漆 平，楊瑾銜，張繼東

(遵義醫(yī)科大學(xué) 免疫學(xué)教研室，貴州省教育廳基因檢測(cè)與治療特色重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，貴州 遵義 563099)

胰腺癌(Pancreatic cancer，PC)是引起癌癥相關(guān)死亡的主因之一，預(yù)后極差，5年生存率不超過10%。胰腺腫瘤包括由內(nèi)分泌腺或外分泌腺引起的腫瘤[1]，其中最常見且最具侵襲性的腫瘤多來源于外分泌腺。在世界范圍內(nèi)，胰腺癌的發(fā)病率正在上升，在過去的30年里已經(jīng)翻了一倍多[2]。在2018年，胰腺癌是全球第13大常見癌癥，新發(fā)病例458 918例，是第7大癌癥相關(guān)死亡原因，死亡人數(shù)為432 242人[3]。隨著人們對(duì)中醫(yī)文化的逐漸重視，中藥在心腦血管疾病、免疫性疾病、代謝性疾病、糖尿病、腫瘤等疾病中均顯示了特殊療效。近年來，中藥提取物對(duì)胰腺癌治療中的作用越來越引起人們廣泛關(guān)注。

研究發(fā)現(xiàn),中藥有效成分具有抗腫瘤、抗炎保肝、防治慢性病、抑菌,甚至對(duì)2020年初爆發(fā)的新冠病毒也有一定功效[4]。因其多途徑、多靶點(diǎn)、毒副作用小等優(yōu)勢(shì)，中藥再一次引起研究者重視并成為當(dāng)下研究熱點(diǎn)。中藥提取物根據(jù)提取成分不同可大致分為生物堿類、甙、酸、多酚、多糖、萜類等，按照性狀不同可分植物油、浸膏、粉、晶狀體等?，F(xiàn)就中藥提取物對(duì)胰腺癌作用研究進(jìn)行述評(píng)。本文中，擬從生物堿、酮類、萜類、酯類、多酚類等中藥有效成分為出發(fā)點(diǎn)，我們著重討論了5種中藥提取物多酚類、酮類等成分在治療胰腺癌中的作用機(jī)制及效果，以期加深對(duì)胰腺癌中藥理解，為抗胰腺癌藥物研發(fā)提供參考。

1 多酚類化合物

多酚類化合物是植物的次生代謝產(chǎn)物,具有多個(gè)羥基的酚類結(jié)構(gòu),廣泛存在于多種植物中。因其具有抗腫瘤、抗氧化、預(yù)防牙周病[5]、抑制炎癥及抗肥胖等多種功能,在醫(yī)藥領(lǐng)域被廣泛地應(yīng)用。目前在多酚類中藥中，白藜蘆醇(Resveratrol)、丹皮酚和厚樸酚(Honokiol)等中藥應(yīng)用于胰腺癌治療的相關(guān)研究較多。雖關(guān)于治療胰腺癌中機(jī)制研究較多，但目前還未廣泛應(yīng)用于臨床。

白藜蘆醇是一種天然多酚化合物，具有多種生物學(xué)作用，如增殖抑制，抗氧化和神經(jīng)保護(hù)作用。Qin等[6]發(fā)現(xiàn)，在裸鼠胰腺癌皮下異種移植模型中，白藜蘆醇通過下調(diào)營(yíng)養(yǎng)剝奪自噬因子-1(NAF-1)表達(dá)，從而抑制胰腺癌干細(xì)胞侵襲和遷移能力。該研究提示白藜蘆醇可能通過靶向干預(yù)NAF-1，進(jìn)而抑制胰腺癌增殖和轉(zhuǎn)移。Cheng等[7]進(jìn)一步發(fā)現(xiàn)白藜蘆醇可以通過誘導(dǎo)細(xì)胞活性氧(ROS)的累積和激活Nrf2信號(hào)傳導(dǎo)抑制胰腺癌細(xì)胞中的NAF-1表達(dá)，從而完善了白藜蘆醇通過NAF-1靶點(diǎn)抑制胰腺癌發(fā)生發(fā)展的機(jī)制。同時(shí)，白藜蘆醇還可通過調(diào)節(jié)Shh及其下游信號(hào)傳導(dǎo)介質(zhì)(細(xì)胞周期蛋白D1、Bcl-2)表達(dá)，抑制胰腺癌增殖和上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化(EMT)。此外，F(xiàn)u等[8]還發(fā)現(xiàn)白藜蘆醇可通過上調(diào)miR-200家庭成員參與抑制EMT的發(fā)生。

和厚樸酚(Honokiol)是從傳統(tǒng)中藥厚樸的根皮、枝皮中,提取分離的一種帶有烯丙基的連苯二酚類化合物,是厚樸的主要有效成分之一。它具有多種藥理作用,包括抗血栓、抗炎和抗氧化等。余等[9]通過檢測(cè)和厚樸酚對(duì)4種人胰腺癌細(xì)胞株(PANC-1,CFPAC-1,ASPC-1,MIAPa Ca-2)增殖的影響，發(fā)現(xiàn)和厚樸酚誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的機(jī)制可能通過啟動(dòng)組織蛋白酶D(CTSD)參與細(xì)胞凋亡的途徑,上調(diào)CTSD表達(dá),誘導(dǎo)半胱天冬酶3(Caspase-3)活化，最終抑制胰腺癌細(xì)胞生長(zhǎng)。此外，楊慶龍等[10]證實(shí)和厚樸酚抑制胰腺癌細(xì)胞SW1990遷移和侵襲的另一機(jī)制可能是通過下調(diào)胰腺癌細(xì)胞WNT/β-CATENIN信號(hào)通路中關(guān)鍵蛋白β-CATENIN的表達(dá)來實(shí)現(xiàn)，進(jìn)而抑制EMT的發(fā)生。

丹皮酚是從沙地黃中分離提取，且具有抗菌和抗炎作用的一種酚類化合物。Cheng等[11]發(fā)現(xiàn)丹皮酚通過下調(diào)TGF-β1，p-SMAD2/SMAD2和p-SMAD3/SMAD3表達(dá)抑制TGF-β1/SMAD信號(hào)通路。這表明丹皮酚抗癌作用的潛在機(jī)制可能與抑制TGF-β1/SMAD信號(hào)傳導(dǎo)和EMT發(fā)生有關(guān)。

2 酮類化合物

酮類化合物是具有C6-C3-C6結(jié)構(gòu)的一類化合物。在自然界分布較廣，大多具有藥用價(jià)值，被廣泛用于免疫、抗腫瘤、抑菌及防治冠心病中。目前酮類化合物中藥中，木犀草素、黃芩素、銀杏葉黃酮、高良姜素等中藥提取物應(yīng)用于胰腺癌治療的相關(guān)研究較多。

木犀草素(Luteolin)是一種天然黃酮類物質(zhì)，廣泛存在于野菊花、金銀花、紫蘇等多種中藥中。Moeng等[12]通過評(píng)估木犀草素對(duì)胰腺癌細(xì)胞的生長(zhǎng)、腫瘤壞死因子相關(guān)凋亡誘導(dǎo)配體(Tumor necrosis factor related apoptosis-inducing ligand,TRAIL)、細(xì)胞毒性以及miRNA-301-3p水平的作用，發(fā)現(xiàn)經(jīng)木犀草素處理的PANC-1細(xì)胞中，與對(duì)照組相比PANC-1細(xì)胞增殖受到抑制，對(duì)TRAIL敏感，miR-301-3p表達(dá)水平顯著下降，且miR-301-3p靶向調(diào)控胱天蛋白酶-8(caspase-8)。該研究揭示木犀草素通過調(diào)控miR-301-3p提高TRAIL對(duì)癌細(xì)胞抗增殖作用。Huang等[13]發(fā)現(xiàn)，胰腺癌細(xì)胞株P(guān)ANC-1和SW1990經(jīng)IL-6處理后，活性增加的STAT3促進(jìn)上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化(EMT)與基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP)分泌。木犀草素可通過下調(diào)IL-6表達(dá)來抑制p-STAT的表達(dá)，抑制胰腺癌細(xì)胞侵襲、腺泡導(dǎo)管EMT的發(fā)生。這些研究進(jìn)一步證實(shí)了木犀草素可能成為一種新靶向STAT3信號(hào)的抗腫瘤潛力抑制劑。

黃芩素又稱為黃芩苷元，是傳統(tǒng)中藥黃芩中的主要有效成分之一，也是目前用于胰腺癌治療的主要中藥。Takahashi等[14]研究發(fā)現(xiàn)，黃芩素可能通過轉(zhuǎn)錄機(jī)制來降低抗凋亡BCL-2和MCL-1蛋白的表達(dá)，促進(jìn)胰腺癌細(xì)胞凋亡。Song等[15]發(fā)現(xiàn)經(jīng)黃芩素處理的胰腺癌細(xì)胞可以下調(diào)核轉(zhuǎn)錄因子，如SOX-2、OCT-4以及Shh信號(hào)通路成員。該研究提示了黃芩素可能通過Hedgehog通路有效抑制胰腺癌干細(xì)胞的增殖。另?yè)?jù)研究發(fā)現(xiàn)低劑量黃芩素(10μmol/L)聯(lián)合胰腺癌治療藥物吉西他濱對(duì)胰腺癌細(xì)胞PANC-1遷移具有很強(qiáng)抑制作用，而細(xì)胞周期結(jié)果表明，高劑量的黃芩素能夠?qū)⒁认侔?PC)細(xì)胞阻滯在S期[16]、G0/G1期[17]。這些研究提示含有黃芩素的聯(lián)合治療可能是改善PC臨床治療結(jié)果的一種有效策略。

高良姜素(3,5,7-三羥基黃酮)是傳統(tǒng)中藥高良姜的主要活性成分之一，具有廣泛的藥理活性。研究表明高良姜素通過抑制周期蛋白依賴性激酶4(CDK4)磷酸化有效抑制SMAD3接頭區(qū)域的Thr-179位點(diǎn)磷酸化。由于SMAD3是致癌過程中TGF-β1誘導(dǎo)的轉(zhuǎn)錄反應(yīng)的重要細(xì)胞內(nèi)介體，因此高良姜素作為SMAD3接頭區(qū)域磷酸化選擇性抑制劑，可能為胰腺癌藥物的選擇提供重要參考[18]。

銀杏葉的標(biāo)準(zhǔn)化提取物包含約24%的黃酮苷(主要為槲皮素，山奈酚和異鼠李素)和6%萜內(nèi)酯(其中2.6%～3.2%的銀杏內(nèi)酯)。據(jù)報(bào)道，山奈酚可有效抑制胰腺癌細(xì)胞增殖并誘導(dǎo)癌細(xì)胞凋亡，但其具體機(jī)制并不明確，且相關(guān)黃酮苷類研究較少[19]。新近研究發(fā)現(xiàn)銀杏內(nèi)酯通過抑制PAFR/NF-кB途徑增強(qiáng)吉西他濱對(duì)胰腺癌細(xì)胞敏感性[20]。銀杏葉的另一主要成分銀杏酸(Ginkgolic acid，GA)則可通過誘導(dǎo)AMP激活的蛋白激酶(AMPK)信號(hào)通路抑制胰腺癌細(xì)胞活性，并下調(diào)相關(guān)關(guān)鍵酶表達(dá)[21]。因此，對(duì)銀杏葉成分的進(jìn)一步研究為胰腺癌治療劑的研發(fā)提供新的理論依據(jù)。

3 內(nèi)酯類化合物

內(nèi)酯類化合物由于其天然豐度以及潛在的生物學(xué)和理化特性，在藥物研究中具有廣泛的應(yīng)用范圍。如大部分大環(huán)內(nèi)酯可作為抑菌抗生素，尤其對(duì)革蘭氏陽性菌具有廣譜性[22]。目前較廣泛用于胰腺癌治療研究中的內(nèi)酯類化合物中有小白菊內(nèi)酯、倍半萜內(nèi)酯和雷公藤甲素等。

小白菊內(nèi)酯(Parthenolide)是從菊科植物中提取的一種倍半萜內(nèi)酯化合物,具有多種生物和治療活性，被廣泛用于發(fā)熱、驅(qū)蟲和抗炎治療等。新近研究證實(shí)小白菊內(nèi)酯具有多種重要的藥理活性，如抗腫瘤[23]、抗病毒[24]、抗炎和抗動(dòng)脈粥樣硬化[25]等。研究發(fā)現(xiàn)[26]，小白菊內(nèi)酯對(duì)胰腺癌細(xì)胞處理24 h后，可通過誘導(dǎo)自噬抑制胰腺癌細(xì)胞生長(zhǎng)，且其半數(shù)最大抑制濃度(IC50)在7至9μM之間。另?yè)?jù)研究顯示[27]，小白菊內(nèi)酯可明顯降低BCL-2表達(dá)量,上調(diào)BAX基因表達(dá)水平，進(jìn)而抑制胰腺癌Panc-1細(xì)胞增殖。上述結(jié)果與三葉豆紫檀苷和高良姜素分別作用于結(jié)直腸癌和胰腺癌的靶點(diǎn)相同。Shi等[28]采用串聯(lián)親和色譜法探測(cè)小白菊內(nèi)酯潛在靶標(biāo)，發(fā)現(xiàn)小白菊內(nèi)酯通過靶向核糖體蛋白L10(RPL10)，進(jìn)而下調(diào)NF-κB信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑成員調(diào)節(jié)亞基IKKγ的表達(dá)。這提示小白菊內(nèi)酯可能通過干擾胰腺癌細(xì)胞中核糖體生物合成抑制胰腺癌增殖。

倍半萜內(nèi)酯(EEIHL)從藥用植物海百合(IHL)中提取。研究發(fā)現(xiàn)[29]，低劑量的EEIHL導(dǎo)致CFPAC-1細(xì)胞周期停滯在G0/G1期，高劑量的EEIHL可誘導(dǎo)胰腺癌細(xì)胞線粒體依賴性凋亡。此外，EEIHL可抑制信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)蛋白磷酸化和轉(zhuǎn)錄激活STAT3/AKT通路，這可能是導(dǎo)致細(xì)胞遷移受阻的原因之一。

雷公藤甲素(Triptolide，TP)又稱雷公藤內(nèi)酯、雷公藤內(nèi)酯醇，是從衛(wèi)矛科植物雷公藤的根、葉及果實(shí)中提取的一種環(huán)氧二萜內(nèi)酯化合物。近年來，相關(guān)研究表明雷公藤甲素具有顯著抗腫瘤效應(yīng)。14-3-3γ蛋白是細(xì)胞內(nèi)重要的抗凋亡因子，雷公藤甲素可顯著抑制人胰腺癌AsPC-1細(xì)胞內(nèi)14-3-3γ蛋白表達(dá)[30]，但其具體機(jī)制有待進(jìn)一步探究。化療耐藥是胰腺癌治療的主要障礙之一，而雷公藤甲素可通過多種機(jī)制抑制耐藥胰腺癌(CPC)細(xì)胞株的增殖。鑒于TP非選擇性細(xì)胞毒性作用限制了臨床應(yīng)用，Wang等[31]通過核酸特異性適配體(AS1411)介導(dǎo)的聚合納米載體靶向CPC細(xì)胞，避免TP作用于健康組織。結(jié)果顯示S1411促進(jìn)TP在腫瘤組織中選擇性積累，而且經(jīng)靶向給藥的PaCa-2細(xì)胞荷瘤小鼠壽命比經(jīng)吉西他濱給藥的小鼠明顯延長(zhǎng)。同時(shí)，Zhao等[32]通過使用STRING數(shù)據(jù)庫(kù)來構(gòu)建25個(gè)靶基因的蛋白質(zhì)相互作用網(wǎng)絡(luò)，發(fā)現(xiàn)雷公藤內(nèi)酯(TL)-纖溶酶原激活物尿激酶(PLAU)可作為PDAC治療的潛在靶標(biāo)，并通過免疫印跡證實(shí)PLAU激活內(nèi)皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化(EMT)的發(fā)生。這提示TL通過抑制PLAU表達(dá)抑制PDAC細(xì)胞增殖和遷移。另?yè)?jù) Ma 等[33]通過TP聯(lián)合吉西他濱(GEM)處理PANC-1細(xì)胞異種移植裸鼠，發(fā)現(xiàn)TP通過抑制TLR4/NF-κB信號(hào)傳導(dǎo)增強(qiáng)胰腺癌PANC-1細(xì)胞對(duì)GEM敏感性。但需指出，TPL在具體哪一轉(zhuǎn)錄或翻譯環(huán)節(jié)降低TLR4表達(dá)值得深入研究。

4 其他

酰胺類和萜類生物堿類等結(jié)構(gòu)類型的化合物也具有良好的抗胰腺癌作用[34]。楝酰胺(Rocaglamide)，由楝科(Meliaceae)植物分離提取出的一類衍生物，具有一定抗癌殺菌活性。Wang等[35]發(fā)現(xiàn)楝酰胺是一種廣泛胰腺癌細(xì)胞系有效抑制劑。通過胰腺癌患者來源腫瘤細(xì)胞建立異種移植瘤模型，結(jié)果發(fā)現(xiàn)楝酰胺明顯降低腫瘤大小，抑制了腫瘤細(xì)胞遷移和侵襲，且在體內(nèi)沒有發(fā)現(xiàn)明顯毒性[36]。另?yè)?jù)研究發(fā)現(xiàn)楝酰胺可通過影響胰腺癌細(xì)胞中線粒體功能抑制腫瘤生長(zhǎng)并促進(jìn)細(xì)胞凋亡。因此楝酰胺有望成為抗胰腺癌藥物的潛能?，F(xiàn)將抗胰腺癌中藥提取物的作用及機(jī)制具體歸納如下(見表1)。

表1 抗胰腺癌中藥提取物的作用及機(jī)制

高三尖杉酯堿(homoharringtonine)和紫杉醇(Paclitaxel)是已被報(bào)道具有優(yōu)良抗胰腺癌效果的萜類生物堿。研究[37]假設(shè)高三尖杉酯堿(HHT)是否可以通過快速耗盡中央蛋白質(zhì)組的多個(gè)短壽命關(guān)鍵成員(例如PSMD11(26S蛋白酶體非ATPase調(diào)節(jié)亞基))抑制蛋白質(zhì)合成，進(jìn)而誘導(dǎo)胰腺癌細(xì)胞凋亡。結(jié)果發(fā)現(xiàn)高三尖杉酯堿通過激活MEK1/ERK1/2信號(hào)通路快速誘導(dǎo)PSMD11或其他急性凋亡抑制劑蛋白合成。這表明HHT可能對(duì)胰腺癌的靶向治療具有重要意義。紫杉醇從紅豆杉的樹皮中分離純化而得，現(xiàn)已作為抗癌藥物廣泛應(yīng)用于臨床。新近發(fā)表在Lancet的三期臨床試驗(yàn)表明[38]，2015～2018年共107名患者接受nab-紫杉醇聯(lián)合吉西他濱治療，與對(duì)照組相比生活質(zhì)量得到明顯提高。盡管紫杉醇聯(lián)合其他抗腫瘤藥物可以顯著改善晚期胰腺癌預(yù)后，但化學(xué)抗藥性的存在仍然導(dǎo)致不良臨床后果出現(xiàn)。

大黃素為蓼科植物虎杖的干燥根莖和根，對(duì)多種惡性腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移有直接抑制作用。Li等[39]采用Western blot法分析EMT的發(fā)生，逆轉(zhuǎn)錄定量聚合酶鏈反應(yīng)法檢測(cè)胰腺腫瘤細(xì)胞(SW1990)中miR-1271和E-CADHERIN相關(guān)標(biāo)記的表達(dá)，發(fā)現(xiàn)大黃素通過增加miR-1271的表達(dá)抑制胰腺癌EMT發(fā)生和侵襲。另?yè)?jù)研究發(fā)現(xiàn)大黃素可通過改變TGF-β/SMAD通路活性和與血管生成相關(guān)的miR-20b，miR-155和miR-210活性抑制胰腺癌血管生成[40]。但大黃素抑制胰腺癌發(fā)展的具體作用機(jī)制仍未完全闡明。

5 展望

中藥提取物在胰腺癌治療中具有重要的作用。但目前針對(duì)癌細(xì)胞本身的中醫(yī)治療干預(yù)仍進(jìn)展緩慢。首先，中藥提取物作用的多靶點(diǎn)機(jī)制有待繼續(xù)闡明；其次，中藥提取物相較中藥來說，成分單一，雖易于研究提取物藥物作用胰腺癌機(jī)制，但同時(shí)也不得不忽略中藥其他復(fù)雜的成分協(xié)同作用胰腺癌的網(wǎng)絡(luò)調(diào)控機(jī)制。

在多酚類化合物中，進(jìn)一步研究白藜蘆醇的靶點(diǎn)NAF-1與miR-200的上下游調(diào)控關(guān)系對(duì)明確白藜蘆醇作用機(jī)制有著至關(guān)重要的作用。在酮類化合物中，黃芩素通過阻滯人胃癌細(xì)胞在S周期，降低ICAM-1、MMP9、MMP2的mRNA和蛋白表達(dá)水平,而上調(diào)TIMP2 的mRNA和蛋白表達(dá)[48]。另?yè)?jù)Lu等[42]通過納米沉淀技術(shù)制備基于吉西他濱和黃芩素的靶向納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體(HA-GEM-BCL NLC)，共同遞送藥物并靶向癌細(xì)胞。結(jié)果顯示在荷瘤鼠胰腺癌模型中觀察到體內(nèi)抗腫瘤作用。把黃岑素作為靶向標(biāo)準(zhǔn)化療的藥物，這提示黃岑素具有潛在的研究?jī)r(jià)值。作為從苦參中分離得到的一種天然類黃酮苷，三葉豆紫檀苷(Trifolirhizin)通過激活A(yù)MPK/mTOR通路誘導(dǎo)自噬，在體內(nèi)和體外均對(duì)結(jié)直腸癌(Colorectal cancer,CRC)的外源性凋亡有積極作用[49]。因此，三葉豆紫檀苷介導(dǎo)的促進(jìn)自噬作用也可能稱為一種非常有前途的胰腺癌治療策略。

也有研究表明,被高良姜素處理后的宮頸癌細(xì)胞抗凋亡蛋白Bcl-2表達(dá)下調(diào),促凋亡蛋白BAX表達(dá)上調(diào)，提示高良姜素對(duì)腫瘤細(xì)胞作用具有多靶點(diǎn)作用，這可能為胰腺癌的凋亡機(jī)制提供研究意義[43,50]。聯(lián)合三葉豆紫檀苷和小白菊內(nèi)酯是否具有更好的抗胰腺癌增殖作用也仍有待進(jìn)一步研究。另?yè)?jù)研究發(fā)現(xiàn)木犀草素可能通過PI3K/AKT這一信號(hào)通路抑制甲狀腺乳頭狀癌TPC-1細(xì)胞侵襲遷移能力，這也為胰腺癌研究提供新的思路[51]。

綜上所述，中藥提取物通過多通路、多靶點(diǎn)對(duì)胰腺癌治療發(fā)揮作用，但具體機(jī)制仍需進(jìn)一步闡明，如黃岑素可通過Hedgehog通路、Shh信號(hào)通路部分靶標(biāo)以及組織細(xì)胞周期延緩胰腺癌進(jìn)展。雖符合中藥“多途徑、多成分、多靶點(diǎn)”相互作用的特點(diǎn)，但多數(shù)研究只簡(jiǎn)單羅列對(duì)照組與治療組的治療方案與結(jié)果的差異，缺乏理論基礎(chǔ)和更深一步的作用機(jī)制的研究。疫情當(dāng)前，中藥提取物的研究面臨新的機(jī)遇與挑戰(zhàn)，研發(fā)還要加強(qiáng)技術(shù)創(chuàng)新，還需結(jié)合前沿?zé)衢T研究，突破關(guān)鍵技術(shù)瓶頸，建立適合我國(guó)中藥特色的關(guān)鍵技術(shù)群系，探究中藥提取物抗癌作用與其化學(xué)結(jié)構(gòu)之間的相關(guān)機(jī)制。同時(shí)，還需加強(qiáng)成藥性評(píng)價(jià)和新藥成果的轉(zhuǎn)化研究，不斷提高中藥提取物的轉(zhuǎn)化效率。才能更好地推動(dòng)中醫(yī)藥在臨床治療胰腺癌中的發(fā)展。