邱 勇 郭云膠 楊 琦,2 李兆云 楊新周,2*

1.德宏師范高等專(zhuān)科學(xué)校民族醫(yī)藥研究所，云南 芒市 678400；2.德宏師范高等專(zhuān)科學(xué)校理工學(xué)院，云南 芒市 678400

金環(huán)胡蜂(VespamandariniaSmith)為胡蜂科(Vespidae)胡蜂屬(Vespa)中體型最大、性情兇猛的捕食性肉食昆蟲(chóng)，俗稱(chēng)“虎頭蜂”[1]，也稱(chēng)中華大虎頭蜂、斑胡蜂、桃胡蜂、人頭蜂等。其幼蟲(chóng)、全體、蜂毒及蜂巢均可入藥，藥材名大黃蜂(全體)、大黃蜂子(幼蟲(chóng))、露蜂房(蜂巢)，主治風(fēng)濕痹痛，是常見(jiàn)民間中藥[2]。金環(huán)胡蜂泡酒制成的蜂毒酒能夠祛風(fēng)濕，治急性和慢性風(fēng)濕痛以及風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎，與其幼蟲(chóng)(大黃蜂子)功效相同[3-4]，在中國(guó)民間有著悠久的使用歷史。

現(xiàn)代研究表明，中藥中無(wú)機(jī)成分均與療效有著密切的關(guān)系，中藥中無(wú)機(jī)元素是生物體內(nèi)參與和調(diào)節(jié)代謝的必需元素，能與生物體內(nèi)含氮、氧、硫的配體形成配位鍵，協(xié)調(diào)體內(nèi)物質(zhì)平衡，對(duì)藥效發(fā)揮具有積極的協(xié)同作用或拮抗作用[5-7]。此外重金屬及有害元素是中藥材進(jìn)出口的重要檢測(cè)指標(biāo)之一，準(zhǔn)確測(cè)定中藥材中重金屬含量可為中藥材生產(chǎn)中的質(zhì)量控制和臨床中的用藥安全提供科學(xué)依據(jù)[7-8]。

目前對(duì)金環(huán)胡蜂的研究主要集中于藥理藥效、DNA 條形碼鑒別等方面的研究[9]。本實(shí)驗(yàn)采用微波消解-ICP法測(cè)定云南不同產(chǎn)區(qū)金環(huán)胡蜂中的無(wú)機(jī)元素，制作金環(huán)胡蜂無(wú)機(jī)元素指紋圖譜，對(duì)金環(huán)胡蜂無(wú)機(jī)元素含量相關(guān)性分析。為金環(huán)胡蜂無(wú)機(jī)元素方面的質(zhì)量特征研究提供參考，為金環(huán)胡蜂質(zhì)量控制研究提供新的依據(jù)。

1 儀器與材料

1.1 儀器 7200電感耦合等離子體光譜儀(德國(guó)熱電公司)；MARS6微波消解儀(CEM公司)，AL204梅特勒電子分析天平；AFS -9530雙通道原子熒光光度計(jì)(北京海光儀器有限公司), Milli-Q純水儀。

1.2 試劑 單元素標(biāo)準(zhǔn)溶液(GSB G62027-903301，國(guó)家鋼鐵材料測(cè)試中心鋼鐵研究總院)；70%硝酸(MOS級(jí), 天津市風(fēng)船化學(xué)試劑科技有限公司)，過(guò)氧化氫(30%水溶液，CMOS，國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司)。

1.3 樣品信息及制備 實(shí)驗(yàn)樣品來(lái)自云南省14個(gè)不同地區(qū)，所有樣品經(jīng)德宏師范高等專(zhuān)科學(xué)校郭云膠教授鑒定胡蜂科金環(huán)胡蜂(VespamandariniaSmith)。各樣品信息如表1所示。收集樣品后，低溫冷凍。

表1 樣品信息

2 方法與結(jié)果

2.1 樣品溶液制備 精確稱(chēng)量0.3 g均質(zhì)后的金環(huán)胡蜂于消解罐內(nèi)，加入8 mL硝酸，100 ℃預(yù)消解 20 min，置于微波消解儀中，按照升溫程序(10 min升至120 ℃，保持5 min，10 min升至150 ℃，保持5 min，10 min升至185 ℃，保持35 min)進(jìn)行消解，待冷卻后取出，100 ℃趕酸1 h，然后用超純水定容25.00 mL，利用ICP法測(cè)定。其中測(cè)定砷元素樣品溶液，待冷卻后取出，150 ℃下將酸趕完至約1 mL，用1 mol/L鹽酸定容至22.5 mL，加入2.5 mL 50 g/L硫脲-抗壞血酸，0.5 h后利用原子熒光法測(cè)定。

2.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線制備

表2 20種無(wú)機(jī)元素線性回歸方程

表2 20種無(wú)機(jī)元素線性回歸方程

2.3 方法學(xué)考察

2.3.1 精密度 取同一份混合標(biāo)準(zhǔn)品溶液連續(xù)測(cè)定6次，測(cè)得各元素RSD為0.05%～1.26%，表明儀器精密度良好。

2.3.2 重復(fù)性 取1號(hào)樣品，通過(guò)做3組平行實(shí)驗(yàn)，采用檢測(cè)平均結(jié)果計(jì)算三組間的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差，通過(guò)計(jì)算得出，三組間的組間精密度為0.02%～1.14%之間，說(shuō)明方法偏差較小。

2.3.3 穩(wěn)定性 取1號(hào)樣品，按照2.1進(jìn)行制備樣品，0、2、4、6、8、16、24 h測(cè)定樣品溶液中20種金屬元素，20種金屬元素RSD為0.1～5.56%之間，表明在24 h之內(nèi)元素穩(wěn)定。

2.3.4 方法回收率 以1號(hào)樣品進(jìn)行加標(biāo)回收率實(shí)驗(yàn)，方法回收率為平行測(cè)定3次的平均值。結(jié)果樣品加標(biāo)回收率均在80%～120%之間，方法準(zhǔn)確度好，符合中藥材中元素含量的定要求。

2.4 不同產(chǎn)地金環(huán)胡蜂金屬元素的測(cè)定結(jié)果及分析 對(duì)不同產(chǎn)區(qū)的金環(huán)胡蜂中20種金屬元素進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果見(jiàn)表3。從表3中可以看出，金環(huán)胡蜂中Ca、K、Mg、Na、P含量較大，20種無(wú)機(jī)金屬元素種P含量大，為2507.1629 mg/kg，Hg含量最低，為0.0107 mg/kg。許多產(chǎn)區(qū)胡蜂中B、Cd、Pb元素未檢出。2020版藥典對(duì)中藥材中有害金屬元素做了規(guī)定，Pb、Cd、As、Hg、Cu不能超過(guò)5、1、2、0.2、20 mg/kg，14個(gè)不同產(chǎn)區(qū)金環(huán)胡蜂中Pb、Cd、As、Hg、Cu含量均為超過(guò)中國(guó)藥典限定值，說(shuō)明金環(huán)胡蜂中有害金屬元素符合國(guó)家藥典標(biāo)準(zhǔn)要求。20種金屬元素中Sr元素變異系數(shù)最大，說(shuō)明不同產(chǎn)區(qū)金環(huán)胡蜂中Sr元素波動(dòng)較大，Ca元素變異系數(shù)最小，說(shuō)明不同產(chǎn)區(qū)金環(huán)胡蜂中Ca元素波動(dòng)較小。從圖1中可以看出，金環(huán)胡蜂中P元素含量較高，占比47.12%、K元素含量占比25.05%、Na元素含量占比9.29%、Mg元素含量占比6.23%、Ca元素含量占比4.63,其余元素占比7.68%。說(shuō)明金環(huán)胡蜂中含有豐富的營(yíng)養(yǎng)元素。

表3 鮮胡蜂中金屬元素測(cè)定結(jié)果 (mg/kg)

表3 鮮胡蜂中金屬元素測(cè)定結(jié)果 (mg/kg)

圖1 金環(huán)胡蜂無(wú)機(jī)元素占比分析

2.5 金環(huán)胡蜂無(wú)機(jī)元素指紋圖譜建立 金環(huán)胡蜂中20種無(wú)機(jī)元素含量數(shù)量級(jí)別相差較大。為了更能準(zhǔn)確的繪制指紋圖譜，將部分元素含量進(jìn)行擴(kuò)大或縮小至同一數(shù)量級(jí)，其中B、 Cu、Ti、擴(kuò)大10倍，K、P縮小10倍，Ba、Ni、Sr擴(kuò)大100倍，V、Pb、As擴(kuò)大1000倍、Hg擴(kuò)大10000倍，按照20種無(wú)機(jī)元素原子序數(shù)順序，以元素為橫坐標(biāo)，元素含量為縱坐標(biāo)繪制金環(huán)胡蜂無(wú)機(jī)元素指紋圖譜，如圖2所示?？梢?jiàn)不同產(chǎn)區(qū)金環(huán)胡蜂金屬元素含量存在差異，但從整體看其無(wú)機(jī)元素含量按原子序數(shù)順序呈現(xiàn)相似的分布態(tài)勢(shì)。 從圖2中看出，金環(huán)胡蜂無(wú)機(jī)元素譜具有較強(qiáng)的特征性與一致性，生成的無(wú)機(jī)元素指紋圖譜可為金環(huán)胡蜂的鑒別提供一定的的參考依據(jù)。

圖2 金環(huán)胡蜂無(wú)機(jī)元素指紋圖譜

2.6 金環(huán)胡蜂無(wú)機(jī)元素含量相關(guān)性分析 金環(huán)胡蜂無(wú)機(jī)金屬元素含量相關(guān)性見(jiàn)表4，結(jié)果顯示，金環(huán)胡蜂中16對(duì)金屬元素呈顯著正相關(guān)(P<0.01)，10對(duì)元素呈正相關(guān)(P<0.05)，正相關(guān)表明金環(huán)胡蜂體內(nèi)無(wú)機(jī)金屬元素積累過(guò)程相互協(xié)同。金環(huán)胡蜂無(wú)機(jī)元素含量相關(guān)性分析，可探討出其在生長(zhǎng)過(guò)程中各元素的積累的協(xié)同作用，可為進(jìn)一步開(kāi)展金環(huán)胡蜂生長(zhǎng)發(fā)育過(guò)程中飼養(yǎng)機(jī)制調(diào)控提供有益參考。

表4 金環(huán)胡蜂無(wú)機(jī)元素含量相關(guān)性分析

3 結(jié)論

實(shí)驗(yàn)采用ICP法分析測(cè)14個(gè)不同產(chǎn)區(qū)金環(huán)胡蜂中20種無(wú)機(jī)元素含量，建立金環(huán)胡蜂無(wú)機(jī)元素指紋圖譜。結(jié)果顯示金環(huán)胡蜂中金屬元素種類(lèi)豐富，含有很多有利的微量元素，無(wú)機(jī)元素以P、K、Na、Mg、Ca為主，含量最高的是P，其次為K、Na、Mg、Ca，5種元素占測(cè)定總元素的92.32%。通過(guò)實(shí)驗(yàn)得出，不同產(chǎn)區(qū)金環(huán)胡蜂金屬元素含量存在差異，可能與金環(huán)胡蜂生活環(huán)境(海拔、氣候)、食物種類(lèi)、金屬元素在胡蜂體內(nèi)積累規(guī)律有關(guān)。14個(gè)不同產(chǎn)區(qū)金環(huán)胡蜂中Pb、Cd、As、Hg、Cu含量均未超過(guò)中國(guó)藥典限定值，說(shuō)明金環(huán)胡蜂中有害金屬元素符合國(guó)家藥典標(biāo)準(zhǔn)要求。通過(guò)金屬元素含量分析，建立金環(huán)胡蜂無(wú)機(jī)元素指紋圖譜，可為金環(huán)胡蜂的鑒別提供一定的的參考依據(jù)。