馬向薇 楊明

胚胎停育是臨床上一種較常見的婦科疾病,該疾病主要與母體存在不利妊娠因素及孕卵缺陷等有關(guān),主要包括免疫因素、生殖道感染、遺傳因素以及激素水平異常等。其中,染色體異常是最常見的誘發(fā)因素。目前臨床對(duì)發(fā)生胚胎停育的孕婦進(jìn)行清宮術(shù)治療時(shí)獲取其胎兒絨毛組織,并開展染色體檢測(cè),能夠有效診斷患者自然流產(chǎn)的原因,由此能夠采取有效措施,避免再次發(fā)生流產(chǎn)［1］。本文選取本院收治的60 例自然流產(chǎn)患者開展本次試驗(yàn),旨在研究通過胚胎停育絨毛染色體分析確認(rèn)自然流產(chǎn)的發(fā)病原因。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取本院2018 年1 月～2020 年1 月期間收治的60 例自然流產(chǎn)患者開展本次試驗(yàn),所有患者均接受B 超診斷,診斷結(jié)果為“難免流產(chǎn)”及“胚胎停育”。本次研究已經(jīng)本院倫理委員會(huì)批準(zhǔn),全部患者均對(duì)本次研究知情,并簽署知情同意書?；颊吣挲g27～42 歲,平均年齡(32.5±4.4)歲；孕周5～12 周,平均孕周(7.3±2.2)周；其中初產(chǎn)婦27 例,經(jīng)產(chǎn)婦33 例。.

1.2 納入及排除標(biāo)準(zhǔn) 納入標(biāo)準(zhǔn)［2］：①全部患者均符合胚胎停育的臨床診斷標(biāo)準(zhǔn)；②患者能夠配合本次研究；③通過B 超檢查,結(jié)果為不能見到胚芽及無心管搏動(dòng)等。排除標(biāo)準(zhǔn)［3］：①存在嚴(yán)重臟器疾病患者；②存在嚴(yán)重感染患者；③存在遺傳性疾病患者。

1.3 方法 對(duì)患者進(jìn)行清宮術(shù)治療,進(jìn)行清宮術(shù)過程中獲取患者質(zhì)量較好的絨毛組織10～20 mg,在無菌條件下將絨毛組織放入一次性平皿中,通過含有過量雙抗的生理鹽水對(duì)絨毛組織進(jìn)行反復(fù)沖洗(≥2 次),徹底清除其中的血液,再將其置入15 ml 離心管中,在其中滴入10 滴1 ml 的無菌酶解液,通過37℃的溫水進(jìn)行10 min 水浴,檢驗(yàn)人員需要每2 分鐘混勻1 次,加入含血清培養(yǎng)基終止消化。將其靜置30 min 后取上清進(jìn)行10 min 離心處理,轉(zhuǎn)速為1500 轉(zhuǎn)。完成離心處理后,去上清后加入5 ml 含血清培養(yǎng)基,置入到37℃環(huán)境中進(jìn)行培養(yǎng)［4］。同時(shí),將取上清后剩下的組織懸液貼壁于培養(yǎng)瓶中,在其中加入5 ml 培養(yǎng)基后倒置,在37℃的環(huán)境中進(jìn)行培養(yǎng),2 h 后將其翻轉(zhuǎn)。3 d 后取出培養(yǎng)瓶,在顯微鏡下倒置并觀察絨毛組織貼壁生長的情況,在貼壁細(xì)胞克隆較大并且生長旺盛時(shí)對(duì)其進(jìn)行換液,同時(shí)開展原瓶傳代培養(yǎng)。培養(yǎng)1～2 d 后觀察細(xì)胞貼壁生長情況,在貼壁細(xì)胞分布及生長均較好,并且有較多圓亮的中期細(xì)胞時(shí)可加入秋水仙素,進(jìn)行收獲。然后分析成功培育染色體核型［5］。

1.4 觀察指標(biāo) 統(tǒng)計(jì)無菌絨毛培養(yǎng)情況,包括培養(yǎng)成功和失??；分析無菌絨毛培養(yǎng)失敗的原因；分析培養(yǎng)成功無菌絨毛中核型異常和核型正常情況,核型異常包括數(shù)目異常和結(jié)構(gòu)異常。

2 結(jié)果

對(duì)60 例自然流產(chǎn)患者的無菌絨毛進(jìn)行培養(yǎng)后,培養(yǎng)成功58 例(96.67%),失敗2 例(3.33%)。導(dǎo)致培養(yǎng)失敗的原因?yàn)榧?xì)胞不貼壁生長。通過對(duì)培養(yǎng)成功的58 例流產(chǎn)絨毛進(jìn)行分析,發(fā)現(xiàn)出現(xiàn)核型異常的34 例,核型正常的24 例。核型異常主要是數(shù)目異常(30 例)和結(jié)構(gòu)異常(4 例)。數(shù)目異常的核型主要包括單體(8 例)、三體(14 例)、復(fù)合三體(3 例)體、三倍體(2 例)及標(biāo)記染色體(3 例)；主要核型為：45、X 單體3 例,45、X、-14 單體1 例,45、XY、-16 單體1 例,46、XX、-20、+mar 單體1 例,46、XY、-20、+mar 單體1 例,46、X、+mar 單體1 例；2 三體1 例、4 三體1 例、14 三體1 例、15 三體1 例、16 三體1 例、17 三體1 例、18 三體1 例、22 三體1 例,10 三體2 例、13 三體2 例、21 三體2 例；48、XX、+10、+21 復(fù)合三體1 例,48、XX、+14、+21 復(fù)合三體1 例,48、XY、+2、+3 復(fù)合三體1 例；69、XXX 三倍體1 例,69、XXY 三倍體1 例；47、XY、+mar標(biāo)記染色體1 例,47、XX、+mar 標(biāo)記染色體2 例。結(jié)構(gòu)異常的核型主要包括：47、XY、14P-2 例；46、XX、+22 2 例。

3 討論

有研究資料顯示,近些年來由胚胎停育所導(dǎo)致的自然流產(chǎn)率呈現(xiàn)出逐年上升態(tài)勢(shì)。有研究人員通過開展細(xì)胞遺傳學(xué)核型分析后發(fā)現(xiàn),超過50%胚胎停育患者的絨毛標(biāo)本均存在細(xì)胞遺傳學(xué)異常的問題,因此,有必要對(duì)胚胎停育開展病因?qū)W研究,從而有效避免患者胚胎停育發(fā)生自然流產(chǎn)的問題。對(duì)胚胎停育采用絨毛染色體分析能夠有效判斷患者的發(fā)病原因。目前,開展絨毛細(xì)胞檢測(cè)的主要方法有直接法和培養(yǎng)法兩種［6］。前者的優(yōu)點(diǎn)在于簡單快捷,并且難以獲得數(shù)量合適的細(xì)胞,再加上獲取的染色體形態(tài)欠佳,難以有效開展嵌合體診斷及核型分析。通過培養(yǎng)方法可以獲得較多的細(xì)胞分裂,染色體形態(tài)也較為良好。在本次研究中,主要在B 超引導(dǎo)下對(duì)參與研究的患者行清宮術(shù),并獲取胎兒的絨毛組織進(jìn)行培養(yǎng),主要是通過消化培養(yǎng)法,通過對(duì)絨毛進(jìn)行仔細(xì)的挑選,并對(duì)其進(jìn)行貼壁培養(yǎng)、酶的消化及純化過程后可以更好的對(duì)胎兒絨毛滋養(yǎng)層細(xì)胞進(jìn)行收集和培養(yǎng),這樣對(duì)其進(jìn)行分析后就能夠更好反映胎兒染色體核型情況［7］。本次研究中通過對(duì)60 例自然流產(chǎn)患者的無菌絨毛進(jìn)行培養(yǎng)后,成功培養(yǎng)58 例 (96.67%),失敗2 例(3.33%)。導(dǎo)致失敗的原因?yàn)榧?xì)胞不貼壁生長。

而通過對(duì)培養(yǎng)成功的58 例流產(chǎn)絨毛進(jìn)行分析,發(fā)現(xiàn)其中出現(xiàn)核型異常的34 例(56.67%),核型正常的 24 例(43.33%)。核型異常主要是數(shù)目異常(30 例)和結(jié)構(gòu)異常(4 例)。數(shù)目異常的核型主要包括單體(8 例)、三體(14 例)、復(fù)合三體(3 例)、三倍體(2 例)及標(biāo)記染色體(3 例)。根據(jù)本次研究結(jié)果可以發(fā)現(xiàn)發(fā)生異常核型的幾率高達(dá)56.67%,這與國內(nèi)外的很多文獻(xiàn)報(bào)道資料相近。有很多相關(guān)文獻(xiàn)都有報(bào)道：超過50%的自然流產(chǎn)孕婦都存在染色體異常的問題。還有研究資料顯示,超過65%的人類胚胎會(huì)在著床前后出現(xiàn)死亡問題,這主要與染色體的非整倍體有關(guān)。這主要是孕婦在妊娠初期受精卵卵裂時(shí)發(fā)生染色體不分離的問題或者是雙親中某一方在配子形成時(shí)出現(xiàn)染色體不分離的問題,這種問題會(huì)造成胚胎的染色體減少一條或者是增多一條,也就是會(huì)形成單體性或者是三體性［8］。在本次研究中,染色體異常核型最多的是三體(14 例),其次是單體(8 例)。造成這一現(xiàn)象出現(xiàn)的主要原因就是生殖細(xì)胞在減數(shù)分離時(shí)很容易會(huì)發(fā)生染色體不分離問題,這種現(xiàn)象與很多學(xué)者的研究資料相符,然而對(duì)該現(xiàn)象出現(xiàn)的原因卻缺乏統(tǒng)一的結(jié)論。而三體并不一定會(huì)導(dǎo)致胚胎流產(chǎn),尤其是21 三體、18 三體及13 三體在活產(chǎn)兒身上均較常見,但是其他類型的染色體三體都會(huì)造成胚胎出現(xiàn)流產(chǎn)的問題。所以,胚胎染色體異常是導(dǎo)致早期自然流產(chǎn)最為常見的原因,而且通過本次研究結(jié)果還可發(fā)現(xiàn),異常核型中最主要的是數(shù)目異常。之所以會(huì)如此,可能是因?yàn)槿旧w數(shù)目異常的胚胎存在較大的遺傳缺陷,所以有著很高的致死性。

綜上所述,導(dǎo)致患者發(fā)生早期自然流產(chǎn)的關(guān)鍵因素為胚胎染色體異常,而通過開展胚胎停育絨毛染色體分析能夠有效確認(rèn)患者自然流產(chǎn)的原因,從而在孕婦下次妊娠時(shí)能夠采取有效措施預(yù)防流產(chǎn),具有臨床推廣價(jià)值。