竇一田 尚懿純 劉春柳

摘 要 目的：預(yù)測(cè)辛通暢絡(luò)法載體——復(fù)方腎蘇Ⅱ之君藥“柴胡-黃芩”藥對(duì)干預(yù)足細(xì)胞病變的可能作用靶點(diǎn)與機(jī)制，為辛通暢絡(luò)法防治足細(xì)胞病變序貫臨床和基礎(chǔ)研究的開展提供參考。方法：基于中藥系統(tǒng)藥理學(xué)技術(shù)平臺(tái)（TCMSP）數(shù)據(jù)庫，檢索柴胡、黃芩化學(xué)成分及其對(duì)應(yīng)靶點(diǎn)蛋白，借助Cytoscape 3.2.1軟件繪制“中藥-成分-靶點(diǎn)”網(wǎng)絡(luò)圖。在OMIM數(shù)據(jù)庫、DrugBank數(shù)據(jù)庫及DigSee在線文本中檢索足細(xì)胞病變相關(guān)靶點(diǎn)，利用Venny 2.1.0在線作圖工具獲取其與“柴胡-黃芩”作用靶點(diǎn)的交集基因。分別應(yīng)用STRING數(shù)據(jù)庫及Cytoscape 3.2.1軟件的“CytoNCA”插件構(gòu)建交集基因蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用關(guān)系（PPI）網(wǎng)絡(luò)圖并進(jìn)行拓?fù)鋵W(xué)分析，獲取核心預(yù)測(cè)靶點(diǎn)。借助DAVID數(shù)據(jù)庫對(duì)交集基因進(jìn)行基因本體（GO）功能注釋及京都基因與基因組百科全書（KEGG）通路富集，并通過OmicShare Tools在線作圖平臺(tái)實(shí)現(xiàn)富集結(jié)果的可視化。結(jié)果：基于TCMSP數(shù)據(jù)庫檢索結(jié)果，獲得有對(duì)應(yīng)靶點(diǎn)的活性成分44種，其中柴胡13種、黃芩32種，豆甾醇為兩者共有成分;潛在作用靶點(diǎn)較多的化合物為槲皮素、山柰酚、漢黃芩素等;節(jié)點(diǎn)度值較高靶點(diǎn)蛋白為前列腺素內(nèi)過氧化物合酶2（PTGS2）、PTGS1、核受體共激活因子2、熱休克蛋白90α等，分別與37、30、25、25個(gè)活性成分相關(guān)聯(lián)。獲取“柴胡-黃芩”作用靶點(diǎn)與足細(xì)胞病變相關(guān)靶點(diǎn)交集基因20個(gè)，包括PTGS2、VEGFA、MMP9、TNF、IL6等。上述交集基因的PPI網(wǎng)絡(luò)圖共包含節(jié)點(diǎn)20個(gè)、連線110條，MMP9、VEGFA、IL6等基因處于核心位置。GO分析結(jié)果顯示，共獲得生物信息條目154個(gè)（P<0.05），包括生物過程條目139個(gè)、細(xì)胞組成條目8個(gè)、分子功能條目7個(gè)。其中，生物過程主要涉及一氧化氮生物合成過程的正調(diào)控、炎癥反應(yīng)、免疫反應(yīng)等，細(xì)胞組成主要涉及細(xì)胞外間隙、胞外區(qū)、質(zhì)膜外側(cè)等，分子功能主要涉及蛋白質(zhì)結(jié)合、細(xì)胞因子活性、生長(zhǎng)因子活性等。同時(shí)，獲得KEGG通路富集條目47個(gè)（P<0.05），主要涉及細(xì)胞因子-細(xì)胞因子受體相互作用、類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎、瘧疾、癌癥信號(hào)通路等相關(guān)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑。結(jié)論：復(fù)方腎蘇Ⅱ之“柴胡-黃芩”藥對(duì)活性成分可能通過細(xì)胞因子-細(xì)胞因子受體相互作用、類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎、瘧疾、癌癥信號(hào)通路等相關(guān)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑作用于MMP9、VEGFA、IL6、TNF等靶點(diǎn)，從而發(fā)揮對(duì)足細(xì)胞病變的干預(yù)作用。

關(guān)鍵詞 網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué);“柴胡-黃芩”藥對(duì);足細(xì)胞病變;靶點(diǎn);機(jī)制

ABSTRACT? ?OBJECTIVE： To predict the potential target and mechanism of Xintong Changluo Method carrier-Compund Shensu Ⅱ couplet medicine of Bupleurum falcatum-Scutellaria baicalensis intervening in podocyte lesion， and to provide reference for the development of sequential clinical and basic research of Xintong Changluo Method in the prevention and treatment of podocyte lesion. METHODS： Based on TCMSP database， chemical components and target protein of B. falcatum and S. baicalensis were retrieved， and Cytoscape 3.2.1 software was used to draw a “TCM-component-target” network. The targets related to podocyte lesion were searched from OMIM database， DrugBank database and Digsee online text， and the intersection genes of above targets and “B. falcatum-S. baicalensis” target were obtained by Venny 2.1.0 online mapping tool. The protein-protein interaction （PPI） network was constructed by STRING database， and the core targets were obtained by topology analysis of the network by using CytoNCA plug-in Cytospace 3.2.1 software. With the help of DAVID database， the function of Gene Ontology （GO） was annotated and KEGG pathway was enriched; and the enrichment results were visualized through OmicShare Tools online mapping platform. RESULTS： Based on retrieval results of TCMSP database， 44 active components were obtained， involving 13 of B. falcatum and 32 of S. baicalensis; stigmasterol is common component of B. falcatum and S. baicalensis. Quercetin， kaempferol and wogonin were the compounds with main potential targets. The target proteins with high node degree were prostaglandin endoperoxide synthase 2 （PTGS2）， PTGS1， nuclear receptor coactivator 2 and heat shock protein 90α， which were associated with 37， 30， 25 and 25 active components respectively. Twenty genes were obtained from the interaction between “B. falcatum-S. baicalensis” and podocyte lesion related targets， including PTGS2， VEGFA， MMP9， TNF and IL6. PPI network diagram of the above intersection genes contained 20 nodes and 110 lines， with MMP9， VEGFA， IL6 and other genes at the core. The results of GO analysis showed that a total of 154 biological information items were obtained （P<0.05）， including 139 biological process items， 8 cell composition items and 7 molecular function items. Among them， biological processes mainly involved in the positive regulation of NO biosynthesis process， inflammatory response， immune response. Cell composition mainly involved in extracellular space， extracellular region， external side of plasma membrane， etc.， and molecular function mainly involved in protein binding， cytokine activity， growth factor activity， etc. At the same time， 47 KEGG pathways were obtained （P<0.05）， mainly including cytokine-cytokine receptor interaction， rheumatoid arthritis， malaria， cancer signaling pathways. CONCLUSIONS： The active components of Compund Shensu Ⅱ couplet medicine of “B. falcatum-S. baicalensis” may act on MMP9， VEGFA， IL6， TNF and other targets through cytokine-cytokine receptor interaction， rheumatoid arthritis， malaria， cancer signal pathway， so as to play its intervention effect on podocyte lesion.

KEYWORDS? ?Network pharmacology; Couplet medicine of “Bupleurum falcatum-Scutellaria baicalensis”; Podocyte lesion; Target; Mechanism

生理狀態(tài)下，足細(xì)胞附著于腎小球基底膜（GBM）外側(cè)，是腎小球?yàn)V過屏障的重要組成部分;同時(shí)，作為高度特異性終末分化細(xì)胞，足細(xì)胞一旦損傷脫落就很難再生[1]。目前學(xué)者普遍認(rèn)為，足細(xì)胞病變廣泛存在，是微小病變腎病、膜性腎病、局灶節(jié)段性腎小球硬化、狼瘡性腎炎以及糖尿病腎病等常見原發(fā)、繼發(fā)性腎小球疾病的共同病理改變[2]。進(jìn)入21世紀(jì)后，伴隨足細(xì)胞病變概念的提出及全球足細(xì)胞病變發(fā)生率的顯著上升[3]，該病的防治日益被腎臟病專業(yè)領(lǐng)域的學(xué)者所關(guān)注。近年來，中醫(yī)藥對(duì)足細(xì)胞病變的防治介入廣泛，其療效確切、衛(wèi)生經(jīng)濟(jì)學(xué)效益較好，逐漸成為慢性腎臟?。–KD）足細(xì)胞病變綜合防治的重要組成部分[4]。但由于中醫(yī)學(xué)獨(dú)特的理論體系，其物質(zhì)基礎(chǔ)闡釋與作用機(jī)制分析仍屬“短板”，而網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)技術(shù)的發(fā)展使特定疾病的中醫(yī)藥干預(yù)靶點(diǎn)與機(jī)制途徑預(yù)測(cè)成為可能[5]。鑒于此，本研究以既往證實(shí)可有效延緩足細(xì)胞病變進(jìn)程的辛通暢絡(luò)法載體——復(fù)方腎蘇Ⅱ之君藥“柴胡-黃芩”藥對(duì)為例[6-7]，基于網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)技術(shù)初步探索中醫(yī)藥干預(yù)足細(xì)胞病變的針對(duì)性靶點(diǎn)與潛在機(jī)制，為辛通暢絡(luò)法干預(yù)足細(xì)胞病變序貫臨床與基礎(chǔ)研究的開展提供參考。

1 材料與方法

1.1 “柴胡-黃芩”活性成分及潛在靶點(diǎn)收集

研究基于中藥系統(tǒng)藥理學(xué)技術(shù)平臺(tái)（TCMSP）數(shù)據(jù)庫（https：//tcmspw.com/tcmsp.php）進(jìn)行，設(shè)置口服生物利用度（OB）≥30%、類藥性指數(shù)（DL）≥0.18[8]，分別以“柴胡”“黃芩”為關(guān)鍵詞，檢索兩味藥材的化學(xué)成分及其對(duì)應(yīng)靶點(diǎn)蛋白，并剔除無對(duì)應(yīng)靶點(diǎn)的成分。將檢索條件設(shè)置為“Organism：Homo sapiens”，在UniProt KB數(shù)據(jù)庫（http：//www.uniprot.org/）中查詢活性成分潛在靶點(diǎn)蛋白的對(duì)應(yīng)基因。

1.2 “中藥-成分-靶點(diǎn)”網(wǎng)絡(luò)圖構(gòu)建

將“1.1”項(xiàng)下檢索所得的柴胡、黃芩包含的活性成分及其對(duì)應(yīng)的靶點(diǎn)基因?qū)隒ytoscape 3.2.1軟件中，構(gòu)建“柴胡-黃芪”藥對(duì)的“中藥-成分-靶點(diǎn)”網(wǎng)絡(luò)圖，以可視化圖形直觀展示藥物成分與潛在靶點(diǎn)間的作用關(guān)系，并借助該軟件的“Cyto NCA”插件進(jìn)行拓?fù)鋵W(xué)分析。

1.3 疾病靶點(diǎn)基因的篩選

以“Minimal change nephropathy”“Focal segmental glomurular sclerosis”“Membranous nephropathy”“Diabetic nephropathy”等足細(xì)胞病變的相關(guān)疾病為關(guān)鍵詞，在OMIM數(shù)據(jù)庫（http：//omim.org/）、DrugBank數(shù)據(jù)庫（https：//www.drugbank.ca/）和DigSee在線文本（http：//210.107.182.61/geneSearch/）中檢索與足細(xì)胞病變相關(guān)基因。

1.4 蛋白質(zhì)相互作用網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建

將柴胡、黃芩活性成分潛在靶點(diǎn)蛋白的對(duì)應(yīng)基因與足細(xì)胞病變相關(guān)基因分別上傳至Venny 2.1.0在線作圖工具（http：//bioinfogp.cnb.csic.es/tools/venny/index.html）中，繪制韋恩圖以獲取交集基因。將“柴胡-黃芩”與足細(xì)胞病變的交集基因?qū)隨TRING數(shù)據(jù)庫（https：//string-db.org）中，獲取交集基因蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用關(guān)系（PPI）網(wǎng)絡(luò)圖，并通過Cytoscape 3.2.1軟件的“CytoNCA”插件對(duì)PPI網(wǎng)絡(luò)進(jìn)行拓?fù)鋵W(xué)分析，獲取節(jié)點(diǎn)的節(jié)點(diǎn)度、介度性和中心緊密度等網(wǎng)絡(luò)拓?fù)涮卣髦?。其中，?jié)點(diǎn)度指和該節(jié)點(diǎn)相關(guān)聯(lián)的邊的條數(shù)，介度性指經(jīng)過網(wǎng)絡(luò)中某一點(diǎn)的最短路徑數(shù)目在所有節(jié)點(diǎn)的最短路徑數(shù)目中所占的比例，中心緊密度指該節(jié)點(diǎn)到網(wǎng)絡(luò)中其他所有節(jié)點(diǎn)的平均距離的倒數(shù);三者的值越高表示該節(jié)點(diǎn)在網(wǎng)絡(luò)中越重要[9]。

1.5 基因本體（GO）功能注釋和京都基因與基因組百科全書（KEGG）信號(hào)通路富集

基于DAVID數(shù)據(jù)庫（https：//david.ncifcrf.gov/）對(duì)“柴胡-黃芩”與足細(xì)胞病變的交集基因進(jìn)行GO功能注釋和KEGG通路富集分析。設(shè)置物種為“Homo sapiens（人）”，標(biāo)識(shí)符（Identifier）為“Official gene symbol（官方名稱）”，保留P<0.05的富集條目，并按照P值從小到大進(jìn)行排序。選擇排名前20位的條目導(dǎo)入OmicShare Tools在線作圖平臺(tái)（http：//www.omicshare.com/tools/index.php/），實(shí)現(xiàn)富集分析結(jié)果的可視化。

2 結(jié)果

2.1 “柴胡-黃芩”藥對(duì)化學(xué)成分篩選結(jié)果

基于TCMSP數(shù)據(jù)庫，在OB≥30%、DL≥0.18的篩選條件下共檢索到52種化學(xué)成分，剔出無對(duì)應(yīng)靶點(diǎn)的化學(xué)成分后，最終共篩選得到活性化學(xué)成分44種。共有13種成分來自柴胡、32種化學(xué)成分來自黃芩，其中豆甾醇為柴胡、黃芩相同成分?！安窈?黃芩”活性化學(xué)成分基本信息詳見表1。

2.2 “中藥-成分-靶點(diǎn)”網(wǎng)絡(luò)圖分析結(jié)果

“柴胡-黃芪”藥對(duì)的“中藥-成分-靶點(diǎn)”網(wǎng)絡(luò)圖詳見圖1[圖中，節(jié)點(diǎn)代表中藥及其對(duì)應(yīng)的活性成分（活性成分標(biāo)簽由M+TCMSP編號(hào)最后4/5位數(shù)字表示）、靶點(diǎn)蛋白，連線代表中藥與活性成分、活性成分與潛在靶點(diǎn)間的關(guān)系]。由圖1所知，該圖共包含節(jié)點(diǎn)267個(gè)、連線834條。其中，中藥節(jié)點(diǎn)2個(gè)、活性成分節(jié)點(diǎn)44個(gè)、靶點(diǎn)蛋白節(jié)點(diǎn)221個(gè)。拓?fù)鋵W(xué)分析結(jié)果顯示，該網(wǎng)絡(luò)中潛在作用靶點(diǎn)較多的化合物為槲皮素、山柰酚、漢黃芩素、黃芩素、β-谷甾醇等，節(jié)點(diǎn)度值依次為149、51、45、37、37;節(jié)點(diǎn)度值較高靶點(diǎn)蛋白依次為前列腺素內(nèi)過氧化物合酶2（PTGS2，又稱COX-2）、PTGS1、核受體共激活因子2（NCOA2）、熱休克蛋白90α（HSP90α）、雄激素受體（AR）等，分別與37、30、25、25、22個(gè)活性成分相關(guān)聯(lián)。

2.3 “柴胡-黃芩”作用靶點(diǎn)與足細(xì)胞病變相關(guān)靶點(diǎn)交集基因篩選結(jié)果

經(jīng)檢索獲取足細(xì)胞病變相關(guān)基因140個(gè)、柴胡作用靶點(diǎn)186個(gè)、黃芩作用靶點(diǎn)119個(gè)。將其導(dǎo)入Venny2.1.0在線作圖工具制作韋恩圖（見圖2）后，獲取“柴胡-黃芩”作用靶點(diǎn)與足細(xì)胞病變交集基因20個(gè)，其中9個(gè)為柴胡與黃芩共同作用靶點(diǎn)[PTGS2、VEGFA、MMP9、TNF、IL6、MCP1（又稱CCL2）、TGFB1、IL8（又稱CXCL8）、CDKN1A]。

2.4 PPI網(wǎng)絡(luò)的構(gòu)建與分析結(jié)果

“柴胡-黃芩”作用靶點(diǎn)與足細(xì)胞病變相關(guān)靶點(diǎn)交集基因的PPI網(wǎng)絡(luò)圖見圖3（圖中，節(jié)點(diǎn)表示交集基因?qū)?yīng)蛋白，每條邊表示PPI關(guān)系）。拓?fù)鋵W(xué)分析結(jié)果顯示，該網(wǎng)絡(luò)圖包含節(jié)點(diǎn)20個(gè)、連線110條;根據(jù)中心度、介度性、中心緊密度等參數(shù)判定，MMP9、VEGFA、IL6、TNF、PTGS2等基因處于核心位置，其拓?fù)鋵W(xué)參數(shù)詳見表2（由于RUNX1T1未與其他蛋白相連，故表中無其參數(shù)）。

2.5 GO基因注釋與KEGG通路富集結(jié)果

通過GO基因注釋分析得到154個(gè)條目（P<0.05），包括生物過程條目139個(gè)、細(xì)胞組成條目8個(gè)、分子功能條目7個(gè)。生物過程主要以一氧化氮生物合成過程的正調(diào)控、炎癥反應(yīng)、免疫反應(yīng)等為主要富集條目;細(xì)胞組成主要涉及細(xì)胞外間隙、胞外區(qū)、質(zhì)膜外側(cè)等;分子功能主要涉及蛋白質(zhì)結(jié)合、細(xì)胞因子活性、生長(zhǎng)因子活性等，詳見表3、表4、表5。

KEGG通路富集獲得條目47個(gè)（P<0.05）。其中，主要富集條目為細(xì)胞因子-細(xì)胞因子受體相互作用、類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎、瘧疾、癌癥信號(hào)通路等。“柴胡-黃芪”作用靶點(diǎn)與足細(xì)胞病變相關(guān)靶點(diǎn)交集基因的KEGG通路富集分析結(jié)果（前20位）見圖4（圖中，縱坐標(biāo)為通路名稱，橫坐標(biāo)為富集因子，氣泡大小表示富集于該條目上的基因個(gè)數(shù)，氣泡越大，表示該條目富集個(gè)數(shù)越多;氣泡顏色表示P值），KEGG通路富集信息表（前20條）見表6。

3 討論

辛通暢絡(luò)法系天津市名中醫(yī)曹式麗教授的特色中醫(yī)腎病學(xué)術(shù)觀點(diǎn)。在前期臨床與基礎(chǔ)研究過程中，本課題組以具有典型足細(xì)胞病變特征的局灶節(jié)段性腎小球硬化（FSGS）模型大鼠為研究對(duì)象，以辛通暢絡(luò)法之載體——復(fù)方腎蘇Ⅱ的相關(guān)作用機(jī)制闡釋為切入點(diǎn)，開展了系列研究，證實(shí)了復(fù)方腎蘇Ⅱ可有效減少FSGS模型大鼠尿蛋白排泄，有效延緩足細(xì)胞形態(tài)變化及凋亡進(jìn)程[6，10-11]。同時(shí)，本課題組基于系膜增生性腎小球腎炎（MsPGN）大鼠模型的研究結(jié)果表明，復(fù)方腎蘇Ⅱ可有效調(diào)控IL6介導(dǎo)的腎組織免疫損傷[12]。盡管辛通暢絡(luò)法系列研究的前期結(jié)果已提示復(fù)方腎蘇Ⅱ具有多相調(diào)控足細(xì)胞病變的可能性，但現(xiàn)有研究?jī)?nèi)容往往是根據(jù)跟蹤現(xiàn)代醫(yī)學(xué)、分子生物學(xué)相關(guān)機(jī)制新發(fā)現(xiàn)而確定的，難免存在“散、淺、雜”的局限性，科研思路與研究?jī)?nèi)容亟待創(chuàng)新、優(yōu)化。復(fù)方腎蘇Ⅱ之君藥“柴胡-黃芩”系曹式麗教授蛋白尿中醫(yī)臨證治療之“辛通暢絡(luò)”常用藥對(duì)，且其單體成分亦是復(fù)方腎蘇Ⅱ的重要藥效成分[13];加之柴胡、黃芩所具有的廣泛生物活性，涵蓋抗氧化、抑制環(huán)氧合酶、抗炎等多種藥理作用，且二味藥材配伍后應(yīng)用，可增加柴胡皂苷、黃芩苷等有效成分的溶出，增強(qiáng)抗炎、抗氧化等藥理效應(yīng)[14]。因此，筆者認(rèn)為，通過網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)技術(shù)進(jìn)行復(fù)方腎蘇Ⅱ之君藥“柴胡-黃芩”藥對(duì)干預(yù)足細(xì)胞病變潛在靶點(diǎn)的預(yù)測(cè)，存在提升科研創(chuàng)新能力、進(jìn)而拓展該方整體科研思路與內(nèi)容的可能性。

一般認(rèn)為，正常足細(xì)胞由胞體、主突及足突構(gòu)成。其中，相鄰足突交錯(cuò)錨定于GBM，并形成裂孔隔膜（SD）。SD由基因、細(xì)胞活性因子及信號(hào)通路等多層次調(diào)控，以防止大分子蛋白漏出[15]。病理狀態(tài)下，以細(xì)胞骨架重構(gòu)、黏附性降低、遷移性升高以及凋亡發(fā)生為主要表現(xiàn)的足細(xì)胞病變將最終導(dǎo)致足細(xì)胞自GBM脫落[16];與此同時(shí)，殘存的足細(xì)胞由于胞體的代償性肥大、足突的增寬融合、腎小球?yàn)V過屏障通透性的異常增加，從而導(dǎo)致蛋白尿的產(chǎn)生[17]。上述足細(xì)胞病變特點(diǎn)是闡釋“柴胡-黃芩”乃至復(fù)方腎蘇Ⅱ足細(xì)胞病變防治機(jī)制的重要切入點(diǎn)。

本研究結(jié)果表明，槲皮素、山柰酚、漢黃芩素、黃芩素、β-谷甾醇等作用靶點(diǎn)較多，為“柴胡-黃芩”主要活性成分。PPI拓?fù)鋵W(xué)分析結(jié)果顯示，MMP9、VEGFA、IL6、TNF、PTGS2（又稱COX-2）等靶點(diǎn)處于網(wǎng)絡(luò)核心位置。目前認(rèn)為，腎臟基質(zhì)金屬蛋白酶9（MMP9）多源于足細(xì)胞，MMP9基因啟動(dòng)子位點(diǎn)的特異性去甲基化參與并調(diào)節(jié)了高糖培養(yǎng)基中人足細(xì)胞上皮細(xì)胞向間充質(zhì)細(xì)胞轉(zhuǎn)分化（EMT）的發(fā)生[18];IL6作為重要炎癥因子，可通過信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)及轉(zhuǎn)錄激活因子3/肌球蛋白輕鏈阻斷局部黏著斑動(dòng)態(tài)，破壞細(xì)胞骨架組織，導(dǎo)致足細(xì)胞遷移運(yùn)動(dòng)增加[19];VEGFA與足細(xì)胞損傷密切相關(guān)，其可通過調(diào)控足細(xì)胞標(biāo)志蛋白Nephrin的表達(dá)而誘導(dǎo)足突融合[20];TNF與足細(xì)胞功能障礙和凋亡密切相關(guān)，其功能喪失可顯著逆轉(zhuǎn)足細(xì)胞凋亡[21]。此外，COX-2為腎血流動(dòng)力學(xué)及炎癥反應(yīng)的關(guān)鍵調(diào)節(jié)因子，在足細(xì)胞損傷時(shí)異常激活，故抑制COX-2的表達(dá)可使足細(xì)胞免受損傷[22]。以上內(nèi)容提示，柴胡、黃芩活性成分可能主要通過調(diào)控上述靶點(diǎn)來實(shí)現(xiàn)對(duì)足細(xì)胞骨架損傷、遷移、凋亡及炎癥反應(yīng)等病理進(jìn)程的多相調(diào)控。

信號(hào)通路作為細(xì)胞外分子信號(hào)經(jīng)細(xì)胞膜傳入細(xì)胞內(nèi)發(fā)揮效應(yīng)的一系列酶促反應(yīng)，在諸多生理、病理過程中發(fā)揮重要作用[23]。KEGG通路富集結(jié)果顯示，癌癥、細(xì)胞因子-細(xì)胞因子受體相互作用、類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎、瘧疾、乙型肝炎等相關(guān)信號(hào)通路可能是“柴胡-黃岑”藥對(duì)干預(yù)足細(xì)胞病變的主要調(diào)節(jié)通路。Toll樣受體（TLR）信號(hào)通路作為炎癥反應(yīng)的經(jīng)典信號(hào)通路之一，是瘧疾、類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎等疾病的重要調(diào)節(jié)機(jī)制，亦與NF-κB信號(hào)通路共同參與足細(xì)胞損傷過程[24-25]。嘌呤霉素氨基核苷可導(dǎo)致體外培養(yǎng)的足細(xì)胞中TLR4表達(dá)量增多，進(jìn)而導(dǎo)致NF-κB活化，誘發(fā)炎癥反應(yīng)[26];反之，NF-κB的活化亦可促進(jìn)足細(xì)胞TLR4高表達(dá)，導(dǎo)致炎性損傷[27]。既往研究顯示，TGF信號(hào)通路參與細(xì)胞生長(zhǎng)、分化、凋亡等多個(gè)細(xì)胞過程[28]，從屬于癌癥、細(xì)胞因子-細(xì)胞因子受體相互作用等信號(hào)通路[29-30]。有研究指出，在高糖刺激下，TGF-β/Smad信號(hào)通路激活，可誘導(dǎo)足細(xì)胞凋亡[31]。磷脂酰肌醇-3-激酶（PI3K）/蛋白激酶B（Akt）作為細(xì)胞生長(zhǎng)、代謝、凋亡重要通路，是常見的癌癥信號(hào)通路[32]。在足細(xì)胞病變中，由CD2相關(guān)蛋白（CD2AP）介導(dǎo)PI3K募集于質(zhì)膜，并刺激足細(xì)胞中PI3K依賴的Akt信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)，誘導(dǎo)足細(xì)胞結(jié)構(gòu)、功能完整性損傷，甚至凋亡[33]。前期辛通暢絡(luò)法系列研究結(jié)果表明，復(fù)方腎蘇Ⅱ可通過抑制Notch-PI3K/Akt通路異常激活，逆轉(zhuǎn)足細(xì)胞EMT進(jìn)程，修復(fù)足細(xì)胞損傷[11]，這在一定程度上提升了其他KEGG富集通路預(yù)測(cè)結(jié)果的可靠性。

綜上所述，本研究運(yùn)用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)方法，通過對(duì)冗繁數(shù)據(jù)信息的整合分析，初步實(shí)現(xiàn)了對(duì)“柴胡-黃芩”干預(yù)足細(xì)胞病變可能靶點(diǎn)、機(jī)制途徑與生物過程的預(yù)測(cè)。然而，網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)尚處于探索階段，數(shù)據(jù)來源僅限于在線開源數(shù)據(jù)庫，其數(shù)據(jù)涵蓋范圍與可靠性仍有待提高，靶點(diǎn)蛋白及其與信號(hào)通路間的作用機(jī)制尚處于生物信息分析層面，仍需基礎(chǔ)與臨床研究予以進(jìn)一步驗(yàn)證。

參考文獻(xiàn)

[ 1 ] CHENG H，HARRIS RC. The glomerulus：a view from the outside-the podocyte[J]. Int J Biochem Cell Biol，2010，42（9）：1380-1387.

[ 2 ] HANAMURA K，TOJO A，F(xiàn)UJITA T. Urinary and glomerular podocytes in patients with chronickidney diseases[J]. Clin Exp Nephrol，2014，18（1）：95-103.

[ 3 ] 孫柯，梅長(zhǎng)林.全球慢性腎臟病患病率評(píng)估的局限性[J].中國(guó)臨床醫(yī)學(xué)，2017，24（6）：958-963.

[ 4 ] 竇一田，楊洪濤，林燕，等.名老中醫(yī)曹式麗辛通暢絡(luò)法治療特發(fā)性足細(xì)胞病學(xué)術(shù)經(jīng)驗(yàn)擷要[J].遼寧中醫(yī)雜志，2017，44（8）：1604-1606.

[ 5 ] 解靜，高杉，李琳，等.網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)在中藥領(lǐng)域中的研究進(jìn)展與應(yīng)用策略[J].中草藥，2019，50（10）：2257-2265.

[ 6 ] 竇一田，高先樓，支勇.腎蘇Ⅱ?qū)衷罟?jié)段性腎小球硬化病理形態(tài)學(xué)的影響[J].遼寧中醫(yī)雜志，2010，37（3）：551-553.

[ 7 ] 梁棟.腎蘇Ⅱ?qū)衷罟?jié)段性腎小球硬化患者氧化低密度脂蛋白、血脂及血肌酐的影響[J].山西中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2014，15（2）：38-40.

[ 8 ] 顏學(xué)玲，時(shí)政，張?jiān)?金蕎麥中優(yōu)效組分的網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)研究[J].中國(guó)藥房，2020，31（5）：558-563.

[ 9 ] 任曉龍，呂琳度.網(wǎng)絡(luò)重要節(jié)點(diǎn)排序方法綜述[J].科學(xué)通報(bào)，2014，59（13）：1175-1197.

[10] 竇一田，高先樓，支勇.腎蘇Ⅱ?qū)衷罟?jié)段性腎小球硬化的保護(hù)作用[J].遼寧中醫(yī)雜志，2010，37（7）：1376-1377.

[11] 尚懿純，曹式麗，楊洪濤，等.腎蘇Ⅱ方對(duì)局灶節(jié)段性腎小球硬化大鼠Notch-PI3K/PKB通路串話及足細(xì)胞EMT的影響[J].中華中醫(yī)藥雜志，2016，31（12）：5271-5276.

[12] 竇一田，高先樓，曹式麗.腎蘇Ⅱ?qū)ο的ぴ錾阅I炎模型大鼠腎病變及白細(xì)胞介素-6的影響[J].中醫(yī)雜志，2011，52（13）：1131-1134.

[13] 竇一田，瞿晶田，王玉明，等.復(fù)方腎蘇Ⅱ的HPLC指紋圖譜及化學(xué)成分鑒定[J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2018，24（20）：68-74.

[14] 張程亮，蘭露露，任秀華，等.柴胡黃芩藥對(duì)的基礎(chǔ)研究探析[J].世界科學(xué)技術(shù)（中醫(yī)藥現(xiàn)代化），2019，21（1）：33-37.

[15] SU Y，XIA W，LI J，et al. Relating conformation to function in integrinα5β1[J]. Proc Natl Acad Sci USA，2016，113（27）：3872-3881.

[16] MICHIO N. Podocyte injury and its consequences[J]. Kidney Int，2016，89（6）：1221-1230.

[17] 石格，毛志敏，萬毅剛，等.糖尿病腎病足細(xì)胞損傷的病理機(jī)制及中藥的干預(yù)作用[J].中國(guó)中藥雜志，2016，41（13）：2416-2421.

[18] LING L，CHEN LB，ZHANG CN，et al. High glucose induces podocyte epithelialtomesenchymal transition by demethylationmediated enhancement of MMP9 expression[J]. Mol Med Rep，2018，17（4）：5642-5651.

[19] HE FF，BAO D，SU H，et al. IL-6 increases podocyte motility via MLC-mediated focal adhesion impairment and cytoskeleton disassembly[J]. J Cell Physiol，2018，233（9）：7173-7181.

[20] 朱曉娜，王玉環(huán)，吳娟娟，等.奧美沙坦酯對(duì)糖尿病腎病大鼠腎臟保護(hù)作用及對(duì)腎組織Nephrin、VEGF表達(dá)的影響[J].山東醫(yī)藥，2019，59（14）：15-18.

[21] CHRISTOPHER EP，GLORIA MD，F(xiàn)ARAH L，et al. Local TNF causes NFATc1-dependent cholesterol-mediated podocyte injury[J]. J Clin Invest，2016，126（9）：3336- 3350.

[22] SHIPRA A，ADAM JG，MELINDA AC，et al. Albumin- induced podocyte injury and protection are associated with regulation of COX-2[J]. Kidney Int，2014，86（6）：1150-1160.

[23] 廖建釗，章曉云，張璇.骨性關(guān)節(jié)炎發(fā)生發(fā)展中的分子信號(hào)通路[J].中國(guó)組織工程研究，2020，24（21）：3394-3400.

[24] LEORATTI FM，F(xiàn)ARIAS L，ALVES FP，et al. Variants in the Toll-like receptor signaling pathway and clinical outcomes of malaria[J]. J Infect Dis，2008，198（5）：772-780.

[25] Li XF，XUT，WANGYR，et al. Toll-like receptor-4 signaling：a new potential therapeutic pathway for rheumatoid arthritis[J]. Rheumatol Int，2014，34（11）：1613-1614.

[26] 柳云，任紅旗，王增慧，等.甘西鼠尾草總酚酸提取物對(duì)嘌呤霉素氨基核苷誘導(dǎo)損傷的足細(xì)胞中Toll樣受體4表達(dá)的影響[J].中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合腎病雜志，2017，18（8）：672-675.

[27] WEI M，LI Z，XIAO L，et al. Effects of ROS-relative NF- κB signaling on high glucose-induced TLR4 and MCP-1 expression in podocyte injury[J]. Mol Immunol，2015，68（2）：261-271.

[28] ITATANI Y，KAWADA K，SAKAI Y. Transforming growth factor-β signaling pathway in colorectal cancer and its tumor microenvironment[J]. Int J Mol Sci，2019.DOI：10.3390/ijms20235822.

[29] 韓曉春，趙海軍，王媛，等.基于KEGG通路富集分析的薏苡仁不同成分對(duì)Cytokine-cytokine receptor interaction靶基因作用[J].中華中醫(yī)藥雜志，2019，34（9）：4029- 4032.

[30] 李文娜，李慶偉，王浩.TGF-β對(duì)腫瘤微環(huán)境中免疫監(jiān)視及細(xì)胞外基質(zhì)的調(diào)控作用[J].中國(guó)生物化學(xué)與分子生物學(xué)報(bào)，2020，36（3）：267-274.

[31] 曹璐璐，楊宇航，謝美雯，等.疏利三焦法通過轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β途徑調(diào)節(jié)糖尿病腎病足細(xì)胞凋亡機(jī)制的研究[J].河北中醫(yī)，2019，41（3）：424-428.

[32] 郭威，張沖，鐘先榮. PI3K/AKT信號(hào)傳導(dǎo)通路在惡性腫瘤中的研究進(jìn)展[J].河北醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，2018，39（6）：734-738.

[33] QI R，SHENG YY. CD2-associated protein participates in podocyte apoptosis via PI3K/Akt signaling pathway[J]. J Recept Signal Transduct Res，2016，36（3）：288-291.

（收稿日期：2020-10-15 修回日期：2021-01-08）

（編輯：林 靜）