鮑志國 雷威
肺癌已成為我國發(fā)生率和死亡率最高的惡性腫瘤,其中肺腺癌發(fā)病率占原發(fā)性肺癌的30%左右,因此早期診斷并積極治療對改善患者預后具有重要意義[1]。螺旋CT 在檢查及診斷肺癌中具有準確率高且創(chuàng)傷性小等優(yōu)點[2]。近年來隨著分子生物學飛速發(fā)展,微小RNA 研究在臨床日益增多,屬于小的非編碼的RNA 能夠靶向調控mRNA 影響蛋白表達,形成相應的生物學改變,在不同組織中對細胞生長、細胞周期及細胞分化進行影響,還可以作為促癌因子或者抑癌因子參與惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展和轉移過程。miR-22-3p 可通過下調靶基因抑制肝癌的增殖和轉移,但其在肺腺癌中的研究較少[3]。本研究分析了肺腺癌中miR-22-3p表達水平,同時和CT征象進行對比研究,探討兩者之間的關系,以期為臨床提供依據(jù)。
1.1 一般資料選取2017年1月~2019年3月我院保存的肺腺癌組織標本98例,其中男55例,女43例;年齡<60歲者45例,≥60歲者53例;病灶<3cm 者50例,≥3cm 者48例。同時選取癌旁組織(距癌組織邊緣>5cm)30例作為對照。納入標準:①均經(jīng)病理學確診為肺腺癌;②初次發(fā)病;③臨床影像資料保存完整;④術前無放化療等抗腫瘤治療史。排除標準:①有其他系統(tǒng)惡性腫瘤;②有心、肝、腎等其他重要臟器疾病。
1.2 方法患者均行平掃加強化掃描,儀器為德國西門子Samatom Sensation 16層螺旋CT機,從肺尖直至肺底區(qū)域進行檢查,掃描參數(shù)設定:螺距1.08,電壓120kV,電流250mA,重建層厚5mm,掃描時間為5~7s,矩陣512×512。同時開展高分辨率靶掃描,參數(shù)設定:螺距0.64,電壓120kV,電流300mA,重建層厚1mm,掃描時間為5~7s,矩陣1 024×1 024,按照高分辨算法進行計算。采用雙盲法進行閱片,由影像科主治醫(yī)生和副主任醫(yī)師進行分析,對肺結節(jié)、支氣管開展觀察,若有分歧進行討論獲取一致意見。
1.3 RT-PCR檢測對肺腺癌腫瘤組織和癌旁組織的總RNA 按照MirNeasy Mini Kit 試劑盒說明書進行提取,總RNA 的濃度和純度由紫外分光光度計檢測。按照TaKaRa 公司提供的試劑盒說明書上的反應條件設置溫度,在PCR 儀上進行cDNA 逆轉錄。PCR反應過程:激活聚合酶50℃ 2min,預變性95℃30s;變性95℃ 5s,退火和延伸60% 34s,經(jīng)過40個循環(huán)擴增。按照2-△△CT凹法對結果進行分析,計算肺腺癌腫瘤組織和癌旁正常組織中表達情況。
1.4 統(tǒng)計學方法采用SPSS 22.0 軟件,miR-22-3p相對表達量采用表示,組間比較采用t檢驗,miR-22-3p 相對表達量與臨床分期、淋巴結轉移、胸膜凹陷征和血管集束征相關性采用Spearman 秩相關分析。檢驗水準α 為0.05。以P<0.05 為差異有統(tǒng)計學意義。
2.1 肺腺癌和癌旁組織miR-22-3p表達比較肺腺癌組織miR-22-3p 相對表達量0.544±0.112 明顯低于癌旁組織1.011±0.106,差異有統(tǒng)計學意義(t=20.228,P<0.05)。
2.2 miR-22-3p表達與肺腺癌臨床病理資料關系臨床分期Ⅲ~Ⅳ期、有淋巴結轉移的肺腺癌組織miR-22-3p 相對表達量明顯低于臨床分期Ⅰ~Ⅱ期、無淋巴結轉移的肺腺癌組織,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05),見表1。
表1 miR-22-3p表達與肺腺癌臨床病理資料關系
2.3 miR-22-3p表達與CT征象的關系miR-22-3p相對表達量與胸膜凹陷征、平掃CT值、血管集束征有一定關系(P<0.05),見表2。
表2 miR-22-3p表達與CT征象關系
續(xù)表2
2.4 相關性分析miR-22-3p 相對表達量與臨床分期、淋巴結轉移、胸膜凹陷征和血管集束征呈負相關(r=-0.454、-0.473、-0.357 和-0.360,P<0.05)。
近年來肺癌發(fā)病率呈升高趨勢,危及患者生命安全,因此對于肺癌早期診斷、精確分期和合理治療至關重要[3,4]。對肺癌進行快速有效的早期診斷是降低肺癌病死率的重要手段[5,6]。螺旋CT 檢查在肺癌診斷中發(fā)揮了很大作用,CT 可以顯示某個斷面組織密度,分辨率高,受組織結構的干擾較小,該方法利用X 線球管連續(xù)性的旋轉曝光并配合縱軸的勻速移動完成螺旋形空間分布的掃描并進行數(shù)據(jù)采集[7]。肺腺癌在管腔內呈現(xiàn)息肉狀、菜花樣新生物突起,因此CT 容易出現(xiàn)肺不張征象,而小細胞肺癌則表現(xiàn)為血管怒張,黏膜粗糙肥厚,容易出現(xiàn)管腔狹窄,但是完全閉塞導致的肺不張較少見[8]。CT值是實體瘤的密度評價指標,主要由組織成分決定,由于腫瘤具有豐富的新生血管,缺乏平滑肌細胞與神經(jīng)支配,僅由不完整基底膜內皮細胞組成,因此利用造影劑進入新生血管及裂隙后使病灶強化[9]。
近年來分子生物學的飛速發(fā)展使血清學指標成為肺腺癌診斷的理想方法,需求更為敏感、可靠的分子生物學指標為臨床提供診療依據(jù)一直是研究的熱點。微小RNA 屬于小的、非編碼RNA,可以結合靶向mRNA3'非翻譯區(qū)域誘導翻譯機制,靶向調控mRNA 影響蛋白的表達過程,導致相應生物學變化[10]。目前已經(jīng)證實miR-22-3p 能夠下調靶基因抑制腫瘤細胞的增殖、轉移和侵襲,在食管癌患者中起到抑癌因子的作用,表達升高對延長患者生存時間具有重要意義[11]。有學者發(fā)現(xiàn)miR-22-3p 對細胞的凋亡不會產生明顯的影響,其在肺腺癌中抑制微小RNA 可以促進肺腺癌細胞前移和轉移,影響肺腺癌發(fā)展。還有學者利用雙熒光素酶報告實驗發(fā)現(xiàn),在視網(wǎng)膜母細胞癌中miR-22-3p 與ENO1 烯醇化酶之間具有結合位點,其對ENO1 表達有直接的負調控作用,可以影響視網(wǎng)膜母細胞癌細胞增殖過程[12]。
本研究分析miR-22-3p 同肺腺癌CT征象之間的關系,分葉征是肺腺癌的主要征象,主要是腫瘤生長不均或多核發(fā)病及相互融合或腫瘤組織受周圍肺組織、血管、支氣管阻擋造成,但是同miR-22-3p表達之間沒有關系,這還需要進一步分析??张菡魍瑯邮侵匾飨螅饕悄[瘤結節(jié)內在CT 影像出現(xiàn)小灶性透光區(qū)域,腫瘤直徑越小,空泡征發(fā)生率越高,但是與miR-22-3p表達之間沒有關系,提示空泡征與腫瘤惡性生物學行為之間意義不大[13]。胸膜凹陷征則是腫瘤同胸膜之間線形或三角形影像變化,主要是腫瘤內纖維化導致,新生腫瘤血管結構不完整,血管內皮間隙較大,血液中纖維蛋白更容易滲透進入組織間隙,惡性腫瘤細胞增殖加速會造成組織內缺氧,形成病變纖維化收縮[14]。miR-22-3p表達同胸膜凹陷征關系密切,提示具有胸膜凹陷征肺腺癌患者惡性程度高,但是也有學者持反對意見,還需要深入論證。血管集束征屬于病灶近或遠肺門側1~3 條增粗的線條影朝向病變部位集聚,在病灶的邊緣截斷或病灶邊緣區(qū)出現(xiàn)點網(wǎng)狀表現(xiàn),其出現(xiàn)提示腫瘤供血血管增多、增粗或腫瘤已侵入相鄰血管[15]。miR-22-3p 同血管集束征存在密切關系,提示miR-22-3p 對肺腺癌內血管狀況及血流情況的反映,而且同腫瘤體內血管特別是小血管數(shù)量和密度關系密切,這同以往研究結果相似[15]。本研究通過相關性分析發(fā)現(xiàn),miR-22-3p 相對表達量與臨床分期、淋巴結轉移、胸膜凹陷征和血管集束征呈負相關,提示了肺腺癌患者CT征象同miR-22-3p表達量之間相關聯(lián),可以通過測定miR-22-3p 濃度對患者臨床分期以及淋巴結轉移等情況進行早期預判。
本研究發(fā)現(xiàn),肺腺癌組織miR-22-3p 相對表達量明顯低于癌旁組織,說明在肺腺癌患者中存在miR-22-3p 低表達,這和以往研究結果相似[16]。通過與肺腺癌患者病理資料關系進行分析發(fā)現(xiàn),臨床分期Ⅲ~Ⅳ期、有淋巴結轉移的肺腺癌組織miR-22-3p 相對表達量明顯低于臨床分期Ⅰ~Ⅱ期、無淋巴結轉移的肺腺癌組織,說明在分期靠后和出現(xiàn)淋巴結轉移的肺腺癌患者腫瘤組織中miR-22-3p表達量降低。與CT 結果對比發(fā)現(xiàn),有胸膜凹陷征、血管集束征肺腺癌組織miR-22-3p 相對表達量為0.487± 0.109 和0.481±0.106,明顯低于無胸膜凹陷征、無血管集束征肺腺癌組織,說明存在胸膜凹陷征、血管集束征肺腺癌患者腫瘤組織中miR-22-3p表達量更低。本研究miR-22-3p 在肺腺癌組織中呈現(xiàn)低表達,但是本研究進一步證實了不同CT征象肺腺癌患者體內miR-22-3p表達情況存在差異,有助于臨床對患者病情發(fā)展進行分析,這在以往的研究中較為少見。近年來隨著腫瘤微小RNA研究領域的發(fā)展,通過分析微小RNA 作用關系為進一步闡明腫瘤發(fā)生發(fā)展的分子機制提供了新的切入點,有助于為腫瘤的治療提供新的靶點。但由于入組患者數(shù)量有限,需要進一步擴充樣本量并在微小RNA 潛在作用機制上深入分析。
綜上所述,肺腺癌中miR-22-3p表達下調,與臨床分期、淋巴結轉移、胸膜凹陷征和血管集束征有關。