萬(wàn)洋洋，接晶，陶國(guó)華

（南通大學(xué)第二附屬醫(yī)院檢驗(yàn)科，江蘇226001）

乳腺癌在世界范圍內(nèi)是最常見(jiàn)的女性惡性腫瘤，2018年約210萬(wàn)乳腺癌新發(fā)病例，約62 679例患者死于乳腺癌[1]。據(jù)美國(guó)最新數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)，乳腺癌發(fā)病率在女性腫瘤中居第1位，死亡率居第2位[2]。在我國(guó)乳腺癌死亡率占女性腫瘤第5位，女性乳腺癌發(fā)病率每年增加3%～4%，呈逐年上升趨勢(shì)。迄今為止，乳腺癌的發(fā)病機(jī)制尚未完全闡明。

Nectin是近年來(lái)發(fā)現(xiàn)的一類Ca2+不依賴的免疫球蛋白超家族分子，主要包括Nectin 1～Nectin 4[3]。Nectin 1～Nectin 3主要分布在正常組織中，而Nectin 4主要在腫瘤組織中過(guò)表達(dá)[4]。Nectin 4屬于細(xì)胞膜表面受體，可以影響細(xì)胞間緊密連接，參與細(xì)胞間粘附，進(jìn)而調(diào)控細(xì)胞運(yùn)動(dòng)、分化及病毒入侵等活動(dòng)。許多研究證實(shí)，Nectin 4分子在肺癌、胃癌、乳腺癌及卵巢癌組織中表達(dá)水平升高，并與腫瘤進(jìn)展及預(yù)后密切相關(guān)[5]。本研究首先通過(guò)數(shù)據(jù)庫(kù)分析乳腺癌大樣本中Nectin 4的表達(dá)及其與生存時(shí)間的關(guān)系，同時(shí)選擇2017年3月—2018年6月本院乳腺外科手術(shù)治療的62例乳腺癌及59例乳腺良性腫瘤患者，檢測(cè)組織及血清中Nectin 4的表達(dá)水平，探討Nectin 4檢測(cè)在乳腺癌診斷及病情監(jiān)測(cè)中的應(yīng)用價(jià)值。

1 資料與方法

1.1 一般資料行外科手術(shù)的121例乳腺疾病女性患者，其中經(jīng)病理診斷為乳腺癌62例，年齡32～79歲，平均54.7歲，其中導(dǎo)管癌52例，粘液腺癌1例，小葉癌2例，上皮不典型增生2例，髓樣癌1例，粉刺癌1例，其它癌變3例。良性乳腺疾病59例，年齡17～84歲，平均40.6歲，其中纖維腺瘤44例。隨機(jī)抽取本院同期女性體檢健康者40例，年齡24～68歲，平均47.8歲。

1.2 檢測(cè)方法（1）血清Nectin 4表達(dá)：抽取受檢對(duì)象早晨空腹肘靜脈血4 mL，加入無(wú)任何抗凝劑的真空采血管中，室溫放置2 h，3 000 r/min離心15 min，取血清置-70℃冰箱保存待測(cè)。采用ELISA法檢測(cè)，嚴(yán)格按照試劑盒（R&B公司）說(shuō)明書(shū)操作。（2）組織Nectin 4表達(dá)：采用免疫組織化學(xué)法。將石蠟切片置于新鮮二甲苯中浸泡脫蠟2次，然后依次置于100%、95%、85%、60%梯度酒精中，再置于蒸餾水中，脫二甲苯和水化。加入抗原修復(fù)液，高壓鍋煮沸修復(fù)。取出玻片，PBS緩沖液沖洗，加入鼠抗人Netcin 4抗體，4℃孵育過(guò)夜。PBS緩沖液沖洗后加入二抗，室溫孵育30 min。PBS緩沖液沖洗，加入顯色劑顯色5 min。蘇木素復(fù)染，流水沖洗后放入85%、95%、100%梯度酒精中脫水，二甲苯中透明，中性樹(shù)膠和蓋玻片封片。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理應(yīng)用SPSS 19.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。計(jì)量資料以±s表示，多組間比較采用單因素方差分析，兩組間比較采用t檢驗(yàn)。采用ROC曲線分析血清Nectin 4對(duì)乳腺癌的診斷價(jià)值。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 TCGA數(shù)據(jù)庫(kù)中Nectin 4在乳腺癌中的表達(dá)水平及其與生存時(shí)間的關(guān)系TCGA數(shù)據(jù)庫(kù)中乳腺癌大樣本的測(cè)序結(jié)果顯示，乳腺癌患者Nectin 4 mRNA水平明顯高于正常對(duì)照組（圖1A），Nectin 4與乳腺癌患者總生存率無(wú)明顯相關(guān)性（圖1B）。

圖1 Nectin 4在乳腺癌中表達(dá)水平及其與預(yù)后的關(guān)系

2.2 乳腺癌和乳腺良性腫瘤患者組織Nectin 4表達(dá)比較本研究對(duì)62例乳腺癌及59例乳腺良性腫瘤患者的石蠟切片進(jìn)行免疫組化檢測(cè)，顯示Nectin 4在乳腺癌組織中表達(dá)明顯增高，而乳腺良性腫瘤組織中未觀察到明顯的Nectin 4表達(dá)（圖2）。

圖2 乳腺癌及乳腺良性腫瘤組織中Nectin 4免疫組化檢測(cè)結(jié)果

2.3 乳腺癌和乳腺良性腫瘤患者血清Nectin 4表達(dá)比較乳腺癌患者血清Nectin 4水平高于乳腺良性腫瘤組及正常對(duì)照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），而乳腺良性腫瘤組血清Nectin 4水平與正常對(duì)照組比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。見(jiàn)表1。

表1 乳腺癌和乳腺良性腫瘤患者血清Nectin 4水平ng/L

2.4 不同臨床分期乳腺癌患者血清Nectin 4表達(dá)比較III/IV期乳腺癌患者血清Nectin 4水平高于I/II期患者，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。見(jiàn)表2。

表2 不同臨床分期乳腺癌患者血清Nectin 4水平ng/L

2.5 血清Nectin 4水平與乳腺癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的關(guān)系乳腺癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組血清Nectin 4水平高于未轉(zhuǎn)移組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見(jiàn)表3。

表3 血清Nectin 4水平與乳腺癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的關(guān)系ng/L

2.6 血清Nectin 4在乳腺癌診斷中的價(jià)值ROC曲線分析發(fā)現(xiàn)，血清Nectin 4對(duì)乳腺癌診斷的靈敏度為77.4%，特異度為67.8%，陽(yáng)性似然比2.4，陰性似然比33.3%，曲線面積（AUC）為0.722，標(biāo)準(zhǔn)誤為0.047，95%可信區(qū)間下限0.630，上限0.814，Youden指數(shù)0.45，表明血清Nectin 4可以輔助診斷乳腺癌（圖3）。

圖3 血清Nectin 4 ROC曲線分析

3 討 論

盡管外科手術(shù)聯(lián)合放療化療明顯改善了乳腺癌患者的預(yù)后，但晚期轉(zhuǎn)移及乳腺癌復(fù)發(fā)患者的病死率仍較高[6]。因此，尋找新的乳腺癌分子標(biāo)志物以及治療方案是提高患者生存率的必經(jīng)之路。Nectin 4主要通過(guò)調(diào)節(jié)上皮細(xì)胞及內(nèi)皮細(xì)胞的連接來(lái)介導(dǎo)細(xì)胞間黏附[7]。有研究報(bào)道，Nectin 4還是犬科病毒的上皮細(xì)胞受體，并與細(xì)胞毒性相關(guān)[8]。Nectin 4在成年人正常組織中多不表達(dá)，而在腫瘤組織中高表達(dá)[9]。過(guò)表達(dá)的Nectin 4通過(guò)活化AKT信號(hào)通路促進(jìn)上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化（EMT），導(dǎo)致甲狀腺癌的增殖、遷移和侵襲[4]。Nectin 4高表達(dá)與卵巢癌不良預(yù)后有關(guān)[10]；Nectin 4蛋白在非小細(xì)胞性肺癌中的表達(dá)水平明顯升高，有望成為肺癌診斷及治療的分子靶點(diǎn)[11]。

本研究對(duì)TCGA數(shù)據(jù)庫(kù)中乳腺癌大樣本測(cè)序結(jié)果進(jìn)行分析，發(fā)現(xiàn)乳腺癌組織中Nectin 4 mRNA表達(dá)水平明顯升高。本研究結(jié)果顯示，乳腺癌組織中Nectin 4表達(dá)呈強(qiáng)陽(yáng)性，乳腺癌患者血清中Nectin 4水平明顯高于乳腺良性腫瘤和正常對(duì)照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），與其它文獻(xiàn)報(bào)道的結(jié)果一致，提示Nectin 4高表達(dá)可能與乳腺細(xì)胞的惡性進(jìn)展有關(guān)。目前有報(bào)道Nectin 4表達(dá)水平與乳腺癌組織病理類型相關(guān)，但由于本研究樣本量小，且大多數(shù)為浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌，其它類型乳腺癌較少，無(wú)法進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。本研究結(jié)果顯示，乳腺癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組血清Nectin 4水平高于未轉(zhuǎn)移組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），說(shuō)明Nectin 4與乳腺癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。其機(jī)制可能是Nectin 4高表達(dá)有利于細(xì)胞間黏附斷裂，細(xì)胞運(yùn)動(dòng)增強(qiáng)，從而引起腫瘤細(xì)胞向周圍組織浸潤(rùn)及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移。ROC曲線分析發(fā)現(xiàn)，血清Nectin 4對(duì)乳腺癌診斷的靈敏度為77.4%，特異度為67.8%。

綜上所述，乳腺癌組織及血清中Nectin 4高表達(dá)，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者Nectin 4表達(dá)更高，提示Nectin 4高表達(dá)與乳腺癌的發(fā)生發(fā)展有關(guān)，并促進(jìn)乳腺癌細(xì)胞的浸潤(rùn)及轉(zhuǎn)移，Nectin 4有可能成為乳腺癌診斷和預(yù)后監(jiān)測(cè)的潛在分子標(biāo)志物。