阮正英 范廣民 蔡小波 曹學全 陳崇陽

10 號染色體上缺失的磷酸酶及張力蛋白同源基因（phosphatase and tensin homolog deleted on chromosome ten，PTEN）是迄今首個被發(fā)現(xiàn)的具有雙特異性磷酸酶活性的抑癌基因，目前被認為是評價腫瘤預后的重要生物學行為指標[1]，PTEN 的突變或缺失與消化道、前列腺、腦組織等多種腫瘤的增殖、存活、基因穩(wěn)定性、侵襲和轉(zhuǎn)移等密切相關[2-3]。PTEN 作用機制的研究，對腫瘤的診斷、預后評估及基因治療有著重大意義，成為目前的研究熱點之一[4]。研究發(fā)現(xiàn)，PTEN 去甲基化和再表達，可抑制胃癌細胞生長和轉(zhuǎn)移[5]。因此，以PTEN 為靶點可能是今后治療胃癌的新方法。本研究通過觀察胃癌組織PTEN 的表達，分析其與胃癌生物學的關系，報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集浙江省臺州市中西醫(yī)結合醫(yī)院和臺州市中心醫(yī)院2013 年1 月—2018 年12 月收治的胃腺癌患者（胃癌組）80 例。其中伴有淋巴結轉(zhuǎn)移38 例，TNM 分期為Ⅰ～Ⅱ及Ⅲ～Ⅳ各40 例，漿膜層及漿膜內(nèi)浸潤44 例，漿膜外浸潤36 例，高-中分化41 例，低分化39 例，合并有幽門螺旋桿菌（HP）感染45 例。取同期慢性胃炎組織（對照組）80 例。本研究獲得臺州市中西醫(yī)結合醫(yī)院醫(yī)學倫理委員會批準（倫理批件號：2015-007），并取得患者知情同意。

1.2 納入、排除標準 胃癌組納入標準：（1）符合《食管癌和胃癌治療指南》中胃癌診斷標準[6]，均行手術治療，并在術后經(jīng)病理確診為胃腺癌；（2）術前均未接受放療或化療；（3）所有標本來自醫(yī)院組織庫，臨床資料全面。

對照組納入標準：（1）符合慢性胃炎的診斷標準[7]，病理表現(xiàn)為萎縮性胃炎伴（或不伴）腸化，不包括病理表現(xiàn)為異型增生（上皮內(nèi)瘤變）；（2）胃鏡檢查前均未接受糖皮質(zhì)激素、免疫抑制劑、放療或化療。

排除標準：（1）有其他系統(tǒng)惡性腫瘤，如食管癌、肝癌等；（2）有嚴重的自身免疫性疾病，如甲狀腺功能亢進、糖尿病等；（3）術前用過免疫抑制劑。

1.3 主要試劑 兔抗人PTEN IgG 抗體購自英國biorbyt 公司（生產(chǎn)批號GR168302-1），二抗即用型DAB 染色免疫組化試劑盒購自北京中杉金橋生物技術有限公司（生產(chǎn)批號19021910）。免疫組化SP 法測定PTEN 的表達（工作濃度為1：100）。

1.4 免疫組化法測定PTEN 表達 SP 兩步法染色測定PTEN 的表達，胃組織石蠟切片常規(guī)脫蠟至水，3%H2O2滅活內(nèi)原性過氧化物酶，微波抗原，滴加PTEN 抗體，4℃冰箱過夜，室溫滴加二抗，二甲基聯(lián)苯胺（DAB）顯色，蘇木素復染。

1.5 PTEN 陽性結果判定標準[8]陽性細胞呈棕黃色表達，在200 倍光鏡下隨機選擇5 個視野觀察細胞著色情況，計數(shù)陽性例數(shù)及陽性率。陽性細胞數(shù)＜5%為陰性（-），≥5%為陽性（+），陽性率=陽性例數(shù)/總例數(shù)×100%。并對陽性細胞進行灰度掃描，采用免疫組化圖像分析系統(tǒng)，得出細胞染色的陽性強度，計算光密度（OD）值。

1.6 統(tǒng)計學方法 應用SPSS 16.0 統(tǒng)計軟件，計量資料以均數(shù)±標準差（）表示，兩組間比較采用成組資料t 檢驗，計數(shù)資料以例（率）表示，采用χ2檢驗，P＜0.05 為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 兩組一般資料比較 胃癌組男47 例，女33 例，年齡41～78（62.76±8.02）歲。對照組男42 例，女38例，年齡45～76（62.85±7.55）歲。兩組患者性別、年齡比較，差異無統(tǒng)計學意義（P 均＞0.05）。

2.2 PTEN 在胃組織表達水平 免疫組化結果顯示，陽性細胞多見表達于細胞的胞核中，少量表達于胞漿中。胃癌組PTEN 陽性率和陽性表達強度顯著低于對照組（P 均＜0.01），見表1、圖1。

表1 胃腺癌和慢性胃炎組織PTEN 表達水平比較

圖1 免疫組化法檢測胃組織PTEN 的表達（DAB 染色×200）

2.3 胃腺癌組織PTEN 表達水平與臨床病理特征的關系 胃癌組PTEN 陽性率和陽性表達強度在低分化、伴有淋巴結轉(zhuǎn)移的胃腺癌組織均分別顯著低于高-中分化、不伴有淋巴結轉(zhuǎn)移的胃腺癌組織（P＜0.05 或＜0.01）；漿膜外浸潤胃癌組織PTEN 的陽性表達強度顯著低于漿膜層及漿膜內(nèi)浸潤（P＜0.01），兩組陽性率表達差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）；TNM 分期為Ⅲ～Ⅳ組胃癌組織的PTEN 陽性率顯著低于TNM 分期為Ⅰ～Ⅱ組（P＜0.05），兩組陽性表達強度差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）；不同性別、年齡胃腺癌組織PTEN 陽性率和陽性表達強度比較，差異均無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。見表2。

表2 胃癌組織PTEN 表達水平與臨床病理特征的關系

2.4 HP 感染胃癌組PTEN 表達水平 HP 陽性感染胃癌組PTEN 陽性率及陽性表達強度低于HP 陰性感染胃癌組（P＜0.05 或P＜0.01），見表3。

3 討論

PTEN 是1997 年分離鑒定的一種新穎的抑癌基因，基因位于染色體10q23.3，全長200kb，具有與酪氨酸磷酸酯酶相似的功能，在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展中起重要作用。與抑癌功能相關的結構域主要是氨基端的磷酸酶結構域、脂質(zhì)結合c2 結構域和羧基端結構域，部分機制可能是通過PI3K/PTEN/Akt/mTOR 信號通路，參與胃癌細胞增殖、凋亡、血管生成、侵襲與轉(zhuǎn)移等過程[9]。過表達轉(zhuǎn)錄因子EYA1 可促進胃癌細胞株SGC-7901 PTEN 的表達、抑制PI3K/Akt 通路的激活，抑制細胞胃癌細胞株的增殖、遷移和侵襲能力，抑制細胞凋亡[10]。通過改變miR-590-5p 的表達水平可以上調(diào)或下調(diào)PTEN 的表達，從而提高胃腺癌細胞對順鉑的敏感性，起到治療胃癌的作用[11]。

表3 HP 感染胃腺癌組織PTEN 表達水平

本研究發(fā)現(xiàn)，陽性細胞多見表達于細胞的胞核中，少量表達于細胞的胞漿中。提示PTEN 可通過細胞質(zhì)及細胞核部位發(fā)揮其病理生理功能[12]。研究還發(fā)現(xiàn)，胃癌組織PTEN 的表達強度低于慢性胃炎組織，提示可能由于PTEN 的表達下降，其抑癌作用減弱，降低了對癌細胞生長的抑制作用，從而間接促進癌細胞的生長[13]。

本研究分析了PTEN 與胃癌患者性別、年齡、腫瘤分化程度、淋巴結轉(zhuǎn)移、浸潤程度、TNM 分期的相關性，結果顯示，在低分化的胃癌組織中PTEN 的表達強度低于高-中分化的胃癌組織，提示隨著胃癌細胞的分化程度降低PTEN 的表達水平也隨之降低；同時也發(fā)現(xiàn)，在伴有淋巴結轉(zhuǎn)移的胃癌組織PTEN表達強度也降低，提示PTEN 與不良預后有關，與楊銘等[14]研究相似。本研究結果還顯示，有漿膜外浸潤時PTEN 的陽性表達強度降低，而在TNM 分期為Ⅲ～Ⅳ時PTEN 的陽性率下降。表明在有漿膜外浸潤或TNM 分期為Ⅲ～Ⅳ時，PTEN 呈現(xiàn)低表達，提示隨著疾病生物學惡性程度增加，PTEN 水平下降，其抑癌作用下降。但也有研究認為，PTEN 表達水平與胃癌分化程度和浸潤深度無關，而與臟器轉(zhuǎn)移相關[15]，支持PTEN 與腫瘤的不良預后有關。本研究發(fā)現(xiàn)，HP感染胃癌組織PTEN 表達水平低于無HP 感染組，表明HP 感染后可能與PTEN 的表達水平降低有關，推測HP 感染誘發(fā)胃癌發(fā)生可能部分通過降低PTEN抑癌的機制[16]。年齡≥60 歲與＜60 歲胃癌患者PTEN表達水平無差異，男性與女性PTEN 表達水平也無差異，提示胃癌患者PTEN 表達水平不受患者性別、年齡影響，與庹敏和童仕倫[17]研究結果相似。

綜上所述，胃腺癌組織PTEN 表達降低，與胃癌組織低分化、伴淋巴結轉(zhuǎn)移、漿膜外浸潤、TNM 分期Ⅲ～Ⅳ期及HP 感染陽性等生物學特性有關，預示胃癌不良預后。