研究結(jié)果相符。

健康人體的天然免疫和適應(yīng)性免疫系統(tǒng)通過免疫耐受機(jī)制，既可防止病菌感染，還能夠控制自身免疫性疾病，機(jī)體抗感染能力較強(qiáng)，但是慢性乙肝肝硬化患者的抗感染能力發(fā)生顯著下降，主要原因是慢性乙肝肝硬化患者的外周血T細(xì)胞中的CD3和CD4細(xì)胞比例顯著失衡，CD4細(xì)胞比例下降[14-16]。而益生菌可使B細(xì)胞抗體能力增強(qiáng)，改善患者免疫功能，這一功能與益生菌能夠調(diào)節(jié)腸道菌群，使腸道菌群恢復(fù)平衡有關(guān)。有研究[17-18]顯示，慢性乙肝肝硬化患者的IL-10及TNF-α顯著高于正常者，內(nèi)毒素表達(dá)較多，并可通過信號途徑促進(jìn)因子合成，而益生菌可通過腸道菌群的有效調(diào)節(jié)，緩解機(jī)體的炎癥狀態(tài)，抑制炎癥因子過度表達(dá)。本研究結(jié)果顯示經(jīng)治療后，觀察組雙歧桿菌、嗜酸桿菌及梭菌含量高于對照組，腸桿菌和腸球菌含量則顯著較低；在肝功能方面，觀察組患者的ALT、AST及TBIL水平低于對照組；此外，觀察組NK、CD3及CD4水平高于對照組，炎癥因子及血清內(nèi)毒素水平則顯著較低。

綜上所述，益生菌在慢性乙肝肝硬化的治療中不僅可以改善患者的肝功能，還能夠調(diào)節(jié)患者的免疫功能，促進(jìn)腸道有益菌的增加，還可促進(jìn)炎癥因子水平的表達(dá)，具有臨床推廣價值。