夏敬勝，王倩，鄒吉利，蔡瑜，李穎

(武漢市第三醫(yī)院藥學(xué)部，武漢 430060)

2型糖尿病已成為嚴(yán)重危害健康的疾病之一[1-2]，其受年齡、遺傳、吸煙等多種因素影響[3]。研究發(fā)現(xiàn)2型糖尿病與腸道菌群密切相關(guān)。腸道內(nèi)菌群紊亂可導(dǎo)致宿主體質(zhì)量增加，胰島素敏感性降低及全身系統(tǒng)性的低度炎癥，加速糖尿病發(fā)展進(jìn)程[4-5]。腸道內(nèi)乳酸桿菌屬、雙歧桿菌屬等菌群能通過產(chǎn)生短鏈脂肪酸(short-chain fatty acids，SCFAs)以及膽汁酸等自身代謝產(chǎn)物激活短鏈脂肪酸受體43(short-chain fatty acid receptor 43，GPR43)及G蛋白偶聯(lián)膽汁酸受體1(G protein-coupled bile acid receptor 1，TGR5)，誘導(dǎo)腸激素-胰高血糖素樣肽-1(glucagon-like peptide-1，GLP-1)分泌[6]。GLP-1也可由前激素轉(zhuǎn)化酶1/3(proconvertase 1/3，PC1/3)切割、轉(zhuǎn)錄、修飾胰高血糖素原(proglucagon，GCG)后生成[7]。研究發(fā)現(xiàn)GLP-1對β細(xì)胞功能有重要調(diào)節(jié)作用，能抑制β細(xì)胞的凋亡，促進(jìn)β細(xì)胞生長及增殖，上調(diào)胰島素的分泌，降低血糖[8-9]。

黃連素是從毛茛科黃連或黃柏根狀莖中提取的異喹啉生物堿。臨床研究報(bào)道，黃連素可用于治療細(xì)菌感染性腹瀉，提示黃連素對腸道內(nèi)致病菌有一定的抑制作用。此外，黃連素具有改善血糖代謝的作用[10-12]，但黃連素抗糖尿病的具體作用機(jī)制仍不明確。本研究以高糖高脂飲食及注射鏈脲佐菌素誘導(dǎo)2型糖尿病模型大鼠為研究對象，探究黃連素對GLP-1分泌的影響，為進(jìn)一步明確黃連素抗糖尿病的分子機(jī)制提供理論基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1藥品與試劑 黃連素(鹽酸小檗堿片)購于成都錦華藥業(yè)有限責(zé)任公司(批號：20180524)，鏈脲佐菌素(streptozotocin，STZ)購于上海金穗生物科技有限公司(批號：20180605)，血糖試紙購于羅氏診斷產(chǎn)品上海有限公司(批號：05234450032)，利拉魯肽購于丹麥諾和諾德公司(批號：HP51789)，第一鏈cDNA合成試劑盒購于賽默飛世爾科技有限公司(批號：00705427)，DNA marker(批號：S7301)及瓊脂糖凝膠DNA回收試劑盒(批號：R6408)均購于北京天根生化科技有限公司，實(shí)時熒光定量 PCR 試劑盒購于日本Takara公司(批號：AJ12465A)，酶聯(lián)免疫吸附測定(ELISA)試劑盒GLP-1(批號：20150325)及糖化血紅蛋白(批號：20160120)購于南京建成試劑有限公司，核因子κB(nuclear factor kappa-B，NF-κB)(批號：GR3210877-1)，胰島素(批號：GR3210143-5)抗體及Rb lgG(HRP)(批號：GR3183284-5)均購于英國Abcam公司。

1.2儀器與設(shè)備 IQ5-5515型實(shí)時熒光定量實(shí)時熒光定量PCR儀(美國Bio-Rad公司)，DanoDrop1000型核酸蛋白檢測儀(賽默飛有限責(zé)任公司)，DYY-2C型凝膠電泳儀(北京六一生物科技有限公司)、CA-2000coda型全自動酶標(biāo)儀(賽默飛有限責(zé)任公司)，Nikon Eclipse Ti-SR型置熒光顯微鏡(日本尼康)，HH-SH4型恒溫水浴鍋(金壇市醫(yī)療儀器廠)。

1.3動物模型制備及分組 無特定病原體(SPF)級別的SD大鼠(雄性)50只，購買于長沙市天勤生物技術(shù)有限公司(許可證：SCXK-2014-0010)，體質(zhì)量為(180±20)g，8周齡。飼養(yǎng)環(huán)境為每日12 h光照，溫度(23±1)℃，相對濕度(50±5)%。根據(jù)隨機(jī)數(shù)字表法將大鼠隨機(jī)分為5組(每組10只)，并適應(yīng)性飼養(yǎng)1周。參照FUJIEDA等[13]研究方法構(gòu)建2型糖尿病大鼠模型，正常對照組始終給予普通飼料喂養(yǎng)12周。其他4組先給予高糖高脂飼料(蔗糖20%，豬油10%，蛋黃粉6%，膽鹽0.5%，基礎(chǔ)飼料63.5%)喂養(yǎng)8周后，再禁食8 h，一次性腹腔注射STZ(30 mg·kg-1)構(gòu)建2型糖尿病模型鼠。通過尾靜脈采血，檢測血糖>16.7 mmol·L-1說明造模成功。利拉魯肽組(陽性藥)每天皮下注射利拉魯肽0.2 mg·kg-1·d-1，持續(xù)4周。小劑量、大劑量黃連素組，分別灌胃給予100 mg·kg-1·d-1[14]及200 mg·kg-1·d-1[15]黃連素，給藥容量為1 mL·(100 g)-1，各組連續(xù)灌胃4周。

1.4體質(zhì)量及口服葡萄糖耐量測定 各組大鼠喂養(yǎng)8周，黃連素干預(yù)4周，共計(jì)12周，所有組從第1周開始至第12周，平均每周稱質(zhì)量3次，記錄平均體質(zhì)量。于第12周末最后一天禁食8 h后，第2天早晨灌胃葡萄糖溶液2 g·kg-1，并在不同時間段(灌胃葡萄糖溶液后0，30，60，90，120 min)取尾靜脈血，血糖儀檢測血糖值后，計(jì)算曲線下面積(area under curve，AUC)。

1.5糖化血紅蛋白及GLP-1含量檢測 各組大鼠在黃連素干預(yù)4周后，使用2 g·kg-1葡萄糖溶液灌胃，并通過腹腔注射氯胺酮和地西泮麻醉后，腹主動脈取血。根據(jù)南京建成試劑盒ELISA說明書操作，檢測血清中糖化血紅蛋白(glycosylated hemoglobin，HbA1c)及GLP-1含量。

1.6蘇木精-伊紅(HE)染色觀察胰腺形態(tài) 取大鼠胰腺組織，置于4%多聚甲醛浸泡24 h，石蠟包埋，組織切薄片3～4 μm。將組織切片置于70 ℃恒溫箱2 h脫蠟后，分別放入不同梯度乙醇溶液5 min，純化水3 min，晾片，蘇木精染色10 min，純化水洗1 min，鹽酸乙醇分化，自來水洗5 min，磷酸鹽緩沖液(PBS)反藍(lán)，再放入不同濃度乙醇浸泡5 min，晾片，封片，顯微鏡下觀察組織形態(tài)。

1.7免疫組化檢測胰腺組織胰島素以及NF-κB表達(dá) 取大鼠胰腺組織，方法同“1.6”項(xiàng)，將組織置于不同濃度乙醇溶液中后，晾片，加入胰島素(1：1 000)以及NF-κB(1：500)工作液，放入4 ℃冰箱孵育過夜，第2天取出后洗片，加入二抗室溫孵育0.5 h，洗片，顯色后，蘇木素染色，鹽酸乙醇反藍(lán)，晾片、封片，在倒置顯微鏡下觀察組織形態(tài)拍片。使用Image-Pro Plus 6.0版軟件選取相同的棕黃色作為判斷所有照片陽性的統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)，分析得出組織表達(dá)陽性的累積吸光度值(A)。

1.8糞便中DNA提取及純度檢測 在黃連素干預(yù)的第4周末最后一天，代謝籠收集各組鼠糞便，并根據(jù)糞便DNA提取試劑盒說明書提取糞便DNA。通過DanoDroP1000核酸蛋白儀檢測DNA濃度與純度，DNA樣品的A260/A280比值為1.6～1.8(純度較高，沒有污染)，繼續(xù)后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

1.9目標(biāo)菌的標(biāo)準(zhǔn)品配置及含量檢測 目標(biāo)菌的引物序列(生工生物有限公司合成)，經(jīng)過預(yù)變性95 ℃ 3 min，變性95 ℃ 30 s，退火根據(jù)各引物條件設(shè)置，30 s，延伸72 ℃ 30 s，34個循環(huán)。PCR擴(kuò)增后，進(jìn)行凝膠電泳、攝像，使用瓊脂糖凝膠試劑盒回收DNA產(chǎn)物后，將原樣本按照10倍梯度稀釋，濃度為1～108拷貝·μL-1作為模板，回收率80%～130%，斜率R值>0.98。將各菌的標(biāo)準(zhǔn)曲線及樣本同時進(jìn)行Q-PCR擴(kuò)增，并根據(jù)試劑盒操作說明書，設(shè)置反應(yīng)條件為95 ℃ 3 min，變性95 ℃ 30 s，根據(jù)各引物擴(kuò)增條件設(shè)置退火溫度，30 s，延伸72 ℃ 30 s，共40個循環(huán)。各菌的引物序列為：梭桿菌屬Forward 5′-GTATGTCRCAAGCGTTATCC-3′，Reverse 5′-CGAACAGGATTAGATACCC-3′；乳桿菌屬Forward 5′-AGCAGTAGGGAATCTTCCA-3′，Reverse 5′-CACCGCTACACATGGAG-3′；雙歧桿菌屬Forward 5′-GTCAGCTCGTGTCGTGAG-3′，Reverse 5′-GTCGCATCCCGTTGTACC-3′；總菌Forward 5′-TCCTACGGGAGGCAGCAGT-3′，Reverse 5′-GACTACCAGGGTATCTAATCCTGTT-3′。

1.10熒光定量PCR法檢測結(jié)腸GCG、PC1/3等基因 取各組鼠結(jié)腸組織，按照RNA提取步驟操作后，將產(chǎn)物按照第一鏈cDNA合成試劑盒逆轉(zhuǎn)錄，使用Q-PCR儀檢測樣本CT值。結(jié)果采用ΔΔCT法：A=CT(目的基因，待測樣本)-CT(內(nèi)標(biāo)基因，待測樣本)，B=CT(目的基因，對照樣本)-CT(內(nèi)標(biāo)基因，對照樣本)，K=A-B，表達(dá)倍數(shù)=2-K。引物序列為：β-actin：Forward 5′-TGCTATGTTGCCCTAGACTTCG-3′，Reverse 5′-GTTGGCATAGAGGTCTTTACGG-3′；胰高血糖素樣肽-1受體(glucagon-like peptide-1 receptor，GLP-1R)：Forward 5′-TCTCTAGGCTGCCGACTGGT-3′，Reverse 5′-CTCCGAGAACACCGAGAAGG-3′；GCG：Forward 5′-ACCGCCCTGAGATTACTTTTCTG-3′，Reverse 5′-AGTTCTCTTTCCAGGTTCACCAC-3′；PC1/3：Forward 5′-GGTACCCAAAAACTCCAGCA-3′，Reverse 5′-GGCTTGTTGAGCTTTTCCAG-3′；GPR43：Forward 5′-CTGGCACAGTTCCTTGATCCTCAC-3′，Reverse 5′-GGCAGCAGCAGCAACAGGAG-3′；TGR5：Forward 5′-GCCTGATGCTCATCGCCAACC-3′，Reverse 5′-GGAAGAAGCAGCCAGCAGGTG-3′。

1.11Western blotting檢測結(jié)腸GLP-1蛋白表達(dá) 取結(jié)腸組織，按說明書比例加入蛋白裂解液，充分勻漿，4 ℃條件下靜置30 min，15 000 r·min-1離心10 min(離心半徑12 cm)，取上清液并按試劑盒說明書測定蛋白濃度。取蛋白50 μg進(jìn)行十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳(sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electropheresis，SDS-PAGE)，轉(zhuǎn)至聚偏氟乙烯(polyvinylidene difluoride，PVDF)(濕轉(zhuǎn))，5%脫脂奶粉封閉1 h，一抗兔抗鼠GLP-1(Abcam，1：1 000)及兔抗鼠β-actin(Abcam，1：1 000)孵育過夜，TBST洗3次，每次10 min，二抗羊抗兔(Abcam，1：1000)孵育1 h，TBST洗3次，每次15 min，用增強(qiáng)化學(xué)發(fā)光試劑盒(efficient chemiluminescence kit，ECL)顯色曝光。

2 結(jié)果

2.1黃連素對體質(zhì)量、口服葡萄糖耐量、HbA1c的影響 如圖1A所示。與正常對照組比較，模型對照組在STZ干預(yù)2周后體質(zhì)量呈下降趨勢，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。與模型對照組比較，小劑量、大劑量黃連素組體質(zhì)量無顯著變化(P>0.05)。各組鼠口服灌胃給予2 g·kg-1葡萄糖溶液后，葡萄糖曲線下面積(AUC)能反映口服糖耐量能力(Oral glucose tolerance，OGTT)。如圖1B及1C所示，與正常對照組比較，模型對照組血糖值以及AUC明顯增加(P<0.01)，而小劑量、大劑量黃連素組明顯減少AUC(P<0.05，P<0.01)，且小劑量、大劑量黃連素組分別在60及120 min降低血糖(P<0.05)，說明黃連素能顯著改善糖尿病大鼠口服葡萄糖耐受能力。如圖1D所示，與正常對照組比較，模型對照組HbA1c含量顯著增加(P<0.01)。與模型對照組比較，小劑量、大劑量黃連素組顯著降低HbA1c含量(P<0.05，P<0.01)，說明黃連素對糖尿病大鼠血糖控制良好。

①與正常對照組比較，P<0.01；②與模型對照組比較，P<0.05；③與模型對照組比較，P<0.01。

2.2糞便中各菌群引物特異性的鑒定 使用2.0%瓊脂糖凝膠電泳驗(yàn)證目標(biāo)菌群的引物特異性，并使用50 bp DNA及100 bp DNA ladder標(biāo)記擴(kuò)增產(chǎn)物分子，如圖2所示，擴(kuò)增產(chǎn)物中目標(biāo)菌群的擴(kuò)增條帶清晰明亮，且未見非特異性擴(kuò)增條帶，說明目標(biāo)菌群的引物特異性良好。

A.總菌；B.梭桿菌屬；C.乳酸桿菌屬；D.雙歧桿菌屬。

2.3黃連素對總菌、梭桿菌屬、乳酸桿菌屬及雙歧桿菌屬的影響 如圖3A-D所示，與正常對照組比較，模型對照組鼠的梭桿菌屬、乳酸桿菌屬及雙歧桿菌屬含量明顯減少(P<0.01)，但總菌的含量無變化(P>0.05)。與模型對照組比較，小劑量、大劑量黃連素組明顯增加梭桿菌屬以及乳酸桿菌屬含量(P<0.05)，但對總菌以及雙歧桿菌屬的含量無影響(P>0.05)。

A.總菌；B.梭桿菌屬；C.乳酸桿菌屬；D.雙歧桿菌屬；①與正常對照組比較，P<0.01；②與正常對照組比較，P<0.05；③與模型對照組比較，P<0.05；④與模型對照組比較，P<0.01。

2.4黃連素對糖尿病大鼠胰腺組織的影響 如圖4所示，正常對照組大鼠胰腺組織結(jié)構(gòu)正常，胰島內(nèi)細(xì)胞大小均一，胰島形狀規(guī)則。模型對照組大鼠胰島組織形態(tài)結(jié)構(gòu)明顯異常，胰島萎縮，島內(nèi)細(xì)胞數(shù)量明顯減少，胰島內(nèi)出現(xiàn)明顯的空泡。與模型對照組比較，低、大劑量黃連素顯著增加胰島內(nèi)細(xì)胞數(shù)量，抑制胰島組織皺縮，改善胰島形態(tài)。

圖4 黃連素對糖尿病大鼠胰腺組織影響(×100)

2.5黃連素對糖尿病大鼠胰腺組織胰島素的表達(dá)影響 如圖5所示，與正常對照組比較，模型對照組胰島組織形態(tài)明顯異常，且胰島素表達(dá)明顯減少(P<0.01)。與模型對照組比較，小劑量、大劑量黃連素組明顯改善胰島形態(tài)，增加糖尿病大鼠胰島素的表達(dá)(P<0.01，P<0.05)。

①與正常對照組比較，P<0.01；②與模型對照組比較，P<0.05；③與模型對照組比較，P<0.01。

2.6黃連素對糖尿病鼠胰腺組織NF-κB表達(dá)影響 如圖6所示，與正常對照組比較，模型對照組胰島組織形態(tài)明顯異常，NF-κB表達(dá)顯著增加(P<0.01)。與模型對照組比較，小劑量、大劑量黃連素組顯著改善胰島形態(tài)，減少NF-κB蛋白表達(dá)(P<0.01)。

①與正常對照組比較，P<0.01；②與模型對照組比較，P<0.01。

2.7黃連素對GPR43、TGR5、GCG及PC1/3 mRNA 表達(dá)影響 如圖7所示，與正常對照組比較，模型對照組結(jié)腸組織GPR43、TGR5、GCG及PC1/3 mRNA 表達(dá)顯著減少(P<0.01)。與模型對照組比較，小劑量、大劑量黃連素組顯著增加糖尿病大鼠GPR43、TGR5、GCG及PC1/3 mRNA表達(dá)(P<0.01)。

A.正常對照組；B.模型對照組；C.利拉魯肽組；D.小劑量組；E.大劑量組；①與正常對照組比較，P<0.01；②與模型對照組比較，P<0.01。

2.8黃連素對糖尿病鼠GLP-1的影響 如圖8所示，與正常對照組比較，模型對照組血清中GLP-1含量、結(jié)腸組織GLP-1R mRNA及GLP-1蛋白表達(dá)顯著減少(P<0.01)。與模型對照組比較，小劑量、大劑量黃連素組顯著增加糖尿病大鼠血清GLP-1含量、GLP-1R mRNA及GLP-1蛋白表達(dá)(P<0.05)。

A.正常對照組；B.模型對照組；C.利拉魯肽組；D.小劑量組；E.大劑量組；①與正常對照組比較，P<0.01；②與模型對照組比較，P<0.05；③與模型對照組比較，P<0.01。

3 討論

2型糖尿病是一種以高血糖為特征，胰島素相對缺乏或胰島素抵抗為主的代謝紊亂性疾病。長期血糖控制不佳是導(dǎo)致糖尿病患者各種并發(fā)癥以及生活質(zhì)量降低的主要原因，因此控制血糖是糖尿病治療的關(guān)鍵目標(biāo)[16]?？诜咸烟悄褪苣芰δ芊从巢秃笱堑目刂魄闆r，HbA1c能反映2～3個月血糖的控制情況。在本研究中，小劑量及大劑量黃連素組顯著改善糖尿病大鼠口服葡萄糖耐受能力，降低HbA1c含量，說明黃連素對糖尿病大鼠血糖的控制情況良好。

研究表明，與正常人比較，2型糖尿病患者血清內(nèi)GLP-1含量明顯減少，并伴有胰島素分泌能力降低，口服葡萄糖耐受能力受損情況[17]。部分糖尿病患者受益于外源性胰島素的補(bǔ)充或者通過促進(jìn)內(nèi)源性胰島素的產(chǎn)生，改善糖脂代謝。GLP-1是一種重要的腸道激素，具有葡萄糖依賴性促進(jìn)胰島素分泌，改善胰島功能的作用。研究報(bào)道GLP-1能通過與胰島β細(xì)胞的跨膜受體結(jié)合，激活環(huán)腺苷酸/蛋白激酶A(cyclic adenosine monophosphate/protein kinase A，cAMP/PKA)途徑，促進(jìn)胰島β細(xì)胞分泌胰島素，同時減少胰島α細(xì)胞中胰高血糖素的分泌，抑制食欲，調(diào)控血糖[18]。此外，GLP-1還能抑制β細(xì)胞的凋亡，促進(jìn)β細(xì)胞增殖及生長，改善胰島細(xì)胞功能[19]。本研究中黃連素明顯促進(jìn)GLP-1分泌，改善糖尿病大鼠胰腺組織形態(tài)，抑制炎癥因子NF-κB表達(dá)，促進(jìn)胰島素分泌，提示黃連素可能是通過增加GLP-1的分泌，改善胰島功能，促進(jìn)胰島素的分泌而發(fā)揮降血糖作用。

研究表明GLP-1的分泌與腸道菌群密切相關(guān)，GLP-1能通過產(chǎn)短鏈脂肪酸菌群-SCFAs-GLP-1信號通路以及腸道菌群-TGR5-GLP-1信號通路調(diào)控生成[20]。WOLDEAMLAK等[21]報(bào)道，與健康人比較，糖尿病患者腸道內(nèi)菌群多樣性、菌落豐度、種類及數(shù)量明顯減少，以典型的大腸埃希菌等革蘭陰性菌增加，乳酸桿菌、梭桿菌屬等產(chǎn)短鏈脂肪酸菌群減少為主。梭桿菌屬、乳桿菌屬及雙歧桿菌屬是腸道內(nèi)有益菌，也被稱為產(chǎn)短鏈脂肪酸菌群，這些菌能通過代謝、發(fā)酵碳水化合物、纖維素等物質(zhì)，生成乙酸、丙酸、丁酸等短鏈脂肪酸(SCFAs)[22-23]。SCFAs既是機(jī)體的能源物質(zhì)，也是G蛋白偶聯(lián)受體的天然配體，其能通過激活腸L細(xì)胞的GPR43促進(jìn)GLP-1分泌，改善血糖的調(diào)控[24-25]。研究報(bào)道，腸道內(nèi)乳酸桿菌屬、雙歧桿菌屬、普氏菌屬等產(chǎn)短鏈脂肪酸菌群，能通過自身代謝產(chǎn)物乙酸、丙酸、丁酸激活GPR43，促進(jìn)GLP-1分泌，改善糖尿病大鼠的血糖代謝[26-27]。在本研究中，與模型對照組比較，小劑量、大劑量黃連素組結(jié)腸GPR43 mRNA表達(dá)顯著增加，提示黃連素可能是通過激活GPR43活性誘導(dǎo)結(jié)腸GLP-1分泌，這可能與乳酸桿菌屬及梭桿菌屬的代謝產(chǎn)物SCFAs上調(diào)GPR43活性有關(guān)。

此外，乳酸桿菌屬及雙歧桿菌屬的代謝物除短鏈脂肪酸外，還包括膽汁酸及各種次級膽汁酸[6]。膽汁酸能通過激活法尼類X受體(farnesoid X receptor，F(xiàn)XR)及下游TGR5活性，上調(diào)GLP-1的分泌，調(diào)節(jié)脂質(zhì)、葡萄糖和能量穩(wěn)態(tài)[28]。腸道來源的GLP-1可由PC1/3對GCG進(jìn)行剪切、修飾后生成GLP-1[17]。SANCHO等[29]報(bào)道，在高血糖、高血脂或炎癥條件下，胰島α細(xì)胞能通過增加PC1/3基因表達(dá)激活GLP-1分泌，這可能有助于抑制高糖及高脂類物質(zhì)對胰島α及β細(xì)胞的損害。MORIMOTO等[30]發(fā)現(xiàn)，膽汁酸能通過上調(diào)TGR5活性，促進(jìn)GCG及PC1/3基因表達(dá)，誘導(dǎo)GLP-1分泌。PATHAK等[28]報(bào)道，F(xiàn)XR激動劑能通過增加腸內(nèi)膽汁酸菌群，激活腸TGR5活性，刺激腸L細(xì)胞分泌GLP-1，改善肝糖脂代謝。本研究與這些報(bào)道一致，在本研究中，黃連素顯著增加結(jié)腸TGR5、PC1/3、CGC基因表達(dá)，提示黃連素可能通過激活TGR5活性，上調(diào)PC1/3及GCG基因的表達(dá)，誘導(dǎo)GLP-1分泌，這可能與乳酸桿菌屬的代謝產(chǎn)物膽汁酸激活TGR5活性有關(guān)。

本研究初步探究黃連素對GLP-1分泌的影響，發(fā)現(xiàn)黃連素能通過激活GPR43及TGR5活性，上調(diào)GCG及PC1/3基因表達(dá)，促進(jìn)GLP-1分泌，其可能是依賴于腸道菌群的代謝產(chǎn)物短鏈脂肪酸以及膽汁酸的作用。由于腸道內(nèi)菌群豐富，種類繁多，且結(jié)構(gòu)復(fù)雜，腸道內(nèi)菌群的代謝產(chǎn)物更加豐富多樣，而本研究僅對目標(biāo)菌群進(jìn)行檢測，因此對菌群及其代謝產(chǎn)物的分析存在一定的局限性。今后本研究還將繼續(xù)使用基因測序方法對腸道內(nèi)菌群豐度、結(jié)構(gòu)及功能進(jìn)行預(yù)測及分析，或利用靶向代謝組學(xué)方法檢測腸道菌群代謝產(chǎn)物SCFAs、膽汁酸含量以明確黃連素對菌群的結(jié)構(gòu)及菌群代謝產(chǎn)物之間的關(guān)系，為闡明黃連素的抗糖尿病分子機(jī)制奠定一定的理論基礎(chǔ)。