崔自強(qiáng) 竇劍 高慶軍 趙鑫 高峰 姜翀弋 曹經(jīng)琳 王巍

1河北醫(yī)科大學(xué)第三醫(yī)院肝膽外科，石家莊 050051；2河北醫(yī)科大學(xué)第三醫(yī)院病理科，石家莊 050051；3復(fù)旦大學(xué)附屬華東醫(yī)院普外科，上海 200040；4復(fù)旦大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院胰腺外科，上海 200032

胰腺癌惡性程度高，預(yù)后極差，且發(fā)病率和死亡率均呈上升趨勢。人表皮生長因子受體2(human epidermal growth factor receptor 2，HER2)為表皮生長因子受體家族的二號成員，是具有酪氨酸蛋白激酶活性的跨膜蛋白[1]。HER2是細(xì)胞生長、分化及存活的重要調(diào)節(jié)基因。有研究證明，HER2在乳腺癌等多種實(shí)體腫瘤中過表達(dá)，導(dǎo)致惡性腫瘤發(fā)生，且預(yù)示患者預(yù)后差[2]。但HER2在胰腺癌中的表達(dá)及其與患者預(yù)后的關(guān)系尚不明確。本研究檢測PDAC患者腫瘤組織HER2的表達(dá)，探討HER2的表達(dá)與胰腺癌發(fā)展及預(yù)后的關(guān)系。

材料與方法

一、胰腺組織標(biāo)本

收集2001年1月至2012年12月間上海復(fù)旦大學(xué)附屬華東醫(yī)院病理科存檔的PDAC組織石蠟標(biāo)本109例，其中男性67例，女性42例，年齡35～82(61.7±10.1)歲，中位年齡63歲。納入標(biāo)準(zhǔn)：(1)行胰腺癌根治性手術(shù)；(2)病理診斷為PDAC；(3)患者術(shù)前未行放化療；(4)腫瘤無遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移；(5)癌腫未侵犯腹腔干或腸系膜上動脈；(6)無圍手術(shù)期死亡。另收集上海復(fù)旦大學(xué)附屬華東醫(yī)院病理科存檔的正常胰腺組織石蠟標(biāo)本27例作為對照組。

患者出院后通過門診復(fù)查及電話隨訪了解其病情發(fā)展，94例獲得預(yù)后結(jié)局，隨訪截止日為2020年12月?；颊叩纳嫫诙x為入組時(shí)間至死亡時(shí)間或隨訪終止時(shí)間。

二、胰腺癌組織HER2蛋白表達(dá)檢測

所有標(biāo)本常規(guī)切片，厚度為4 μm，采用免疫組織化學(xué)Envision二步染色法檢測胰腺組織HER2蛋白表達(dá)，步驟嚴(yán)格按試劑盒說明書進(jìn)行。兔抗人HER2抗體、GT1009系列抗體稀釋液和GTVisionⅢ抗鼠/兔通用型檢測試劑盒均購自DAKO公司。由兩名病理科醫(yī)師獨(dú)立閱片，參考Hercep Test評分判定標(biāo)準(zhǔn)[3]，根據(jù)細(xì)胞膜染色程度和陽性細(xì)胞占比進(jìn)行評定。細(xì)胞膜染色陽性細(xì)胞占比<10%為陰性(-)；細(xì)胞膜呈淡黃色，占比≥10%為弱陽性(+)；細(xì)胞膜呈黃色，占比≥10%為陽性(++)；細(xì)胞膜呈棕黃色，占比≥10%為強(qiáng)陽性(+++)。陽性和強(qiáng)陽性定義為過表達(dá)。

三、統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

結(jié) 果

一、PDAC組織與正常胰腺組織HER2蛋白表達(dá)

109例PDAC組織中32例(29.4%)HER2蛋白表達(dá)為-，39例(35.8%)+，28例(25.7%)++，10例(9.2%)+++，過表達(dá)率為34.9%(圖1)。27例正常胰腺組織中，HER2蛋白表達(dá)為-或+，無過表達(dá)者。PDAC組織HER2過表達(dá)率顯著高于正常胰腺組織，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=13.063，P=0.000)。

注：PDAC為胰腺導(dǎo)管腺癌；HER2為人表皮生長因子受體2圖1 PDAC組織HER2蛋白陰性(1A)、弱陽性(1B)、陽性(1C)、強(qiáng)陽性(1D)表達(dá)(免疫組織化學(xué) ×100)

二、HER2蛋白表達(dá)與PDAC臨床病理特征的相關(guān)性

HER2蛋白過表達(dá)與患者年齡顯著相關(guān)，≥65歲的PDAC患者顯著多于<65歲患者，而與患者性別、腫瘤部位、分化程度、T分期、N分期、神經(jīng)侵犯和切緣陽性均無關(guān)(P值均>0.05，表1)。

三、HER2表達(dá)與PDAC患者術(shù)后生存期的相關(guān)性

單因素Cox比例風(fēng)險(xiǎn)分析顯示，手術(shù)切除標(biāo)本切緣陽性及HER2表達(dá)與PDAC患者術(shù)后生存期相關(guān)，而與患者性別、年齡及腫瘤部位、分化程度、T分期、N分期、神經(jīng)侵犯等均無關(guān)(表2)；多因素Cox比例風(fēng)險(xiǎn)分析顯示，手術(shù)切除標(biāo)本切緣陽性、HER2表達(dá)是影響PDAC患者生存期的預(yù)后因素(表3)。Kaplan-Meier法生存分析顯示，HER2表達(dá)+++患者的術(shù)后中位生存期為128.43個(gè)月，HER2表達(dá)-、+、++的患者術(shù)后中位生存期為21.53個(gè)月，HER2表達(dá)+++組患者的生存期明顯長于HER2表達(dá)-～++組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.038，圖2)。

表1 HER2蛋白表達(dá)水平與胰腺導(dǎo)管腺癌患者臨床病理特征的關(guān)系[例(%)]

表2 94例胰腺導(dǎo)管腺癌患者術(shù)后生存期的單因素分析

表3 94例胰腺導(dǎo)管腺癌患者術(shù)后生存期的多因素分析

注：PDAC為胰腺導(dǎo)管腺癌；HER2為人表皮生長因子受體2圖2 PDAC患者HER2不同表達(dá)水平的術(shù)后生存曲線

討 論

HER2基因最早由Shih等[4]提出，定位于人17號染色體長臂上，分子質(zhì)量約為185 000，是具有酪氨酸蛋白激酶活性的跨膜蛋白[1]。在特定條件下，過度表達(dá)的HER2可形成二聚體并發(fā)生自身磷酸化，進(jìn)而激活Ras蛋白，通過TPK-Ras-MAPK途徑，導(dǎo)致基因轉(zhuǎn)錄或關(guān)閉，最終調(diào)節(jié)細(xì)胞生長、增殖和分化[2]。因此，HER2在很多實(shí)體腫瘤的發(fā)生和發(fā)展過程中扮演著重要的角色。曲妥珠單抗通過抑制乳腺癌中HER2二聚體的形成，從而發(fā)揮抑制腫瘤生長的作用[5]。HER2的規(guī)范化檢測為乳腺癌的治療帶來了革命性的改變。鑒于胰腺癌的高度惡性和有限的臨床干預(yù)，且有關(guān)胰腺導(dǎo)管腺癌HER2表達(dá)及其與預(yù)后關(guān)系的國內(nèi)外臨床研究較少，本研究檢測HER2蛋白在接受根治性切除術(shù)的PDAC患者標(biāo)本中表達(dá)情況，并分析HER2表達(dá)與患者預(yù)后的關(guān)系。

本研究發(fā)現(xiàn)，109例PDAC的HER2蛋白過表達(dá)率為34.9%，而在27例正常胰腺組織中過表達(dá)率為0。PDAC組織中HER2過表達(dá)率顯著高于正常胰腺組織，提示HER2表達(dá)在PDAC的發(fā)展過程中可能起重要作用，HER2可作為胰腺正常組織和PDAC組織鑒別的標(biāo)志物。

本研究結(jié)果顯示，HER2表達(dá)與年齡相關(guān)，其中≥65歲的PDAC患者HER2過表達(dá)率顯著高于<65歲患者(P=0.043)，此一發(fā)現(xiàn)為首次報(bào)道。Komoto等[6]對129例無遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移、無腹腔播散的PDAC根治性切除腫瘤標(biāo)本進(jìn)行研究，認(rèn)為HER2表達(dá)與T分期相關(guān)，但本研究的T分期與HER2表達(dá)未見明顯相關(guān)性。

國內(nèi)外關(guān)于胰腺癌HER2表達(dá)與患者預(yù)后關(guān)系的研究較少，且兩者的關(guān)系存有爭議。Lei等[3]研究顯示，HER2蛋白過表達(dá)者占47.6%，HER2蛋白過表達(dá)胰腺癌患者生存期僅為(7.3±3.8)個(gè)月，而HER2蛋白不表達(dá)和正常表達(dá)患者生存期長達(dá)(19.1±11.7)個(gè)月，兩組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，胰腺癌患者HER2蛋白過表達(dá)提示預(yù)后差。Koka等[7]對308例胰腺癌患者研究發(fā)現(xiàn)，僅48例HER2過表達(dá)，約占16%，HER2過表達(dá)者生存期為11個(gè)月，不過表達(dá)者生存期為7個(gè)月，結(jié)果與上述研究相反。Ata等[8]檢測30例胰腺癌組織HER2表達(dá)，并分析其與預(yù)后的關(guān)系，認(rèn)為HER2過表達(dá)對胰腺癌患者預(yù)后無預(yù)測價(jià)值。本研究單因素生存分析顯示，HER2表達(dá)+ ++者術(shù)后中位生存時(shí)間為128.43個(gè)月，HER2表達(dá)為-、+、+ +患者術(shù)后中位生存時(shí)間為21.53個(gè)月，PDAC組織HER2表達(dá)+ ++患者術(shù)后生存時(shí)間明顯長于HER2表達(dá)-～+ +患者(P=0.038)。多因素COX比例風(fēng)險(xiǎn)分析也顯示HER2表達(dá)+ ++的PDAC患者術(shù)后生存時(shí)間較HER2表達(dá)-～+ +患者顯著延長，HER2表達(dá)是影響PDAC預(yù)后的獨(dú)立因素，提示HER2可考慮作為評價(jià)PDAC生物學(xué)行為及評估預(yù)后的指標(biāo)。

利益沖突所有作者均聲明不存在利益沖突