◆作者：龔俊勇吳偉堅(jiān)鐘國防

◆單位：1.深圳綠微康動(dòng)物營養(yǎng)有限公司；2.上海海洋大學(xué)遺傳與育種

脂肪在魚類生長中具有十分重要的功能，可為其生長提供能量，能量為碳水化合物的2.25倍，是魚類正常生長發(fā)育所必需的營養(yǎng)因子，還可提供必需脂肪酸；同時(shí)，可節(jié)約蛋白和降低氮排泄（Takeuchi T等,1978）。當(dāng)飼料中的脂肪含量不足或者缺乏時(shí)，可能導(dǎo)致魚類代謝紊亂，引發(fā)脂溶性維生素缺乏。當(dāng)日糧脂肪含量過高，則會(huì)導(dǎo)致魚體脂肪過量沉積，魚體抗病力下降，產(chǎn)生營養(yǎng)性脂肪肝，影響魚體對(duì)蛋白質(zhì)的消化吸收與利用，從而影響魚類的生長（王愛民等,2014）。然而，在實(shí)際養(yǎng)殖中由于過度添加低蛋白高能量日糧，導(dǎo)致魚體中脂肪過度蓄積，嚴(yán)重制約魚類養(yǎng)殖業(yè)的健康發(fā)展。

脂肪酶是脂肪消化利用最基本的酶，可將脂肪分解成甘油二酯、單甘脂、甘油和脂肪酸，提高飼料中油脂的消化吸收率，促進(jìn)魚類健康，減少脂肪肝的發(fā)生率。肉仔雞日糧中添加脂肪酶，可提高其對(duì)脂肪的消化和黃羽肉雞對(duì)脂質(zhì)的代謝（葉慧等,2013）。在草魚高脂肪水平日糧中額外添加適量脂肪酶可提高其生長性能及改善腸道健康（Liu S等,2016）。本試驗(yàn)在羅非魚低脂日糧中添加不同水平脂肪酶，研究其對(duì)羅非魚生長性能、形體指數(shù)及血清生化、免疫指標(biāo)的影響，探討其是否可達(dá)到高脂肪組水平性能，為脂肪酶在魚類養(yǎng)殖中的應(yīng)用及提高魚體脂肪消化提供實(shí)踐依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

選用上海海洋大學(xué)魚類遺傳與育種實(shí)驗(yàn)室培育的同批吉富羅非魚為試驗(yàn)用魚，規(guī)格整齊，健康無損害，平均體重為（14.32±0.15）g。

1.2 試驗(yàn)時(shí)間

2018年8月1日到10月7日，為期68d。

1.3 飼養(yǎng)試驗(yàn)

1.3.1 試驗(yàn)日糧

日糧組成及營養(yǎng)水平見表1。

1.3.2試驗(yàn)設(shè)計(jì)

試驗(yàn)選用480尾羅非魚，隨機(jī)分為6個(gè)組，每個(gè)組4個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)20尾。正對(duì)照組飼喂基礎(chǔ)日糧（脂肪含量高達(dá)8.6%），負(fù)對(duì)照組基礎(chǔ)日糧降低能量50 kcal/kg，試驗(yàn)1-4組在負(fù)對(duì)照組基礎(chǔ)上分別添加50、100、200、400 g/t脂肪酶。

1.3.3 飼養(yǎng)管理

養(yǎng)殖期間，每兩周稱重1次，調(diào)整投飼量，日投喂率為體重的3%～5%。每天投喂2次，投喂時(shí)間分別為7：00和17：00。每天早上清除箱內(nèi)糞便，養(yǎng)殖期間水溫控制為24.0±0.5℃，pH值為7.0±0.5，溶解氧不低于6.0 mg/L，氨氮控制在0.03 mg/L以下。

1.4 樣品采集和分析

試驗(yàn)結(jié)束后禁食24 h，每組隨機(jī)稱魚10尾，取血樣、內(nèi)臟及肝臟并稱重。計(jì)算存活率（SR）、增重率（WGR）、飼料轉(zhuǎn)化率（FCR）、特定生長率（SGR）、肥滿度（CF）、肝體比（HIS）和臟體比（VSI）等。

同時(shí)，每缸中取5尾魚從尾靜脈抽取血液置于5 mL采血管中，待血液凝固后，4000 r/min(4℃)離心10 min，分離血清保存于-80℃?zhèn)溆?。生理生化指?biāo)血清膽固醇、甘油三酯和尿素氮等采用日立7600全自動(dòng)生化分析儀測定，測定試劑購自羅氏公司。谷草轉(zhuǎn)氨酶（GPT）、谷丙轉(zhuǎn)氨酶（GOT）、血清超氧化物歧化酶（T-SOD）、過氧化氫酶（CAT）、溶菌酶、補(bǔ)體C3和IgM，均采用南京建成生物公司的試劑盒按照說明書進(jìn)行測定。

表1 羅非魚飼料配方及營養(yǎng)水平

表2 添加不同水平脂肪酶對(duì)羅非魚生長性能的影響

存活率（%）＝100×末尾數(shù)/初始尾數(shù)

增重率（%）＝100×(末均重-初均重)/初均重

飼料轉(zhuǎn)化率（%）=消耗飼料量/增重

特定生長率（%/d）＝100×[ln（末均重）-ln（初均重）]/飼養(yǎng)天數(shù)

肥滿度（g/cm3）=100×(末均重-初均重)/體長3

1.5 數(shù)據(jù)處理

用SPSS 17.0處理數(shù)據(jù)，用單因子方差分析（one-way ANOVA,LSD）和Duncan氏多重比較檢驗(yàn)統(tǒng)計(jì)結(jié)果。所有結(jié)果使用“平均值±標(biāo)準(zhǔn)差”（mean±SD）表示。以P<0.05為顯著水平。

2 試驗(yàn)結(jié)果

2.1 添加脂肪酶對(duì)羅非魚生長性能的影響

由表2可知，與負(fù)對(duì)照組比較，各試驗(yàn)組增重率分別提高6.97%、15.70%、11.41%、10.63%，且添加量為100、200及400 g/t試驗(yàn)組增重率顯著高于負(fù)對(duì)照組（P<0.05）；各試驗(yàn)組與正對(duì)照組增重率沒有顯著性差異（P>0.05）。與負(fù)對(duì)照組比較，各試驗(yàn)組FCR均有一定程度降低，但差異不顯著（P>0.05）。脂肪酶的不同添加量對(duì)特定生長率及存活率無顯著影響（P>0.05）。

2.2 添加脂肪酶對(duì)羅非魚形體指數(shù)的影響

由表3可知，與負(fù)對(duì)照組比較，試驗(yàn)2、3組肥滿度差異顯著（P<0.05），組間無顯著差異（P>0.05）。與負(fù)對(duì)照組比較，試驗(yàn)3組與負(fù)對(duì)照組差異顯著（P<0.05），組間無顯著差異（P>0.05）；與負(fù)對(duì)照組比較，各試驗(yàn)組臟體比分別降低2.85%、9.54%、10.25%、8.29%，其中試驗(yàn)2、3、4組與負(fù)對(duì)照組差異顯著（P<0.05）；與正對(duì)照組比較，各試驗(yàn)組臟體比有降低的趨勢，均差異不顯著（P>0.05）。

2.3 添加脂肪酶對(duì)羅非魚血清生化指標(biāo)的影響

從表4可知：與負(fù)對(duì)照組比較，各試驗(yàn)組甘油三酯降低明顯，均差異顯著（P<0.05），組間無顯著差異（P＞0.05）。與負(fù)對(duì)照組比較，添加脂肪酶可以降低羅非魚血清低密度脂蛋白含量，其中添加量為100、200 g/t試驗(yàn)組達(dá)到差異顯著水平（P<0.05）。添加量為50、100、200 g/t試驗(yàn)組顯著高于負(fù)對(duì)照組（P<0.05），且組間無顯著差異（P＞0.05）。

從表5可知：添加量為100、200、400 g/t試驗(yàn)組GPT顯著低于負(fù)對(duì)照組（P<0.05），且組間無顯著差異。與正對(duì)照組比較，各試驗(yàn)組GPT有降低趨勢，但差異不顯著（P＞0.05）。與負(fù)對(duì)照組比較，100、200 g/t試驗(yàn)組GOT差

異顯著（P<0.05）；與正對(duì)照組比較，00、400 g/t試驗(yàn)組差異顯著（P<0.05）。尿素氮、血糖含量各組間無顯著影響（P＞0.05）。

表3 添加不同水平脂肪酶對(duì)羅非魚形體指數(shù)的影響

表4 添加不同水平脂肪酶對(duì)羅非魚血清生化指標(biāo)的影響(m mol/L)

表5 添加不同水平脂肪酶對(duì)羅非魚血清生化指標(biāo)的影響

表6 添加不同水平脂肪酶對(duì)血清抗氧化免疫指標(biāo)的影響

2.4 添加脂肪酶對(duì)羅非魚抗氧化免疫指標(biāo)的影響

從表6可知：與負(fù)對(duì)照組比較，添加不同水平脂肪酶后羅非魚血清抗氧化指標(biāo)CAT、T-SOD和溶菌酶酶活及免疫指標(biāo)補(bǔ)體C3及Ig M含量均有不同程度的提高，均差異不顯著（P＞0.05），但400 g/t試驗(yàn)組溶菌酶提高22.11%，與負(fù)對(duì)照組差異顯著（P<0.05）。

3 討論

3.1 脂肪酶對(duì)羅非魚生長性能的影響

脂肪酶在畜禽方面的研究應(yīng)用表明，肉雞日糧中添加脂肪酶可顯著提高日增重，料肉比降低（葉慧等,2013）。水產(chǎn)方面，Troels等（2001）研究報(bào)道將脂肪酶添加于飼料中應(yīng)用于虹鱒和金頭笛鯛，結(jié)果表明，添加脂肪酶均可提高魚類對(duì)脂肪的利用率。Dierick等（2002）研究指出，畜禽和水產(chǎn)中添加脂肪酶一定程度上可以提高生長。豬日糧中添加0.1%微生物脂肪酶，日增重率顯著提高14.3%（P＜0.01），飼料轉(zhuǎn)化率提高5.4%。在對(duì)鰻魚的研究中，添加0.2%脂肪酶顯著提高鰻魚日增重28.53%～71.38%、飼料轉(zhuǎn)化率提高16.90%～26.99%，餌料系數(shù)降低14.69%～20.98%。王國霞等（2017）研究結(jié)果顯示，在低蛋白高脂肪日糧中添加脂肪酶，花鱸生長性能有所降低。Liu等（2016）在低蛋白高脂肪中適量的脂肪酶（1193 U/kg，2560 U/kg），草魚的生長性能和腸道免疫力得到提高。谷金皇等（2010）研究表明，添加100、300、500 mg/kg脂肪酶組分別比對(duì)照組增重率提高3.86%（P＞0.05）、9.29%（P＜0.05）、6.75%（P＞0.05），飼料系數(shù)分別降低3.17%(P＞0.05)、6.35%(P＜0.05）、5.29%（P＞0.05）。Silva等（2007）在大蓋巨脂鯉日糧中添加0.2%脂肪酶，飼養(yǎng)期38d，較對(duì)照組增重率提高55.1%（P＜0.05）。Nunes等(2006)在巨骨舌魚(Arapaimagigas)日糧中添加0、0.05%、0.1%、0.2%脂肪酶，增重率提高29.3%、14.88%、65.9%，蛋白質(zhì)效率也有不同程度提高。本試驗(yàn)結(jié)果顯示：在羅非魚基礎(chǔ)日糧中添加不同水平脂肪酶，均可提高增重率，當(dāng)添加水平為100、200、400 g/t時(shí)，增重率顯著高于對(duì)照組，且FCR均有不同程度降低，差異不顯著（P＞0.05）。與之前的研究報(bào)道的結(jié)果相一致，但是也有相關(guān)研究指出，添加脂肪酶并不一定可以改善生長性能。X.Meng等（2004）在小麥基礎(chǔ)日糧中添加脂肪源、糖酶、脂肪酶，結(jié)果發(fā)現(xiàn)添加脂肪酶對(duì)肉雞的生長和養(yǎng)分的利用率均無顯著提高。Martin等（1998）在含米糠的家禽飼料中混合添加溶血卵磷脂和脂肪酶，生長性能并未得到改善。

3.2 脂肪酶對(duì)羅非魚形體指數(shù)的影響

肥滿度和形體指數(shù)常作為衡量魚類經(jīng)濟(jì)價(jià)值的重要指標(biāo)之一。甘輝等（2009）研究指出，奧尼羅非魚幼魚的肥滿度隨飼料脂肪水平升高呈先上升后下降的變化趨勢，且在飼料脂肪水平達(dá)到4%時(shí)最高，吉富羅非魚的肥滿度在飼料脂肪水平為5.69%時(shí)達(dá)最高，但當(dāng)飼料脂肪水平為5.69%～9.64%時(shí)無明顯差異。而臟體比常用來評(píng)價(jià)動(dòng)物攝入能量的分配狀況，肝體比用來衡量試驗(yàn)過程中肝臟功能的好壞。添加脂肪酶可促進(jìn)魚類對(duì)脂肪的利用，減少脂肪過度沉積，提高肥滿度，降低臟體比和肝體比。朱龍等（2017）研究指出，添加膽汁酸作為乳化劑可顯著提高肥滿度（P＜0.05），可顯著降低臟體比、肝體比和脂肪沉積率（P＜0.05）。這說明膽汁酸和脂肪酶均可作為乳化劑，可改善加州鱸的營養(yǎng)狀況，減少內(nèi)臟能量沉積，增加加州鱸的可使用的比例，提高其營養(yǎng)價(jià)值。原因可能是：膽汁酸作為乳化劑可改善動(dòng)物腸道和肝胰臟健康（梁鐵軍,2007），消化吸收功能強(qiáng)；其次，膽汁酸可促進(jìn)多余脂肪的分解，提高飼料脂肪利用率，減少脂肪在腹腔、肝臟組織中的不斷累積，從而達(dá)到改善酮體品質(zhì)的目的。但是也有些研究得到不同結(jié)果，Troels（2001）等研究在虹鱒飼料添加0.2%和0.02%微生物脂肪酶，僅魚體成分中單不飽和脂肪酸的含量得到提高，而生長性能、內(nèi)臟指數(shù)、肝胰臟指數(shù)和其他營養(yǎng)成分均無顯著影響。

3.3 脂肪酶對(duì)羅非魚血清生化的影響

血液中的TG、TC、LDL-C和HDL-C等水平的變化，可以反映出機(jī)體的脂類代謝狀況和健康水平(鄒思明,2005)。血清中TG和TC水平是反映肝臟脂肪代謝的重要指標(biāo)(Krajnovic等,1992)，血清中LDL-C水平升高，HDL-C水平下降，有利于清除組織和血清中膽固醇（王清濱,2014）。本試驗(yàn)中添加脂肪酶后血 清 中 TG、LDL-C及HDL-C/LDL-C水平降低，表明脂肪酶在一定程度上可降低羅非魚油脂水平，這與飼料膽汁酸降低大菱鲆血清中TG、TC、LDL-C和HDL-C的水平（孫建珍,2014），以及草魚血清中TC和HDL-C的水平的結(jié)果類似（陳昊杰,2016）。這表明，添加脂肪酶可加強(qiáng)羅非魚的脂肪代謝，加強(qiáng)脂肪動(dòng)員，促進(jìn)機(jī)體對(duì)脂肪的利用，抑制脂肪過度沉積，促進(jìn)機(jī)體對(duì)脂肪的利用，從而降低了血液中TG、LDL-C含量。葉慧等（2013）等研究指出，添加脂肪酶可以降低后期黃羽肉公雞血清中總膽固醇、低密度脂蛋白膽固醇和高密度脂蛋白膽固醇的含量。谷金皇等（2010）研究指出，添加不同劑量脂肪酶可降低血清TG、TC、LDL-C含量，其中添加100、300、500 mg/kg組差異顯著（P＜0.05），300 mg/kg組的血清TG、LDL-C含量最低（P＜0.05）。蘇繼影（2006）研究發(fā)現(xiàn)，添加脂肪酶可提高肝臟丙酮含量，促進(jìn)肝臟進(jìn)行脂肪代謝。

血清轉(zhuǎn)氨酶是反映肝功能的主要敏感指標(biāo)之一，血清GOT升高，說明肝細(xì)胞受到損傷的可能性增加，血清GPT升高意味著肝臟發(fā)生炎癥的可能性增加（劉含亮等,2012）。谷金皇等（2010）研究結(jié)果顯示，與對(duì)照組比較，添加500 mg/kg脂肪酶GOT和GPT顯著降低（P＜0.05），可能原因：添加脂肪酶可能主要通過促進(jìn)肝臟脂類代謝實(shí)現(xiàn)，可一定程度上提高魚體的非特異性免疫功能。王國霞等（2017）研究結(jié)果表明，在花鱸低脂飼料中添加脂肪酶后，血清GOT活性顯著降低，血清抗氧化能力升高，分析可能的原因是：脂肪消化產(chǎn)生脂肪酸，適宜脂肪酸利于魚的生長和機(jī)體健康，但是一旦產(chǎn)生過量脂肪酸，會(huì)引起魚體的炎癥反應(yīng)，導(dǎo)致抗氧化指標(biāo)升高。

3.4 脂肪酶對(duì)羅非魚免疫指標(biāo)的影響

SOD可將超氧陰離子（O2-）歧化為過氧化氫（H2O2）和氧氣(O2)，從而避免自由基對(duì)機(jī)體造成的氧化損傷（Fang Y Z等,2002）。溶菌酶是吞噬細(xì)胞殺菌的物質(zhì)基礎(chǔ)，主要針對(duì)革蘭氏陽性菌發(fā)揮作用，溶菌酶活力越大，其溶解細(xì)胞的能力越強(qiáng)。IgM是動(dòng)物機(jī)體發(fā)育過程中最早合成和分泌的抗體。補(bǔ)體系統(tǒng)中的C3是抗體的補(bǔ)充成分，參與機(jī)體的非特異性免疫反應(yīng)。本試驗(yàn)結(jié)果顯示：羅非魚低脂日糧中增加不同水平脂肪酶，均可一定程度提高CAT、SOD、溶菌酶、補(bǔ)體及IgM水平，與高脂日糧水平差異不顯著（P＞0.05）。這說明草魚中添加脂肪酶可一定程度提高免疫特性，可促進(jìn)肝臟脂類代謝，在一定程度上提高魚體的免疫功能，減少對(duì)肝臟的損壞。這與部分學(xué)者研究一致。谷金皇等（2010）試驗(yàn)結(jié)果顯示，瓦氏黃顙魚中添加脂肪酶后，溶菌酶、SOD活性均顯著增強(qiáng)（P＜0.05）。趙盼月（2019）研究指出，在歐洲鰻鱺幼魚飼料中添加膽汁酸作為乳化劑可提高血清中IgM和C3的水平，說明膽汁酸可提高機(jī)體免疫功能，分析可能的原因是：膽汁酸和脂肪酶同作為分解脂肪類的物質(zhì)，可提高機(jī)體免疫功能，及肝臟抗氧化能力，同時(shí)降低機(jī)體內(nèi)對(duì)細(xì)胞內(nèi)毒素的吸收。

4 結(jié)論

羅非魚低脂肪日糧中添加不同水平脂肪酶，可改善生長性能及降低肝體指數(shù)。其中，脂肪酶添加量為100 g/t時(shí)，增重率最高，飼料系數(shù)最低；添加量為200 g/t時(shí)，對(duì)羅非魚臟體比和肝體比的改善作用最明顯。本試驗(yàn)條件下，在15g左右幼魚低脂日糧中添加脂肪酶100～200 g/t對(duì)羅非魚生長性能、肝體指數(shù)及血清生化、免疫指標(biāo)的改善效果最佳。