王立，李沐謠，孫斯桐，張文君，呂江唯，崔聞宇（哈爾濱商業(yè)大學藥學院，哈爾濱 150076）

丹酚酸B 是傳統(tǒng)的活血化瘀中藥丹參中水溶性成分——丹參酚酸中含量最豐富、生物活性最強的化合物[1-2]。藥理研究表明丹酚酸B 具有抗氧化、清除自由基、抑制血小板聚集和血栓形成、改善血流量、調(diào)節(jié)脂質(zhì)代謝、抑制細胞凋亡、抗纖維化等多種活性[3]，對心、腦、肝、肺等器官均具有重要的藥理作用[4-5]。目前主要用于心血管疾病和肝臟疾病的治療，具有效價高、引發(fā)過敏反應(yīng)概率小等特點[6]。丹酚酸B 在胃腸道中不穩(wěn)定、肝臟首過效應(yīng)大等限制了其藥物的發(fā)展[7-9]。

基于滲透壓原理的控釋膠囊，是以半透膜內(nèi)外滲透壓差為主要釋藥動力的緩控釋固體制劑[10]，具有零級釋藥特征，不被外部環(huán)境（胃腸道蠕動、胃內(nèi)食物、釋放介質(zhì)pH 值）所影響，體內(nèi)外釋藥相關(guān)性良好，能降低由血藥濃度波動引起的不良反應(yīng)，減少服藥次數(shù)，提高患者的依從性，并且能夠增加難溶性藥物的溶解度，提高生物利用度[11]。基于滲透壓原理的微孔控釋膠囊是將膠囊劑與微孔控釋制劑相結(jié)合而產(chǎn)生的[12]，其藥物選擇較靈活，制備及處方工藝簡單，適合工業(yè)化生產(chǎn)[13-14]。

為滿足心腦血管疾病患者的用藥需求，以及改善丹酚酸B 存在的問題，本文以丹酚酸B 為模型藥，制備控釋膠囊，優(yōu)化膠囊殼和內(nèi)容物的制備工藝及處方。

1 試藥

丹酚酸B 原料藥（批號：20180609，西安生物科技有限公司）；丹酚酸B 對照品（批號：P24A10F86797，含量≥98%，上海源葉生物科技有限公司）；鹽酸（批號：20140925，北京生化精細化學品有限責任公司）；磷酸二氫鉀（批號：20170714，天津市天力化學試劑有限公司）；醋酸纖維素（CA，批號：ZY131128，乙酰：40%，羥基：2%，上海紫一試劑廠）；丙酮（批號：20190324，天津市科密歐化學試劑有限公司）；聚乙二醇400（批號：20160802，無錫市亞泰聯(lián)合化工有限公司）；聚乙二醇2000（批號：103723）、聚乙二醇4000（批號：103724）、聚乙二醇6000（批號：103725）、檸檬酸三乙酯（TEC，批號：106153）、檸檬酸三丁酯（TBC，批號：105179）（阿拉丁化學試劑有限公司）；鄰苯二甲酸二乙酯（DEP，批號：20111123，天津市博迪化工有限公司）；鄰苯二甲酸二丁酯（DBP，批號：20160830，天津市富宇精細化工有限公司）；淀粉（批號：20170709）、微晶纖維素（MCC，批號：20130311）、氯化鈉（批號：20160506）、乳糖（批號：20160608）、羧甲基纖維素鈉（批號：20170323）（天津市光復(fù)精細化工研究所）；蔗糖（批號：20071128，天津市東麗區(qū)天大化學試劑廠）。

2 方法與結(jié)果

2.1 含量測定

2.1.1 色譜條件 色譜柱：SHARPSIL-U C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動相：乙腈∶1.5%甲酸水（30∶70，V/V）；檢測波長：286 nm；柱溫：30℃；流速：1.0 mL·min－1；進樣量：20 μL。

2.1.2 方法學驗證試驗 精密稱取丹酚酸B 對照品5.0 mg，置于10 mL 的量瓶中，加流動相溶解并定容。取續(xù)濾液稀釋至適當質(zhì)量濃度，進樣測定，記錄峰面積A，以質(zhì)量濃度C為橫坐標，繪制標準曲線，其在水溶液中標準曲線方程為A＝4.8727×104C－2.26853×105，r＝0.9995，線性范圍為15～250 μg·mL－1。本法日內(nèi)RSD為1.2%（n＝5），日間RSD為1.7%（n＝5）；回收率在98.8%～100.2%，RSD為1.5%（n＝6）；24 h 內(nèi)穩(wěn)定性的RSD為1.7%（n＝9），滿足測定要求。

2.2 釋放度測定

2.2.1 測定波長的確定 稱取適量丹酚酸B 對照品、處方內(nèi)空白輔料，分別用蒸餾水配制成一定濃度的溶液，在200～400 nm 內(nèi)紫外掃描，丹酚酸B 在286 nm 處有最大吸收，空白輔料無干擾，故選擇286 nm 為丹酚酸B 的檢測波長。

2.2.2 線性關(guān)系考察 精密稱取丹酚酸B 對照品，配制成5、10、20、30 和40 μg·mL－1系列質(zhì)量濃度的對照品溶液。分別在286 nm 處測定吸光度，以濃度C為橫坐標，吸光度A為縱坐標，繪制標準曲線。丹酚酸B 對照品在水、pH 1.2 鹽酸緩沖溶液和pH 6.8 磷酸鹽緩沖溶液中的標準曲線方程分別為A＝0.0137C＋0.0147，r＝0.9996；A＝0.0112C＋0.0095，r＝0.9999；A＝0.0221C－0.0106，r＝0.9999，線性范圍均為5～40 μg·mL－1。

2.2.3 釋放度測定方法 取同一批丹酚酸B 控釋膠囊，按照2015年版《中國藥典》溶出度與釋放度的測定法，以900 mL 的去離子水為溶出介質(zhì)，溫度為（37±0.5）℃，轉(zhuǎn)速為100 r·min－1，在第2、4、6、8、10、12 h 取樣，用0.45 μm 濾膜濾過，測定其在286 nm 波長處的吸光度，代入標準曲線計算丹酚酸B 的累積釋放度。

2.3 丹酚酸B 微孔型控釋膠囊的制備

2.3.1 囊殼的制備 本實驗采用蘸膠法，將成膜材料CA、增塑劑TEC 加入丙酮溶液中，加熱攪拌成均勻膠液。將0 號明膠膠囊體，蘸膠一次后，迅速裝入恒速旋轉(zhuǎn)儀上，見圖1，使膠囊水平勻速旋轉(zhuǎn)，并將致孔劑PEG2000 均勻的噴灑在膠囊的表面。在室溫下干燥后，重復(fù)3 次。拔殼、切割、整理，即得控釋膠囊殼（見圖2），其電鏡圖（見圖3）與空膠囊殼電鏡圖（見圖4）對比可見，控釋膠囊殼內(nèi)部疏松多孔，能夠釋放藥物，故選擇此制備工藝。

圖1 工藝裝置圖Fig 1 Diagram of the device

圖2 蘸膠法制備工藝的膠囊殼圖Fig 2 Capsule shell diagram of the dipping process

圖3 蘸膠法制備工藝的膠囊電鏡掃描圖Fig 3 Electron microscopy scan of capsules prepared by dipping method

圖4 空膠囊殼的電鏡掃描圖Fig 4 Electron microscopy scan of capsule shell

2.3.2 囊芯的制備 將20 mg 丹酚酸B 及滲透壓活性物質(zhì)NaCl、阻滯劑CMC-Na、稀釋劑MCC分別過80 目篩，按各處方量混合均勻，壓成大片后粉碎，20 目制粒。加入1%滑石粉，即為膠囊內(nèi)容物。

2.4 各因素對藥物體外釋放度的影響

2.4.1 CA 濃度 選擇6%、7%、8%濃度的CA，調(diào)整囊殼厚度?？疾祗w外累積釋放度，3 種濃度CA與零級方程的擬合度分別為0.960、0.997、0.987。CA 濃度為6%和7%時，累積釋放度均較高，CA濃度為8%時，膠囊殼過厚，影響藥物釋放。但CA濃度為6%時，釋放過快且存在突釋，r（7%）＞r（8%）＞r（6%），故本試驗確定CA 濃度為7%。

2.4.2 致孔劑種類及用量 選擇PEG2000、PEG4000、PEG6000 作為致孔劑，考察體外累積釋放度，3種致死劑與零級方程的擬合度分別為0.997、0.991、0.981?？芍狿EG2000 零級擬合度最好，而PEG4000 和PEG6000 釋放速率過快（10 h 累積釋放度即達80%），故選用PEG2000 作為致孔劑。調(diào)整致孔劑PEG2000 的用量分別為5、10、15、20 mg，考察體外累積釋放度，其與零級方程的擬合度分別為0.994、0.998、0.988、0.954。可知用量為10 mg 時，累積釋放度與零級擬合度最好。當致孔劑用量較低，釋藥途徑不足，導(dǎo)致累積釋放度低；當致孔劑用量較大，釋藥過快，所以選擇致孔劑的用量為10 mg。

2.4.3 增塑劑種類及用量 選擇檸檬酸三乙酯（TEC）、檸檬酸三丁酯（TBC）、鄰苯二甲酸二乙酯（DEP）、鄰苯二甲酸二丁酯（DBP）和PEG4000 作為增塑劑，考察體外累積釋放度，各增塑劑與零級方程的擬合度分別為0.998、0.993、0.993、0.995、0.996。TEC 的累積釋放度較高，且零級擬合度最好，所以選擇TEC 作為膠囊殼的增塑劑。調(diào)整增塑劑的用量為10%、20%、30%，考察體外累積釋放度，與零級方程的擬合度分別為0.990、0.996、0.991。可見增塑劑用量為20%時累積釋放度較高，且r（20%）＞r（30%）＞r（10%），所以選擇增塑劑用量為20%。

2.4.4 稀釋劑種類的考察 選擇MCC、淀粉、MCC∶淀粉（1∶1）作為內(nèi)容物中的稀釋劑，考察體外累積釋放度，各稀釋劑與零級方程的擬合度分別為0.999、0.994、0.993，當MCC 為稀釋劑時，累積釋放度與零級擬合度最好，故選用MCC 為稀釋劑。根據(jù)前期研究發(fā)現(xiàn)稀釋劑用量影響很小，故確定其余處方用量后加入稀釋劑將內(nèi)容物定量至100 mg。

2.4.5 滲透壓活性物質(zhì)種類及用量的考察 將NaCl、乳糖、蔗糖、NaCl∶乳糖（1∶1）、NaCl∶蔗糖（1∶1）為滲透壓活性物質(zhì)，考察體外累積釋放度，各滲透壓活性物質(zhì)與零級方程擬合度分 別 為0.996、0.987、0.994、0.992、0.986。可見NaCl 的累積釋放度與零級擬合度最好，故選NaCl 為滲透壓活性物質(zhì)。調(diào)整滲透壓活性物質(zhì)NaCl 的用量分別為20、30、40 mg，考察體外累積釋放度，各用量與零級方程的擬合度分別為0.994、0.999、0.973。當用量為30 mg 時，累積釋放度與零級擬合度最好；當用量為40 mg 時，釋放過快。故選擇用量為30 mg。

2.4.6 阻滯劑種類及用量的考察 選擇CMC-Na、HPMC K4M 作為阻滯劑，考察體外累積釋放度，各阻滯劑與零級方程的擬合度分別為0.997、0.994。當CMC-Na 為阻滯劑時，制劑的累積釋放度與零級方程的擬合度最好，故選用CMC-Na 為阻滯劑。調(diào)整膠囊內(nèi)容物中的阻滯劑CMC-Na 的用量分別為2、4、6 mg，考察體外累積釋放度，各用量與零級方程的擬合度分別為0.997、0.995、0.993?？梢娪昧繛? mg 時，制劑的累積釋放度與零級方程的擬合度最好，所以選擇阻滯劑用量為2 mg。

2.5 最優(yōu)處方的確定與驗證

根據(jù)以上單因素考察結(jié)果，確定最優(yōu)處方為每粒膠囊CA 濃度7%，致孔劑PEG2000 用量10 mg，增塑劑TEC 20%，滲透壓活性物質(zhì)NaCl 用量30 mg，阻滯劑CMC-Na 用量2 mg，稀釋劑MCC用量48 mg，平均粒重0.132 99 g。按最優(yōu)處方制備3 批控釋膠囊進行累積釋放度測定，釋放曲線見圖5，可見12 h 累積釋放度可達90%，r分別為0.9913、0.9905、0.9918。累積釋放度與零級方程、一級方程、Higuchi 方程模型擬合情況見表1，其與零級方程擬合度較好，符合零級釋放規(guī)律。

圖5 驗證處方的釋放曲線Fig 5 Release profile of the verified prescription

表1 丹酚酸B 微孔控釋膠囊體外累積釋放度曲線的模型擬合(n ＝6)Tab 1 Model fitting of in vitro release profile salvianolic acid B microporous controlled-release capsules (n ＝6)

2.6 控釋膠囊釋放機制的考察

2.6.1 釋放介質(zhì)的滲透壓 以水、0.5、1.0 和1.5 mol·L－1NaCl 溶液為不同滲透壓的釋放介質(zhì)，考察藥物釋放行為，結(jié)果見圖6。制品在水中的釋放曲線與在 0.5、1 和1.5 mol·L－1氯化鈉中釋放曲線的f2值分別為56.38、36.53、24.26，在0.5 與1 mol·L－1氯化鈉中釋放曲線的f2值為47.27，在1 與1.5 mol·L－1氯化鈉中釋放曲線的f2值為41.93，在 0.5 與1.5 mol·L－1氯化鈉中釋放曲線的f2值為29.66。0.5 mol·L－1NaCl 與水為釋放介質(zhì)時，f2值＞50，釋放行為相似。隨著NaCl 濃度的增加，減緩了控釋膠囊釋的放速率，且不同NaCl 濃度之間釋藥行為存在差異。提示滲透壓與控釋膠囊中藥物的釋放密切相關(guān)。

圖6 滲透介質(zhì)對藥物釋放的影響（n ＝6）Fig 6 Effect of osmotic medium on the drug release（n ＝6）

2.6.2 擴散作用對釋放的影響 分別制備有、無滲透壓活性物質(zhì)為膠囊內(nèi)容物，灌裝于同一批次的膠囊殼內(nèi)，考察累積釋放度，釋放曲線f2值為26.13，說明滲透壓活性物質(zhì)對藥物的釋放影響較大。提示滲透壓的存在對擴散機制具有影響，可促進藥物的釋放。

2.6.3 釋藥途徑對藥物釋放的影響 將同一批次的膠囊殼以有、無致孔劑，分別裝入同一批次的膠囊內(nèi)容物，考察累積釋放度，f2值為16.13，表明有、無致孔劑對藥物的釋放影響很大。雖然CA 具有一定的滲透性，但膠囊殼有一定厚度。在控釋膠囊劑中致孔劑對藥物的釋放起重要作用，為丹酚酸B 藥物的釋放提供釋藥途徑。

2.6.4 溶出儀轉(zhuǎn)速 分別以不同轉(zhuǎn)速（80、100、120 r·min－1）進行體外累積釋放度試驗，考察轉(zhuǎn)速對藥物釋放的影響。轉(zhuǎn)速為80 與100 r·min－1的釋放曲線f2值為83.64；80 與120 r·min－1的釋放曲線f2值為72.14；100 與120 r·min－1的釋放曲線f2值為83.90，不同轉(zhuǎn)速的釋放曲線相似，說明藥物的釋放不受溶出環(huán)境影響。

2.6.5 釋放介質(zhì)的pH 值 分別以不同pH 值（水、pH 1.2 的HCl 溶液、pH 6.8 的PBS 緩沖溶液）的溶出介質(zhì)進行體外累積釋放度試驗，考察不同pH 值對藥物釋放的影響。在水與pH 1.2 的HCl 溶液中釋放曲線f2值為71.33，在水與pH 6.8的PBS 緩沖溶液中釋放曲線f2值為63.90，在pH 1.2 的HCl 溶液與pH 6.8 的PBS 緩沖溶液中釋放曲線f2值為82.44，不同pH 值的溶出介質(zhì)釋放曲線相似，說明藥物的釋放不受溶出環(huán)境影響。

3 討論

在膠囊殼的制備工藝中，膠囊殼需要較厚的殼體做支撐，致孔劑直接與膠液混勻制得的囊殼中致孔劑幾乎被包裹在內(nèi)膜中，形成的微小孔徑可能是CA 材料本身。模仿片劑包衣機原理，將致孔劑均勻地噴到膠囊殼的膠液表面。此試驗裝置為自制，存在一定誤差，日后需進一步優(yōu)化。通過對丹酚酸B 微孔控釋膠囊的釋放度影響因素試驗可知，釋放行為受致孔劑的用量以及滲透壓差的影響。由于膠囊殼較厚，CA 膜中形成的小孔不足以讓控釋膠囊釋放，故必須由滲透壓差做主導(dǎo)，致孔劑提供釋放途徑，才能促使藥物達到控釋效果。CA 分子量、取代度可能對釋放有一定影響，在接下來的研究中會對其進行進一步考察。

本課題制備的丹酚酸B 微孔控釋膠囊控釋效果良好，由于控釋制劑藥物的溶解性差異較大，可固定膠囊殼的制備工藝及處方，調(diào)節(jié)膠囊內(nèi)容物的處方，適用于不同溶解性質(zhì)的藥物。